临床检验技师微生物检验(2019)讲义第十四章肠杆菌科及其检验.doc

1、-_第十四章 肠杆菌科及检验概述和通性分类根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。大多数属于正常菌群（条件致病菌）。引起腹泻和肠道感染：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属等。导致院内感染：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属等。概述和通性生物学特性形态与结构形态：杆菌。染色：G -。特殊结构：多数有周鞭毛，能运动。志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛。均不形成芽胞，少数菌属（埃希菌属和克雷伯菌属）可形成荚膜。培养特性营养要求：不高。气体环境：需氧或兼性厌氧。菌落特征：普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长，并形成中等大小的菌落

2、，湿润光滑。-_抗原变异：包括菌落 S-R 变异和鞭毛 H-O 变异。表现为耐药性或生化反应性质的改变。抵抗力：不强。加热 60，30 分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。概述和通性微生物检验及鉴定标本采集形态学检查：革兰阴性杆菌。分离培养：将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离。克氏双糖铁琼脂（KIA）培养基：葡萄糖/乳糖发酵；产气；硫化氢试验。动力-吲哚-尿素（MIU）培养基生化反应：糖类发酵试验 触酶试验 氧化酶试验 硝酸盐还原试验分解葡萄糖产酸或产酸产气 + 大部分- +用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌鉴别；

3、用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群；选择生化反应进行属种鉴别；用诊断血清做凝集反应。埃希菌属分类包括 5 个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。临床最常见的是大肠埃希菌，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群。埃希菌属生物学特性形态与结构形态：短杆菌。染色：G -。特殊结构：多数有周鞭毛，能运动，-_有菌毛、荚膜或微荚膜。培养特性营养要求：不高。气体环境：兼性厌氧。菌落特征：营养琼脂上呈圆形，凸起，边缘整齐，灰白色的光滑型菌落，直径 23mm，少数菌株产生-溶血环。伊红亚甲蓝琼脂上，由于发

4、酵乳糖，菌落呈蓝紫色并有金属光泽。麦康凯和 SS 琼脂上，胆盐对其有抑制作用，耐受菌株能生长并形成粉红色菌落。抗原由菌体抗原（O）、表面抗原（K）和鞭毛抗原（H）三种构成。埃希菌属微生物检验及鉴定标本采集：肠道感染采集粪便；肠道外感染可采集中段尿液、血液、脓汁、胆汁、脑脊液、痰、分泌液等。形态学检查：脓汁及增菌培养物发现单一革兰阴性短杆菌。分离培养：粪便标本可用弱选择鉴别培养基进行分离，脓汁等可用血平板分离，得到典型菌落。生化反应：药敏试验：超广谱 -内酰胺酶（ESBLs）产酶株。肠道内感染：血清学鉴定、毒素测定或毒力试验。埃希菌属致病性及临床意义致病因素：侵袭力、内毒素、肠毒素。肠道外感染：

5、泌尿系统感染最常见。-_还有菌血症，胆囊炎，腹腔脓肿，肺炎、新生儿脑膜炎、伤口感染、腹泻。内毒素还可引起发热、休克、DIC 等。肠道感染病原群 临床表现肠产毒性大肠埃希菌 ETEC 霍乱样肠毒素腹泻（水泻）肠致病性大肠埃希菌 EPEC 婴儿腹泻肠侵袭性大肠埃希菌 EIEC 痢疾样腹泻（黏液脓血便）肠出血性大肠埃希菌 EHEC又称产志贺样毒素大肠埃希氏菌（SLTEC 或UTEC）O157:H7 可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）：严重的腹痛、痉挛，反复出血性腹泻，伴发热、呕吐等；严重者可发展为急性肾衰竭肠黏附性大肠埃希菌 EAggEC 腹泻志贺菌属分类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢

6、疾杆菌。根据生化反应与血清学试验分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。志贺菌属生物学特性形态与结构形态：短小杆菌。染色：G -。特殊结构：无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。培养特性气体环境：需氧或兼性厌氧。菌落特征：普通琼脂平板和 SS 培养基上培养 1824h 形成中等大小、半透明的光滑型菌落，宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落。-_抗原：只有 O 抗原无鞭毛（H）抗原，个别菌型及新分离菌株有 K 抗原。O 抗原分群特异性抗原和型特异性抗原两类。根据抗原构造可将志贺菌分为四个血清群，40 余种血清型（包括亚型）。加热 100、60min 可破坏 K 抗原

