细菌感染的检查方法与法治原则.ppt

1、支 原 体、衣 原 体、立 克 次 体,主讲老师：江振友,支原体属和脲原体属,支原体（Mycoplasma）,1.能在人工培养基中生长 2.能独立生活 3.最小原核细胞型微生物 4.无细胞壁 5.二分裂繁殖 6.多形态性,“油煎蛋样”菌落,分 类,柔膜体纲(Mollicutes) 支原体目(MycoPlasmatales) 下分3个科： 支原体科（MycoPlasmataceae）； 2个属: 支原体（Mycoplasma） 脲原体（Ureaplasma） 无胆甾原体科（Acholeplasma-taceae）， 生长时不需要外源性胆固醇； 螺原体科（Spiroplasmataceae）， 生

2、长至一定阶段呈螺形。,人体分离: 20种， 其中8种是致病或条件致病菌: 肺炎支原体(M.pneumoniae,Mpn) 生殖支原体(M.geuitalium,Mg) 人型支原体(M.hominis,Mh) 发酵支原体(M.fermentants,Mf) 穿透支原体(M.penetrans,Mpe) 梨支原体(M.pirum,Mpi) 关节炎支原体(M.arthritidis,Mart) 解脲脲原体(U.urealyticum,Uu),支原体与细菌L型比较,肺炎支原体,形态与结构 大 小:可通过滤器,光镜下可观察细胞壁:无形 态:球形、球杆形、分枝丝状或念珠状等细胞膜: 三层:1.蛋白质 2.

3、脂质(胆固醇较多) 3.蛋白质染 色:姬姆萨染色法:淡紫色或蓝色核 酸:二种(DNA和 RNA),生长繁殖,繁殖方式: 二分裂方式 球体延伸、分节断裂、出芽、分枝繁殖周期:3小时营养要求:较高,含动物血清、酵母浸液酸 碱 度:pH7.880气体环境:5CO2或5CO2与95N2温度与时间:37,3d10d菌落特征: “油煎蛋”状菌落,表252支原体与脲原体的某些生物学特性,抗原构造,主要抗原成分: 1.蛋白质 P1蛋白抗原:表面抗原 致病:粘附 2.脂质中的糖脂 抗体:产生补体结合抗体 生长抑制抗体 代谢抑制抗体,抵抗力,理化因素:比细菌敏感(因无细胞壁)热:弱, 50经30min死亡 20可

4、长期保存耐碱酸和有机溶剂:较敏感(消毒剂、清洁剂)四环素族、红霉素、卡那霉素、氯霉素: 敏感 青霉素:不敏感,致病性,外源性感染上呼吸道感染:感冒、咽炎、气管炎支原体性肺炎 （Mycoplasmal pneumonia）(原发性非典型肺炎)（primary atypical pneumonia） 临床表现和胸部X线: 肺炎链球菌引起的典型肺炎不同 类似病毒性肺炎,世界各地,密集人群,儿童及青少年多见秋冬季发病率高,每隔35年出现一次流行飞沫传播潜伏期2W3W,感染起病缓慢临床主要症状:发热（约39）、头痛、持续性顽固咳嗽、胸痛等。病人带菌、排菌状态可持续6W8W肺外合并症（神经系统、消化系统及

5、心脏等）发病率高，严重者可致死致病性:粘附是先决条件 也和超敏反应有关(共同抗原),免疫性,抗体：多种(CF抗体、生长抑制抗体、 杀支原体抗体等) 呼吸道sIgA:有一定作用非特异冷凝集素: 1.和自身免疫有关 2.患者阳性率为50， 常用于辅助诊断。,微生物学检查法,病原分离特异核酸的检测血清学诊断抗原检测冷凝集试验,病原分离,标 本：咽拭子或痰液培养基：双相培养基（含马血清、酵母浸液） SP-4培养基（提高分离率3040）气体环境：510CO2温度与时间：37，l2W可疑菌落： 1.糖发酵 2.溶血性 3.血细胞吸附 4.特异抗血清生长抑制试验等,特异核酸的检测,（1）聚合酶链反应(PCR

6、)： 优点：特异性好 敏感性高 快速、简便 靶基因：16S RNA基因 P1蛋白基因 方法：套式PCR(nPCR) 复合PCR 限制性片段长度多态性分析(RFLP) 随机引物PCR(RAPD) （2）基因探针 根据碱基严格互补配对的特性 特异性强，敏感性不如PCR技术,血清学诊断,（1）补体结合试验（CFT）： 双份抗体效价升高4倍以上诊断（2）间接血凝试验（IHA）： 测抗体, 23周高峰（3）酶联免疫吸附试验(ELISA)： 测IgM、IgG和IgA 敏感性高（4）间接免疫荧光试验： 检测IgM、IgG 特异性较强,抗原检测,方法1:间接法或直接法 抗体:荧光标记多克隆抗体或单克隆抗体 检

