1、1从皂角中皂角苷的提取和纯化2012 级生物科学四班林凯纯 135604949282012 级生物技术赵永亮 15521037062摘 要皂荚（Gleditsia sinensis Lam.），又名皂荚树、皂角等，属蔷薇目，豆科落叶乔木或小乔木。所结果实为皂荚果，皂荚果皮含有丰富的皂角苷，皂角苷是洗涤剂、乳化剂等洗涤用品的天然材料，皂角苷是非离子型表面活性剂，是一种优良的天然表面活性剂，极易溶于水，洗洁性好，温和无刺激，无害残留物少，对人体伤害几乎为零，目前已经广泛应用于日化、医药等方面。本实验将利用回流提取及系统溶剂萃取法从皂角中提取皂角苷，并利用香草醛 硫酸显色并利用分光光度计测定提取效率
2、。关键字：皂角苷、提取、纯化1.前言皂角苷是非离子表面活性剂、广泛应用于洗涤剂、乳化剂、是应用广泛，性质温和的天然产物之一，有很高的应用价值，工业上有比较成熟的提取方法。本实验小组想了解并运用较为简易的提取天然皂角苷的方法，并将产物纯化，计算本方法的提取的提取效率。2.实验目的： 1.锻炼生化实验技能2.熟悉分离提取纯化基本方法3 从皂角中提取皂角苷4 测算皂角中提取皂角苷的提取效率23.实验原理3.1皂角苷的提取本实验应用回流提取法，是应用于大多数有机溶剂沸点较低的特点，通过水域蒸馏，使溶剂气化，冷却后液化回流提取筒，从而不断从皂荚中提取成分，这种方法器材要求简单，操作方便，提取连续性好，安
3、全系数高。3.2皂角苷的纯化本实验应用系统溶剂萃取法，皂角苷在含水丁醇或戊醇中溶解度大，且能与水分成两相，可利用此性质从皂角苷水溶液中用丁醇或戊醇提取皂角苷，借与亲水性大的汤、蛋白质等分离，在初步提取后，回收溶剂，将残渣溶于水，滤除不容物，再利用皂角苷不溶于乙醚等强亲脂性的有机溶剂作两相萃取，将油脂、脂溶性色素除去。4.实验设备索式提取器（可自行组装圆底烧瓶、冷凝管、胶管、止水夹等）、恒温水浴锅、烧杯、电热炉、玻璃棒、试管、漏斗、滤纸、温度计、电子天平、分光光度计、比色杯5.实验材料及试剂5.1实验材料皂角粉（皂荚研磨制成）5.2试剂乙醇、正丁醇、乙醚、77%浓硫酸、香草醛、纯水、皂角苷标准品
4、6.实验操作步骤6.1皂角苷提取用滤纸制作圆柱状滤纸筒,称取 10g 皂角粉,装入滤纸筒中,将开口端折叠封住,放入提取筒中.将 150 ml 圆底烧瓶安装于水浴锅上,放入 2 粒沸石,量取 95%乙醇 100ml,从提取筒中倒入烧瓶,安装好索氏提取装置,打开电源,加热回流 2小时. 实验时能够观察到,随着回流的进行,当提取筒中回流下的乙醇液的液面稍高于索氏提取器的虹吸管顶端时,提取筒中的乙醇液发生虹吸并全部流回到烧瓶内.然后再次回流,虹吸,记录虹吸次数.虹吸 5-6 次后,当提取筒中提取液颜色3变得很浅时,说明被提取物已大部分被提取,停止加热,移去水浴锅,冷却提取液。6.2皂角苷的纯化用乙醇提
5、取后，回收溶剂（将乙醇蒸干、在通风厨进行）将残渣溶于水，滤去不溶物，检查分液漏斗是否漏水，确认不漏水后，将水溶液加入分液漏斗中，后加入 50ml 乙醚，震荡，静置分层，弃去油层，留下液层，在分液漏斗内加入 50ml 正丁醇，震荡，静置分层，弃去水层，收集正丁醇溶液，蒸干，得到粗皂角苷，重复 2-3 次以上得到精致皂角苷粉产物。6.3建立标准曲线取油茶皂角苷标准品 20 mg，用乙醇溶解并移至 10 ml 容量瓶中，稀释至10 ml，取此液 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，分别置于带塞试管中，并加水至溶液体积均为 0.5 ml，精密加入 8%香草醛溶液 0.5 ml，于冰水
6、中冷却加入 77%硫酸溶液 4 ml，摇匀，混台物于 60 加热 1 5 min，然后于冰水中冷却 10 min，取出置于室温下，以试剂空白为参比溶液，用 1 cm 比色皿在波长550nm 处测定吸光度，以吸光度与标准溶液质量浓度 P(mgml)，根据测得数据建立标准曲线。6.4皂角苷纯度测定取提取的皂角苷 1mg 加入置于带塞试管中，并加水至溶液体积均为 0.5 ml，精密加入 8%香草醛溶液 0.5 ml，于冰水中冷却加入 77%硫酸溶液 4 ml，摇匀，混台物与标准物同时于 60 加热 1 5 min，然后于冰水中冷却 10 min，取出置于室温下。在 550nm 波长下测定吸光度，根据
7、所得标准曲线方程得出皂角苷纯度。6.5皂角苷提取效率计算根据所得数据计算皂角苷的提取效率7.结果及计算提取效率= 10%M5AA根据标准曲线测得浓度M提取的得到的皂角苷质量48.注意事项8.1提取纯化1.提取过程中涉及到有机溶剂的浓缩，回收，应在通风橱或通风良好的地方进行提取纯化。2.实验用量较少且涉及产率计算，实验室用精确度较高的电子天平，最大限度的减小误差小8.2建立标准曲线1.本实验应用香草醛-硫酸法显色皂角苷，香草醛有毒性应小心处理，硫酸浓度为 77%，浓度较高，操作时应小心，且配置时应在通风橱内进行。9.费用预算项目 单价 数量 价格皂角苷标准品 67/瓶（50g） 一瓶 67香草醛 25/瓶 一瓶 25总计 2 92参 考 文 献1 山人茶皂甙的新用途中国茶叶1 994(5)：28292 唐明远植物素 9501 的提取及杀钉螺试验湖南农业大学学报，1997，83(4)：3593633 章观德人参的分析药学学报，1 980(3)：1751814 陈边峰皂荚总皂甙的纯化与含量测定中草药，1995(8)：4014O25 姜勤茶皂甙定量方法的研究日用化学工业，1989(4)：41436 朱金芬茶皂素定量方法的研究中国茶叶，1 983(4)；131 57 邵春杰人参精中皂甙含量的测定药学通报，1983(12) 3032附 录5