7、。志贺菌属微生物检验及鉴定标本采集：发病早期及治疗前采集新鲜粪便（脓血便或黏液便）。形态学检查：革兰阴性短小杆菌。分离培养：同时接种强弱选择性不同的两个平板。强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基（SS）；弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。志贺菌属微生物检验及鉴定生化反应：糖类发酵试验氧化酶试验赖氨酸脱羧酶试验硫化氢试验苯丙氨酸脱氨酶试验尿素分解试验吲哚试验甲基红试验V-P试验枸橼酸盐试验动力试验不分解乳糖，分解葡萄糖产酸不产气 - - - - - - + - - -血清分型：A 群痢疾志贺菌 甘露醇发酵试验阴性，10 个血清型B 群福氏志贺菌 6 个血清型和 X、Y2 个变种C 群鲍

8、特志贺菌 15 个血清型D 群宋内志贺菌 迟缓发酵糖类；仅有一个血清型有光滑型和粗糙型两种菌落志贺菌属微生物检验及鉴定鉴别反应糖类发酵试验赖氨酸脱羧酶试验 吲哚试验 醋酸钠试验 动力试验志贺菌属 不分解乳糖，分解葡萄糖产酸不产气 - - - -埃希菌属 发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气 + + +动力试验 氧化酶试验 硫化氢试验志贺菌属 - - -类志贺邻单胞菌 + + 伤寒沙门菌 + +-_志贺菌属致病性及临床意义致病因素：侵袭力、内毒素及外毒素（A 群产生志贺毒素，具有细胞毒素、肠毒素、神经毒素）。所致疾病：1.急性菌痢。2.慢性菌痢：人-人传播，可引起暴发流行。3.中毒性菌痢：小

9、儿多见。4.一般不入血，不引起败血症。沙门菌属生物学特性形态与结构形态：直杆菌。染色：G -。特殊结构：无芽胞、无荚膜；大多有周身鞭毛，能运动；多数有菌毛。沙门菌属生物学特性培养特性营养要求：不高。气体环境：兼性厌氧。温度环境：3537。菌落特征：SS 琼脂和麦康凯琼脂培养基上 353724h 可形成直径约 24mm 的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产 H2S 者在 SS 琼脂上形成黑色中心菌落。-_沙门菌属生物学特性抗原：沙门菌属微生物检验及鉴定标本采集：肠热症的第一、二周采血液，第二、三周采粪便与尿液。食物中毒采集食物与粪便。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。形态学检查：革兰阴性直杆菌。分

10、离培养：粪便直接接种于 SS 和麦康凯平板上。血液和骨髓：增菌后移种到血平板和肠道菌鉴别培养基。尿液：经硫磺酸盐肉汤增菌后，再接种于肠道菌选择培养基或血平板上进行分离培养。沙门菌属微生物检验及鉴定生化反应：糖类发酵试验 氧化酶试验 触酶试验 硫化氢试验 硝酸盐还原试验 脲酶试验 吲哚试验 甲基红试验 V-P 试验 枸橼酸盐试验 动力试验不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气 - + + + - - + - + +血清学诊断：肥达试验：用已知的伤寒沙门菌 O、H 抗原，检测患者血清中抗体的含量。诊断伤寒：O 凝集效价1:80，H 凝集效价1:160。沙门菌属致病性及临床意义所致疾病 特点 致病因素肠热症

11、（伤寒与副伤寒病） 伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状食物中毒 鼠伤寒、肠炎、汤卜逊、猪霍乱、乙型及丙型副伤寒沙门菌慢性肠炎 老人和儿童的慢性肠炎败血症 猪霍乱沙门菌侵袭力肠毒素内毒素变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属生物学特性形态与结构形态：两端钝圆，有明显的多形性，呈球状或丝状。染色：G -。特殊结构：无芽胞，无荚膜；-_有周身鞭毛，运动活泼。变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属生物学特性培养特性营养要求：一般。气体环境：兼性厌氧。温度环境：1043。菌落特征：营养琼脂或血琼脂平板：变形杆菌大多数呈迁徙扩散生长（苯酚、硼酸、胆盐可抑制）。含有胆盐的培养基：菌落扁平、圆形、半透明。肠道

