电泳配方.doc

1、SDS-PAGE 配方1. 30% Acry 溶液(4 摄氏度)丙烯酰胺 29.2g N,N-亚甲基双丙烯酰胺 0.8g 定容至 100ml2. 10% SDS（W/V） （室温）SDS 10g 定容至 100ml3. 1.5M Tris-HCl pH 8.8(分离胶缓冲溶液 )（4 摄氏度）Tris 18.15g 用 6N HCl 调制 pH 8.8 定容至 100ml4. 0.5M Tris-HCl, pH 6.8(浓缩胶缓冲溶液 )（4 摄氏度）Tris 6g 用 6N HCl 调制 pH 6.8 定容至 100ml5.上样缓冲液（室温）A 液：（A 液总量 9.5ml） 超纯水 3.5

2、5 ml0.5M Tris-HCl, pH 6.8 1.25 ml甘油（即丙三醇） 2.5ml10% SDS 2.0ml0.5%(W/V)溴酚蓝 0.2ml 用时取 A 液 950ul,加入 50ul -巯基乙醇（即巯基乙醇）样品：上样缓冲液为 1：2 95 加热 4 min 6. 10电极缓冲液 pH8.3 (4 摄氏度)Tris 30.3g甘氨酸 144.0gSDS 10.0g定容至 1000ml（即 1L）注意！不调 pH! 用时，稀释 10 倍，在室温下使用7.10%（W/V） APS (过硫酸铵)100mg 过硫酸铵 加入 1ml 的超纯水明胶酶谱配方1. 1%明胶溶液1g 明胶 6

3、0溶于水中定容至 100ml，4下贮存2. 5上样缓冲溶液50%甘油、5%SDS、0.05%溴酚蓝、250mM Tris-Hcl pH 6.83. 10电极缓冲液Tris 30.3g、甘氨酸 144g、SDS 10g 定容至 1000ml pH 8.3） ；4. 聚丙烯酰胺凝胶电泳贮液：30%丙烯酰胺溶液 丙烯酰胺 29.2g，N,N-亚甲基双丙烯酰胺 0.8g 避光定容到100ml分离胶缓冲溶液 1.5M Tris-HCl pH 8.8浓缩胶缓冲溶液 0.5M Tris-HCl, pH 6.810%SDS 溶液；10%过硫酸铵溶液；5. 2.5% Triton X-100 溶液；6. 染色液

4、90mL 等体积甲醇 (45ml)与水(45ml)混合液加入 10ml 冰乙酸中溶解 0.25g 考马斯亮蓝 R-2507. 脱色液300ml 甲醇，100ml 冰乙酸加水定容至 1000ml8. 明胶酶谱孵育液50mM Tris-HCl，10mM CaCl 2 pH 7.09. 考马斯亮蓝 G-250 染液0.1g 考马斯亮蓝 G-250 溶于 95%乙醇中，加入 100ml 85%浓磷酸加水定容至1000ml10. 10Mm EDTA 二钠溶液分离胶配方（10ml）浓度（%） 水（ml ） 缓冲液 30%Acry 10%SDS4 6.1 2.5 1.3 0.15 5.7 2.5 1.7 0

5、.16 5.4 2.5 2.0 0.17 5.1 2.5 2.3 0.18 4.7 2.5 2.7 0.19 4.4 2.5 3.0 0.110 4.1 2.5 3.3 0.111 3.7 2.5 3.7 0.112 3.4 2.5 4.0 0.113 3.1 2.5 4.3 0.114 2.7 2.5 4.7 0.115 2.4 2.5 5.0 0.116 2.1 2.5 5.3 0.117 1.7 2.5 5.7 0.1注：分离胶缓冲溶液为 1.5M Tris-HCl pH 8.8分离胶： 50ul 10%APS 和 5ul TEMED浓缩胶配方（10ml）浓度（%） 水（ml ） 缓冲液