7、测标本:呼吸道分泌物中抗原 86%可阳性 方法2:双抗体夹心酶联免疫吸附试验 检测标本:呼吸道分泌物中抗原 可检出105 CFU /ml 方法3:酶联免疫吸附试验捕获法 抗体:抗P1单克隆抗体 检测标本:P1蛋白 可检出104CFU/ml 特异性强,3小时即可,冷凝集试验,辅助诊断非典型肺炎针对红细胞膜抗原冷凝集素属IgM 5d10d出现，2W3W高峰辅助诊断效价: 64128倍以上 双份效价升高4倍以上特异性和敏感性较低,防 冶,药物:四环素类(近年来耐药性增加) 大环内酯类:首选 (红霉素、克拉霉素、阿奇霉素) 喹诺酮类疫苗:减毒活疫苗 基因工程疫苗,其它支原体,寄生部位:鼻咽腔及泌尿生殖

8、道粘膜属于正常菌群,引起条件性感染口腔支原体:慢性呼吸道感染唾液支原体:齿槽溢脓生殖支原体:生殖道、呼吸道和关节腔的炎症, 流产、早产和新生儿肺炎发酵支原体:类风湿性关节炎 AIDS相关(分离率明显升高)人型支原体:渗出性咽炎、非淋菌性尿道炎 (nongonococcal urithritis,NGU), 卵巢脓肿、 产褥败血症,脲原体属 (Ureaplasma),从支原体分出的独立的新属 正常菌群:绝大多数 有致病性:解脲脲原体 （U.urealyticum,Uu) 1954年从NGU患者的病灶处分离 类似肺炎支原体 能水解尿素,生物学性状,形态:圆形或球杆状染色:革兰染色阴性温度和酸碱度:

9、 37, pH 6.0菌落:很小(15m60m,放大200倍), 称T株（Tiny colony strain）敏感性: 敏感: 四环素、氯霉素、庆大霉素、 卡那霉素、0.05% 醋酸铊、 125g/ml 5-碘-2脱氧尿苷 不敏感:青霉素生化特性:水解尿素产氨,致病性,存 在: 人和动物的口腔、呼吸道、 泌尿生殖道血清型: 解脲脲原体(Uu)有14个血清型传播途径: 性接触传播、母婴传播所致疾病 (STD) 泌尿生殖道感染: NGU 、盆腔感染、宫颈 炎、阴道炎、输卵管炎、慢性前列腺 炎、附睾炎、男女不孕症、反复流产、 早产、死胎 新生儿疾病:呼吸道病变、肺炎、脑膜炎,引起男性不孕的原因：

10、Uu吸附于精子表面， 使其运动受阻， 并蔽盖了精子识别卵细胞的部位 Uu产生神经氨酸样物质， 干扰精子与卵细胞结合。 Uu与精子膜有共同抗原， 从而产生抗精子抗体,立克次体属和巴尔通体属,立克次体属,立克次体特征： 比细菌小,能通过滤器,光镜可见 以节肢动物为传播媒介,有储存宿主 专性细胞内寄生(胞浆内),原核细胞微生物 二分裂繁殖 有两种核酸(DNA和RNA)，酶系统不完整 多数人畜共患 对抗生素敏感所致疾病:发热出疹性疾病对人致病的:立克次体属 东方次体属 埃立克体属 柯克斯体属,立克次体分类及其致病情况见表26-1,生物学性状,大小: (0.3m-0.6m)(0.8m -2.0m)形态:

11、 类似球杆菌,多形性 (球形、哑铃形、长杆状或丝状等)染色: Giemsa染色法: 紫色或蓝色 马氏染色法(Macchiavello stain): 红色排列: 散在于细胞浆中、核旁成堆 (斑点热立克次体在胞浆或核内) 培养: 专性细胞内(活细胞内)寄生培养方法: 鸡胚卵黄囊内接种 组织细胞培养 动物接种,抵抗力: 热、消毒剂: 较弱(56,数分钟,0.5%石碳酸、 0.5%来苏,75%酒精中数分钟) 抗生素: 敏 感:氯霉素和四环素 不敏感:磺胺类 低温、干燥: 较强(-20或冷冻干燥半年以上)抗原构造： 群特异性抗原,种特异性外膜抗原外斐反应(Weil-Felix reaction):斑疹

