实验D 防腐剂测定.doc

1、实验 9（序号待统编） 紫外分光光度法测定雪碧中苯甲酸的含量一、目的要求1、掌握用紫外可见分光光度法测定防腐添加剂的原理和方法2、加深对蒸馏分离不同有机物的方法理解和操作技术的掌握二、原理将样品酸化后进行蒸馏，苯甲酸随蒸汽馏出。收集馏出的馏分，加入强氧化剂将馏出液中的有机物完全氧化分解，再次蒸馏，并用碱吸收得苯甲酸钠。用紫外分光光度计于225nm处进行测定。采用标准曲线法并计算样品中苯甲酸的含量。三、仪器与试剂紫外分光光度计，蒸馏装置。NaOH溶液：0.1molL -1, 0.01molL-1；K 2Cr2O7溶液：0.03333molL -1；H 2SO4溶液：2 molL-1；苯甲酸标准溶

2、液：100mg/L，称取 0.1000g苯甲酸（经 105烘干）于 250mL烧杯中，加入 0.1molL-1NaOH100mL，搅拌溶解后，转移入 1000mL容量瓶中，用水定容；Na2SO4（无水） ；H 3PO4。四 实验步骤1、标准曲线的绘制（1） 、移取 50.00mL苯甲酸标准液于 250mL蒸馏瓶中，加 H3PO41mL，Na 2SO4（无水）20g，水 70mL，玻璃珠（防爆沸）3-4 粒进行蒸馏。用 50mL容量瓶（预先加有 5mL0.1molL-1NaOH）收集馏出液。当馏出液约为 40mL时，停止蒸馏，用少量水吹洗冷凝器，洗液并入容量瓶，最后用水定容。（2） 、移取第一次

3、馏出液于另一个 250mL蒸馏瓶中，加入 0.03333 molL-1 K2Cr2O7溶液25mL，2molL -1H2SO4溶液 6.5mL，连接冷凝装置，在水浴上加热约 10min，冷却，加入H3PO41mL，Na 2SO4（无水）20g，水 40mL，玻璃珠（防爆沸）3-4 粒进行蒸馏。以下操作同（1） 。（3） 、移取第二次馏出液 2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL，分别置于 50mL容量瓶中，用 0.01molL-1 NaOH溶液定容。以 0.01molL-1 NaOH溶液为参比，在 225nm处测定吸光度，绘制工作曲线。2.样品的测定（1）样品溶液的制备准确称取

4、 8-10g均匀的样品置于 250mL蒸馏瓶中，以下操作按标准曲线的（1）和（2）进行。（2）移取 5-20mL试样的第二次蒸出液（按样品中苯甲酸含量的多少选择试样第二次蒸出液体积）于 50mL容量瓶中，用 0.01molL-1 NaOH溶液定容。以 0.01molL-1 NaOH溶液为参比，在 225nm处测定吸光度。（3）空白试验：取与样品量同样的水，加入 1molL-1NaOH5mL（不加 H3PO4） ，以下操作同样品测定步骤测定空白试样的吸光度。五 结果计算苯甲酸的含量（CC 0）1000/(m25/50V/501000) (g/kg)式中：C：样品溶液中苯甲酸的含量（mg） ；C

5、0：空白溶液中苯甲酸的含量（mg） ；m：样品质量(g)；V：样品溶液（第二次蒸馏液）体积（mL） 。执笔人：訾言勤实验 10（序号待统编） 可见光分光光度法测定橙汁中山梨酸的含量一、目的要求1、掌握用可见分光光度法测定山梨酸添加剂的原理和方法2、加深对分光光度法测定不同有机物的方法理解和分光光度计操作技术的掌握二 原理山梨酸（或其盐类）在硫酸和重铬酸钾的氧化作用下，产生丙二醛，丙二醛和硫代巴比妥酸作用产生红色化合物，其最大吸收波长在 530nm，在一定浓度范围内，其红色产物的吸光度与丙二醛的浓度成正比。可用分光光度法测定。三 仪器与试剂分光光度计（任一型号） ；25mL 比色管 7支（10m

6、L 处有刻度） 。HCl溶液：1molL -1；NaOH 溶液：1molL -1；重铬酸钾硫酸混合溶液：0.01667molL-1K2Cr2O7溶液和 0.15molL-1H2SO4溶液等体积混合；硫代巴比妥酸溶液：准确称取 0.5g硫代巴比妥酸于 100mL烧杯中，加入 20mL水和 10mL1 molL-1NaOH溶液，搅拌至完全溶解，再加入 11mL1 molL-1HCl溶液，搅拌均匀，转移入 100mL容量瓶中，用水定容。此溶液现配现用（若保存在冰箱中，可保存 2个月） ；山梨酸标准贮备液：200g/mL，称取 0.2000g 山梨酸于 100 mL 烧杯中，用 0.1 molL-1N

7、aOH溶液溶解后，转移入 1000mL容量瓶中，用水定容；山梨酸标准工作液：2.00g/mL，移取 1.00mL山梨酸标准贮备液于 100mL容量瓶中，用水定容。四 标准曲线的绘制移取山梨酸标准工作液 0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL分别置于 6支 25mL比色管中，加入水至约 5mL，再加入 2mL重铬酸钾硫酸混合溶液，在 100水浴中加热7min，立即加入 1.50mL硫代巴比妥酸溶液，继续在水浴中加热 10min，取出，迅速用冷水冷却，用水定容至 10mL，用 1cm比色皿，以试剂空白溶液为参比，于 530nm处测定吸光度，绘制工作曲线。五 样品的测定移取

