甜味剂--糖精钠的测定.docx

1、甜味剂-糖精钠的测定糖精及其钠盐是使用较广的甜味剂之一，它的化学名是邻磺酰苯亚胺（O-sulfobenzolc acidimide）。分子式为 C7H5SO3N。白色结晶或粉状，无臭或微有酸性芳香气，在水中溶解度极小，味极甜。糖精钠进入人体后不分解，不供给热能，无营养价值，随尿排除体外。测定糖精的方法较多，有薄层色谱法、纳氏比色法、硫代二苯胺比色法及紫外分光光度法等，下面简要介绍两种测定方法。一 紫外分光光度法1. 原理样品经处理后，在酸性条件下用乙醚提取食品中的糖精钠，经薄层分离后，溶于碳酸氢钠溶液中，于波长 270nm 处测定吸光度，与标准液比较定量。2. 试剂与仪器(1) 2%碳酸氢钠溶

2、液(2) 4%氢氧化钠溶液(3) 6mol/LHCL 溶液(4) 乙醚（不含过氧化物）(5)10%硫酸铜(6) 无水硫酸钠(7) 0.02mol/L 氢氧化钠(8) 硅胶 GF254(9) 聚酰胺，200 目(10) 糖精钠标准溶液(11) 展开剂：苯-乙酸乙酯-乙酸 （12:7:3），硅胶薄层用。(12) 展开剂：正丁醇-浓氨水-无水乙醇 （7:1:2），聚酰胺薄层用(13) 显色剂：0.04%溴甲酚紫的 50%乙醇溶液，用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调至 PH 值为 8(14) 紫外分光光度计(15) 薄层板 10*20cm；展开槽(16) 微量注射器3.测定方法(1) 样品提取1)饮料

3、、冰棍、汽水类：取 10ml 均样置 100ml 分液漏斗中，加 2ml6mol/L 盐酸，用 30、20、20ml 乙醚提取三次。合并乙醚提取液，用 5ml 盐酸酸化的水洗涤一次，以洗去水溶性杂质，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发干乙醚。加 20ml 乙醇溶解残渣，密封保存，备用。2)酱油、果汁、果酱、乳等：称取 20.0g 或吸取20.0ml 均样置 100ml 容量瓶中，加水至约 60ml，加20ml10%硫酸铜溶液，混匀,再滴加 4.4ml4%氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置 30min 后过滤，取滤液 50ml 置 150ml 分液漏斗中，以下同 1)中后序操作。3)固

4、体果汁粉等：先称取 20.0g 磨碎的均样，置200ml 容量瓶中，加 100ml 水，加温使其溶解，冷却后再按上述方法进行提取。4)糕点、饼干等蛋白质、脂肪含量高的样品：均应采用透析法处理，使分子量较小的糖精钠渗入溶液中，以消除蛋白质、淀粉、脂肪等的干扰。称取捣碎、混匀的样品 25.0g 置透析玻璃纸内，置于大小合适的烧杯中。加 50ml0.02mol/L 氢氧化钠溶液于透析膜内，充分混合，使样品成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有 200ml0.02mol/L 氢氧化钠的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。量取 125ml 透析液（相当于 12.5g 样品），加约0.4ml6mol/L 盐酸，使成中

5、性，加 20ml 10%硫酸铜混匀，加 4.4ml4%氢氧化钠，混匀，静置 30min，过滤。取 120ml 滤液置 250ml 分液漏斗中，以下同 1)中后序操作。(2) 薄层板制备薄层板可以是硅胶 GF254或聚酰胺薄层板，使用时选用一种。 硅胶 GF254薄层板：称取 1.4g 硅胶 GF254，加4.5ml0.5%CMC-Na 溶液于小研钵中研匀，倒在玻璃板上，涂成 0.25-0.30mm 厚的薄层板，稍干后，在 110下活化 1h，取出后置于干燥器内备用。 聚酰胺薄层板：称取 1.6g 聚酰胺，加 0.4g 可溶性淀粉，加约 15ml 水，研磨 3-5 分钟，使其均匀即涂成 0.25