12、伤寒等立克次体与变形杆菌某些X菌株有共同的耐热多糖类抗原。利用这些变形杆菌菌株代替立克次体抗原，进行定量非特异凝集反应（交叉凝集反应），以检测人或动物血清中的相应抗体。协助诊断斑疹伤寒,恙虫病,滴度超过1:160有意义.,致病性,传播方式： 普氏立克次体： 头虱和体虱（肠上皮细胞） 人是唯一宿主 斑点热立克次体： 第一宿主是蜱（唾液腺） 第二宿主是啮齿类动物,致病机理 过程:侵入-小血管内皮细胞中繁殖- 破坏细胞-细胞肿胀、浸润、 堵塞血管腔形成血栓 -皮肤:斑疹 -实质器官:相应临床表现 毒性物质:内毒素 磷脂酶A,所致疾病1.流行性斑疹伤寒(epidimic typhus) 不属于人畜共患

13、病 病原体:普氏立克次体(R.prowazekii) 媒介:人虱 宿主:人 季节:冬春季 症状:521d潜伏期-高热、头痛、 肌肉痛等-45d:皮疹- 神经、心血管和其他器官 病后免疫:持久,与地方性斑疹伤寒有 交叉免疫,2.地方性斑疹伤寒(endemic typhus) (鼠型斑疹伤寒),属于人畜共患病病原体:斑疹伤寒立克次体(R.typhus)宿主:鼠为天然贮存宿主传播方式:鼠蚤或虱-鼠间 -人-人虱-人疾病:较轻，缓慢，持续时间短，很少 侵害中枢神经系统病后免疫:持久，并与流行性斑疹伤寒 有交叉免疫,3.恙虫病(scrub typhus),病原体:恙虫病东方次体 (O.tsutsugan

14、ushi)传播:寄生于恙螨体内，可经卵传代。人若进入恙螨的孳生地，可能受感染(亦称“丛林热”)症状:1014d潜伏期-突然高热，被叮咬处:发红,丘疹,水疱,溃疡，周围红晕，上有黑色痂皮，称为焦痂(特征)。附近的淋巴结肿大，皮疹。治疗拖延肺炎、脑炎、DIC。,微生物学检查法,(一)血清学诊断 1.外斐反应 (非特异性) 诊断:立克次体和东方次体 效价在1：160以上，或病程中效价增长 2.补体结合(CF)反应 (特异性) 所用抗原:可溶性抗原(群特异抗原) 洗涤过的颗粒抗原(种特异抗原) 诊断:斑疹伤寒群、斑点热群、恙虫病、 Q热(二)立克次体分离鉴定 动物: 小鼠(恙虫病) 雄性豚鼠(斑疹伤寒

15、),防治原则,1. 灭虱、灭蚤、灭鼠2. 改进环境、个人卫生3. 死疫苗4. 广谱抗生素有效,巴尔通体属(Bartonella),特点: 1.形态结构与立克次体相似 2.可以人工培养而非严格细胞内寄生模式种:杆状巴尔通体(B.bacilliformis),生物学性状,形状:1.血涂片:球形、椭圆形或弓形杆状；单个或成群,偶见链状2.组织中:内皮细胞原浆中, 单体或圆形团块，G-，常用Giemsa或镀银染色法。3.培养中:单鞭毛培养条件:1.需氧2.常用10%兔血清和0.5%血红蛋白的半固体培养基3.可在无细胞培养基中生长4.28-37,10d以上,致病性,自然宿主:人媒 介:节肢动物（疣肿白蛉

16、）所致疾病: 1.奥罗亚热-秘鲁疣 (Oroya fever-verruca peruviana) 病原体:杆状巴尔通体 阶段:第1阶段:发热，贫血(奥罗亚热) 第2阶段:以血管损害为基础的 肉芽肿(秘鲁疣) 诊断方法: 1.血涂片 2.用半固体培养基分离培养,2.细菌性血管瘤(bacillary angiomatosis) 病原体: 亨氏巴尔通体(B.henselae) 罗卡利马巴尔通体(B.rochalimaea) 易感人群: 免疫力低下（尤其AIDS） 病变组织学特征: 毛细血管增生等(血管瘤) 培养基: 巧克力色琼脂 含5%兔血的心脑浸汁琼脂3.猫抓病(cat-scratch dise

17、ase) (猫抓热) 病原体: 亨氏巴尔通体 症状: 猫抓伤后2w,发热,淋巴结肿大，破 溃排脓，亦可头痛、咽痛或出现结膜炎 特点: 自限性疾病 检查法: 病变组织切片镀银染色 免疫荧光染色,衣 原 体 属,衣原体（Chamydia）,特点:1.能通过细菌滤器,光镜下可观察 2.有独特发育周期 3.不能人工培养,不能独立生活, 为专性细胞内寄生 4.原核细胞型和病毒的区别: 有细胞结构 细胞壁类似G- 两种类型的核酸(DNA和RNA) 有核糖体 以二分裂方式繁殖,有独特的发育周期 对多种抗生素敏感(四环素和红霉素),分 类,存在:人类、哺乳动物及禽类体内分类依据:1.抗原构造 2.包涵体糖原的