8、2.00mL橙汁饮料于 25mL比色管中，按标准曲线绘制操作步骤，测定吸光度。六 结果计算样品中山梨酸含量（mg/Kg）=在标准曲线上查得的微 g数（g）/2mL。注：我国食品卫生标准规定：山梨酸及其钾盐的允许添加量为：果酱1g/Kg；果汁类：0.6g/Kg；汽水、汽酒类0.2g/Kg；酱油1g/Kg。七 注意事项苯甲酸的测定过程中，应根据样品中苯甲酸和有机物含量的多少适当增减第一次蒸出液体体积和重铬酸钾溶液用量。执笔人：訾言勤实验 11（序号待统编） 酶促发酵生产 1,6-二磷酸果糖表征及含量的测定一、目的要求1、学会发酵生产 1,6-二磷酸果糖的原理；2、掌握 1,6-二磷酸果糖的分离方法

9、；3、掌握红外光谱法表征 1,6-二磷酸果糖的方法；4、掌握紫外可见分光光度法定量 1,6-二磷酸果糖的方法。二、实验原理1,6-二磷酸果糖是人体代谢过程中重要的中间产物，是一种分子水平的代谢调节剂，具有激活丙酮酸激酶，加速糖酵解，增加 ATP生成；加速钾离子内流，恢复细胞极化状态等生理功能，是治疗心脑血管疾病的良药。1,6-二磷酸果糖一般采用微生物发酵法生产，发酵液中 1,6-二磷酸果糖的提取方法有钙、钡盐沉淀法；离子交换法；有机溶剂提取法，乙醇沉淀法等。本实验应用酵母酶系为催化转化介质，以葡萄糖糖源、磷酸盐为底物，发酵生产 1，6 一二磷酸果糖，发酵液中 1，6 一二磷酸果糖采用钙盐沉淀和

10、有机溶剂结合提取法，研究提取 FDP生产新工艺。沉淀法具有提取率高，操作简单，便于工业化生产等优点。钙盐沉淀法提取 1, 6-二磷酸果糖的工艺流程：滤渣 弃酵母抽提物发酵液 加热 过滤 滤液 加入氯化钙 调 pH 离心分离离心分离 沉淀 酸洗 离心分离 沉淀滤液 滤液 调 pH8.5 过滤 沉淀FDP二钙 干燥 水洗三 试剂与仪器试剂：1,6-二磷酸果糖；葡萄糖；磷酸二氢钠；氯化镁；活性酵母 ；乙醇；氯化钙；氢氧化钠；盐酸；间苯二酚；硫脲；醋酸钡；蒸馏水。仪器：1000mL 试剂瓶；500mL 试剂瓶 3只；500mL 容量瓶 1只；250mL 容量瓶 1只；搅拌器；抽滤机；干燥机；红外光谱仪

11、；紫外可见分光光度计。SHZ- 22 型水浴恒温振荡器；CS 501型超级恒温器； WFX-110 型原子吸收分光光度计。四 实验内容和步骤1 提取 1, 6-二磷酸果糖钙在 500mL蒸馏水中加入 50g葡萄糖，35g 磷酸二氢钠，10g 氯化镁，活性酵母 60g，调节 pH为 6.5，在 30度下发酵 35 个小时。然后将发酵液加热沸腾约 10min，过滤，收集滤液，并用蒸馏水将滤渣反复洗涤两遍，合并滤液。在上面得到的滤液中加入约 50mL浓度为 1.0 molL-1的氯化钙，调节 pH为 8.5,不断搅拌约 0.5小时，过滤，滤渣用 50mL的盐酸洗涤，调溶液的 pH为 1.5，过滤，弃

12、去残渣，在上层清夜中加入氢氧化钠，调节 pH为 8.5，过滤，弃去滤液，干燥，得 1,6-二磷酸果糖钙。2 1,6-二磷酸果糖的定性表征为了表征1,6-二磷酸果糖二钙的结构及确定提取产品的纯度，取微量提取样品与KBr混研磨，用KBr做本底。作红外谱图。文献红外谱图如下：1,6-二磷酸果糖二钙的红外光谱图红外光谱测定结果表明，1,6-二磷酸果糖二钙在 3417nm处有一特征峰，表明分子中存在大量的 O-H基团;1646nm 和 1071nm处为 C-O键的伸缩振动，940nm 处为 C-O-P的伸缩振动峰。样品红外谱图与标准谱图对照，说明提取样品性质和种类。3. 定量条件的选择和测定1,6-二磷

13、酸果糖在浓盐酸中和间苯二酚反应产生紫红色的化合物，在570 nm处有特征吸收峰。取100gmL的1,6-二磷酸果糖溶液1 mL，分别加入浓盐酸7mL，间苯二酚1.5mg，混匀后于80 水浴中加热14min；冷却后于570nm测定吸收值。标准曲线和样品测定：1,6-二磷酸果糖标准溶液(100g/mL )0.2 mL，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL；分别加入间苯二酚1.5mg ，浓盐酸7mL，混匀后于8O水浴加热14 min，冷却后于570 nm测定光吸收值。绘制标准工作曲线，同样条件测定样品，计算1,6-二磷酸果糖含量。五 数据处理1 1,6-二磷酸果糖红外光谱法表征结果； 2 紫外可见分光光度法定量 1,6-二磷酸果糖的分析结果；六 注意事项1 调节 pH为 6.5，在 30度下发酵 35 个小时；2 实验表明酸度对产品得率有很大的影响，酸度控制 pH8.5；3 加入乙醇可以降低溶解度；七 思考题1 为什么能将葡萄糖转化为 1,6-二磷酸果糖？2 如何进行 1,6-二磷酸果糖的定性和定量分析？执笔人：訾言勤