12、菌选择培养基：形成不发酵乳糖菌落。SS 培养基：常形成黑色中心菌落。变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属生物学特性抗原变形杆菌属细菌具 O 抗原及 H 抗原。外-斐（Weil-Felix）反应：普通变形杆菌的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，这就是用以诊断某些立克次体病的依据。变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属微生物检验及鉴定标本采集：尿液、脓汁、伤口分泌物及婴儿粪便等。形态学检查：革兰阴性杆菌，多形性。分离培养：血琼脂平板、麦康凯或伊红亚甲蓝琼脂平板、SS 琼脂平板孵育 35371824h。变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长，在 SS 琼脂上常为有黑色中心的菌落。变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩

13、根菌属微生物检验及鉴定生化反应氧化酶试验明胶液化试验硫化氢试验苯丙氨酸脱氨酶试验脂酶试验枸橼酸盐试验鸟氨酸脱羧酶试验吲哚试验麦芽糖发酵试验-_变形杆菌属 - + + + + 普通变形杆菌 - + +奇异变形杆菌 + - -产黏变形杆菌 - - +普罗威登斯菌属 - - - + - + - 摩根菌属 - - - + - - + 变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属致病性及临床意义肠道寄居的正常菌群，是医源性感染的重要条件致病菌。病原体 所致疾病普通变形杆菌 尿道、创伤、烧伤感染；食物中毒奇异变形杆菌 尿道、创伤、烧伤感染；婴幼儿肠炎产黏变形杆菌 无引起人类感染普罗威登斯菌属 尿道、创伤与烧伤感染

14、摩根菌属 医源性感染的重要病原菌克雷伯菌属分类共有 7 个种，引起的医院感染日见增多。肺炎克雷伯菌最为多见；产酸克雷伯菌次之。克雷伯菌属生物学特性形态与结构形态：卵圆形或球杆状；培养物菌体较长，可呈多形性或丝状。排列：成双排列。染色：G -。特殊结构：有明显荚膜，无鞭毛，无芽胞。培养特性营养要求：不高。气体环境：兼性厌氧。菌落特征：血琼脂上，35培养 24h，形成 34mm 圆形，凸起，灰白色，不溶血的菌落。有时菌落呈现黏液型，-_用接种环挑取时呈长丝状。肠道菌选择培养基中为乳糖产酸菌落。克雷伯菌属微生物检验及鉴定标本采集：肠炎患者采集粪便，败血症者采集血液。形态学检查：带有荚膜的革兰阴性球杆

15、菌。无芽胞，无鞭毛。分离培养：粪便标本接种于肠道选择鉴别培养基，血液标本先增菌后接种血平板，经 35培养 1624h，取肠道选择鉴别培养基上乳糖发酵的黏性菌落或血琼脂上灰白色大而黏的菌落。克雷伯菌属微生物检验及鉴定生化反应糖类发酵试验氧化酶试验 触酶试验鸟氨酸脱羧酶试验 脲酶试验 动力试验 吲哚试验克雷伯菌属 大多数发酵乳糖 - + - + - 产酸克雷伯杆菌 +肺炎克雷伯杆菌 -克雷伯菌属致病性及临床意义病原体 所致疾病肺炎克雷伯菌 肺炎亚种 婴儿肠炎、肺炎、脑膜炎、腹膜炎、外伤感染、败血症和成人医源性尿道感染臭鼻亚种 臭鼻症鼻硬节亚种 鼻腔、咽喉和其他呼吸道的硬节病产酸克雷伯菌 呼吸道和泌尿道感染、创伤感染与败血症等耶尔森菌属分类包括 11 个种，其中鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌与人类致病有关。耶尔森菌属生物学特性形态与结构染色 形态 特殊结构鼠疫耶尔森菌 G- 短而粗，两端钝圆，两极浓染 有荚膜，无鞭毛，无芽胞。3%NaCl 琼脂培养基上呈明显多形性小肠结肠炎耶尔森菌 G- 球杆菌25培养形成周鞭毛，呈翻滚旋转状运动；37培养无动力，无芽胞，无荚膜假结核耶尔森菌 G-球形或短杆形，两端浓染 25培养有周鞭毛，有动力，37培养无动力