6、-0.30mm 厚的 10*20cm 薄层板，室温下干燥，在 80烘箱中干燥 1h，置干燥器内备用。(3) 点样在薄层板下端 2cm 处中间，用微量注射器点样，将200-400 微升样液点成一横条状，条的右端 1.5cm处，点 10 微升糖精钠标准溶液 B，使成一个小圆点。(4) 展开将点好的薄层板放入盛有展开槽中，展开剂液层约 0.5cm，并预先已达到饱和状态。展开至10cm，取出薄层板，挥发干。硅胶 GF254板可直接在波长 254nm 紫外线灯下观察糖精钠的荧光条状斑。把斑点连同硅胶 GF254或聚酰胺刮入小烧杯中，同时刮一块与样品条状大小相同的空白薄层板，置于另一烧杯中做对照，各加 5

7、.0ml 2%碳酸氢钠，于 50水浴中加热助溶，移入 10ml 离心管中，离心分离（3000r/min）20min，取上清液备用。(5) 标准曲线绘制吸取 0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml 糖精钠标准液 A，分别置于 100ml 容量瓶中，各以 2%碳酸氢钠溶液定容，于 270nm 波长处测定吸光度，绘制标准曲线。(6) 样品测定将经薄层分离的样品离心液及试剂空白液于 270nm 处测定吸光度，从标准曲线上查出相应浓度。结果计算如下：糖精钠（g/Kg 或 g/l）=(（C 1-C0）*V 1*V3)/(W*V2)式中：C 1：测定用样液中糖精钠含量 mg/ml。C0：空白液

8、中糖精钠含量 mg/mlV1：溶解样品残留物加入乙醇的体积 ml。V2：点样用样品乙醇溶液的体积 ml。V3：溶解刮下的糖精钠时所用 2%碳酸氢钠溶液体积ml。W：样品残留物相当的原样品重量 g 或 ml。4. 注意事项(1)样品提取时加入 CuSO4及 NaOH 用于沉淀蛋白质，防止用乙醚萃取发生乳化，其用量可根据样品情况按比例增减。(2)样品处理液酸化的目的是使糖精钠转化成糖精，以便用乙醚提取，因为糖精易溶于乙醚，而糖精钠难溶于乙醚。(3)富含脂肪的样品，为防止用乙醚萃取糖精时发生乳化，可先在碱性条件下用乙醚萃取脂肪，然后酸化，再用乙醚提取糖精。(4)对含 CO2的饮料，应除 CO2，否则

9、将影响样液的体积。(5)聚酰胺薄层板，烘干温度不能高于 80，否则聚酰胺变色。(6)在薄层板上的点样量，应估计其中糖精含量在 0.1-0.5mg。二 纳氏比色法1.原理糖精钠在酸性溶液中经有机溶剂萃取，经过消化变成铵盐，与纳氏试剂作用生成一种黄色物质，根据颜色的深浅与标准比较定量，反应式如下：2K2HgI4+4KOH+NH4+NH 2Hg2OI+7KI+3H2O+K+2.试剂（1）硫酸溶液（V/V）。（2）纳氏试剂：（3）硫酸铵标准溶液3.操作方法（1）样品中糖精钠的提取：1) 含有二氧化碳的液体样品2) 含有酒精的液体样品3) 乳及乳制品4) 含蛋白质、脂肪、淀粉的样品（2）样品消化及分析（3）标准曲线的绘制：准确吸取标准硫酸铵溶液0.0、.0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 毫升，分别置于 25ml 纳氏比色管中，各加 15ml 无氨蒸馏水，再加纳氏试剂 5ml，加水至刻度摇匀。静置 10 分钟，以 2cm 比色杯置分光光度计 430nm 处测定吸光度，根据结果绘制标准曲线：4.注意事项（1） 测定溶液中凡能引起浑浊的物质，可用酒石酸钾钠掩蔽。（2）样品经消化后，及时进行测定（3）样品酸化处理，目的是将糖精钠转化为糖精，以便用乙醚提取（4）对富含脂肪的样品，可先在碱性条件下用乙醚萃取脂肪，然后酸化，再用乙醚提取糖精