18、有无 3.对磺胺类药物的敏感性分类(4个种): 1.沙眼衣原体（C. trachomatis）（人） 亚种（1）沙眼生物变种（Biovar trachoma） 14个血清型 （2）性病淋巴肉芽肿变种(Biovar lymphogranunloma venereum,LGV) 4个血清型 （3）鼠生物变种（Biovar mouse） 2.鹦鹉热衣原体（C. psittaci） （人） 3.肺炎衣原体（C. pneumonia） （人） 4.家畜衣原体(C.pecorum),表27-1 3种致病性衣原体的比较,生物学性状,生活周期包括原体和始体两阶段光镜下：两种形态： 原体（elementary

19、body） 始体（initial body） 原体（elementary body） 1.形状：球形，0.20.4m 电镜下：核质致密和少量核糖体 细胞壁坚韧 存在于细胞外 2.功能:（1）有很强的感染性（吸附） （2）发育成始体：吸附-被吞噬- 胞膜在原体周围形成空泡- 原体在空泡中增大-始体,始体（initial body） 1.形状：球形，较原体大(0.81.5m)， 无致密核质，有纤细网状结构- 也称为网状体（reticulate body） 2.发育周期:原体-始体-空泡内- 二分裂-子代原体-包涵体（inclusion body）-原体成熟-释放-再感染 (2448h) (无细胞外

20、周期) 3.是繁殖型，无感染性染色： 1.Macchiavello染色法或Giemsa染色法 原体：红色或紫色 始体：深蓝色 2.碘染色法：沙眼衣原体原体：褐色 （因包涵体含糖原）,培 养,方法：1.鸡胚卵黄囊 2.各种传代细胞 (Hela细胞,McCog细胞) 3.动物实验：某些可感染小鼠 培养时间：4872h后观察：包涵体 原体颗粒 始体颗粒,抗原构造,1属特异性抗原 成分：脂多糖 方法：CF试验和IF法2种特异性抗原 成分：外膜蛋白（MOMP） 方法：IF法和中和试验(NT)3血清型特异性抗原 成分：MOMP 方法：单克隆抗体微量免疫试验 血清型:(1)沙眼生物变种:14个 （A-K、B

21、a、Da,Ia） (2)LGV: 4个(L1、L2、L2a和L3 ),抵抗力,热:敏感，6010min或3748h寒冷：-50数年化学消毒剂：0.5%石炭酸，24h 75%乙醇，半分钟抗生素：利福平、四环素、红霉素、 磺胺敏感 青霉素:不敏感,致病机理,致病物质：内毒素相似的物质致病机理：1.抑制细胞代谢，使细胞溶解 2.引起超敏反应 3.形成肉芽肿传播途径：眼眼 眼手眼 性接触传播 产道感染 呼吸道感染 (不通过节肢动物传播),所致疾病,1.沙眼（trachoma） （慢性传染性角结膜炎） 病原体：沙眼生物变种的A、B、Ba、C血清型 传播途径：眼眼，眼手眼 慢性炎症,可致盲 汤飞凡等（19

22、56年，鸡胚接种法）2.包涵体结膜炎(inclusion conjunctivitis) 病原体：沙眼生物变种中除A和C以外 好发人群：新生儿（产道感染）(母婴间） 成人（接触）,3.泌尿生殖道感染 病原体：沙眼衣原体D-K血清型 是性传播疾病（sexually transmited disease,STD） 疾病：男性：非淋菌性尿道炎（NGU） 女性：NGU、宫颈炎、盆腔炎 婴儿：肺炎（产道） 4.性病淋巴肉芽肿 （lymphogranuloma venereum, LGV） 是STD 病原体：沙眼衣原体LGV生物变种 5.上呼吸道感染及衣原体肺炎 （chlamydia pneumonia）

23、 病原体：鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体 (除外沙眼衣原体) 自然宿主：鹦鹉，鸟类 疾病：鹦鹉热（呼吸道感染） 肺炎衣原体引起的肺炎只限于人群间,免疫性,细胞免疫，体液免疫保护性不强持续、隐性和反复感染,微生物学检查法,（一）直接涂片镜检 Giemsa染色，沙眼还 要做碘液染色，查包涵体（二）酶抗体法检查抗原 用抗衣原体抗体、 酶标抗体IgG（三）分离衣原体 小鼠腹腔、鸡胚卵黄囊或 培养细胞 （四）血清学诊断 鹦鹉热和LGV的诊断。 常用CF试验。抗体效价增高4倍或4倍以 上（五）检查核酸 PCR，杂交等，特异性及敏 感性高,防治原则,沙眼：改善卫生状况和普及卫生知识生殖道：同其他STD鹦鹉热肺炎：控制禽畜感染及减少接触治疗：利福平、强力霉素等,