6、 30%Acry 10%SDS5 5.7 2.5 1.7 0.1注：浓缩胶缓冲溶液为 0.5M Tris-HCl, pH 6.8浓缩胶： 50ul 10%APS 和 10ul TEMED 2.2.1.1 SDS-PAGE 电泳试剂的配制1）30% Acry（m/V）溶液(4)：称取丙烯酰胺 29.2g ，N,N- 亚甲基双丙烯酰胺 0.8g ，超纯水定容至100mL，溶解过程应注意避光，配制完成的溶液倒入试剂瓶中，外套黑色塑料袋避光，4 冰箱保存备用。2）10% SDS（m/V） （室温）：称取 SDS 10g ,采用超纯水溶解定容至 100mL，室温放置。3）1.5mol/L Tris-HC

7、l pH 8.8(分离胶缓冲溶液)（4）：称取 Tris 18.15g，加入 80mL 左右超纯水溶解 Tris，用 6mol/L HCl 将溶液调至 pH 8.8，后用超纯水定容至 100mL，4冰箱保存备用。4)0.5mol/L Tris-HCl，pH 6.8(浓缩胶缓冲溶液)（4）：称取 Tris 6g ，加入约 80mL 左右超纯水溶解，用 6mol/L HCl 调至 pH 6.8，后用超纯水定容至 100mL，4冰箱保存备用。5）5上样缓冲液：8mol/L 尿素，5% SDS，5%巯基乙醇，250mmol/L Tris-HCl(pH7.5)。6） 10电极缓冲液 pH8.3： 称量

8、Tris 30.3g，甘氨酸 144.0g，SDS 10.0g 用超纯水定容至 1000ml（即1L） ，用时稀释 10 倍，在室温下使用。7）10% （w/V）过硫酸铵（APS）：称量 0.1g 过硫酸铵，加入 1mL 的超纯水，震荡混匀，现用现配。8）SDS-PAGE 脱色液：SDS-PAGE 脱色液中含 50%的乙醇，9%的冰乙酸。配制试剂的水选用去离子水。配制时应在通风橱下，冰乙酸有强烈的刺鼻气味。9）SDS-PAGE 染色液：量取 454mL 的 50%的乙醇和 46mL 的冰乙酸，将两者混合均匀即为固定液。称量 0.25g 考马斯亮蓝 R-250 将其溶解于上述 500mL 的固定

9、液中，完成配制后将染色液放入棕色瓶中保存，防止其见光失效，室温保存。10）8% 分离胶配方（10mL）：添加顺序为 4.7mL 的超纯水，2.5mL 的 pH 8.8 的缓冲液，2.7mL 的 30% Acry 溶液，0.1mL 的 10%SDS，震荡混匀，后添加 50L 10% APS 和 5L TEMED，震荡混匀。11）5% 浓缩胶配方（10mL）：添加顺序为 5.7mL 的超纯水，2.5mL 的 pH 8.8 的缓冲液，1.7mL 的 30% Acry 溶液，0.1mL 的 10%SDS，震荡混匀，后添加 50L 10% APS 和 10L TEMED，震荡混匀。12）20mmol/L

10、 pH 9 Tris-HCl 缓冲溶液（含 10 mmol/L CaCl2）的配置：准确称取 2.42g Tris，1.11g 无水 CaCl2，溶于约 800ml 的去离子水中，用6mol/L 的 HCl 调溶液 pH 至 9，再用去离子水将溶液定容至 1L。2.2.1.2 明胶酶谱配方1）1% 明胶溶液：称取 0.1g 明胶，在 60的水浴条件下溶于超纯水中，定容至 10mL。4 下贮存，放置时间不超过一周。2）2.5% Triton X-100 溶液：称量 25g Triton X-100，溶解于离子水中，最后定容至 1L。3）明胶酶谱染色液：量取 90mL 等体积甲醇(45mL)与水(45mL) 混合液加入 10mL 冰乙酸中溶解0.25g 考马斯亮蓝 R-250。试剂配好后倒入棕色瓶中室温保存。4）明胶酶谱脱色液：量取 300mL 甲醇，100mL 冰乙酸加水定容至 1000mL。