防腐效能.doc

1、- 作者：angel.1680- 时间：2007-10-9 17:41:25- 分享 防腐体系效能挑战实验防腐体系效能挑战实验：1、CTFA 推荐的防腐单次挑战试验CTFA 推荐的经典的为期 28 天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后一次性接入若干种类、一定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。2、试验仪器恒温培养箱、显微镜、灭菌平皿：直径为 9cm、pH 计、高压灭菌锅、酒精灯、锥形烧瓶、量筒、灭菌刻度吸管：10ml、2ml、1ml;试管。3、培养基和试剂生理盐水、SCDLP 液体培养基、卵

2、磷脂、吐温 80-营养培养基。 4、挑战用微生物提取菌珠：杂菌由实验室从污染产品中得出菌种。菌种培养：实验前，将各菌种接种于合适的培养基中，于 37（细菌）培养箱中培养。细菌培养 48 小时，挑选典型的菌落于灭菌的液体培养基中制成一定浓度的细菌和霉菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用。5、微生物挑战实验称取 8 种化妆品基质样品各 100 克，加入灭菌的容器内，加入混合细菌悬液，充分混匀。每克样品含细菌量为 5106CFU/克或 CFU/ml。然后置于 28下。在接菌的 0、7 、14、21 、28 天取样分析：准确称取 10 克样品，加到含有玻璃小球和 90ml 灭菌生理盐水的锥形瓶内，充分震荡混匀

3、，此悬液为1：10 稀释液；然后再用生理盐水按 1：10 依次稀释。按平板倾注法计数样品中含菌量细菌培养 37下 48 小时。6、判定标准1、第 28 天时，样品中含细菌103cfu/g(ml) ，该样品不能通过微生物攻击的挑战性实验，表明样品的防腐体系不能有效地起到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。 2、第 28 天时，样品中含细菌在 102cfu/g(ml)-103cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用，否则不能。3、第 28

4、天，样品中含细菌在 10cfu/g(ml)-102cfu/g(ml)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。 4、从第 7 天起，样品中的细菌103cfu/g(ml)，该样品不能通过微生物攻击的挑战性实验，表明样品的防腐体系不能有效地起到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。（2）第 28 天时，样品中含细菌或霉菌在 102cfu/g(ml)-103cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，

5、该防腐体系可以使用，否则不能。（3）第 28 天时，样品中含细菌或霉菌在 10cfu/g(ml)-102cfu/g(ml)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验。产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。（4）从第 7 天起，样品中的细菌或霉菌10cfu/g(ml)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验。产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。一般的，根据经验：（1）当测试进行到第 7 天时，若细菌和霉菌数均能降低到 103 以下时，第 28 天时的结果和评价一般都能通过挑战试验；（2）当测试进行到第 14 天时，细菌和霉菌数在 104 以

6、上时，第28 天时的评价基本都不能通过挑战试验。表 2：三個防腐劑挑戰性試驗方法（Three Challenge Systems）的比較因素（Parameter） CTFA ASTM USP1. 詳細繼代資料 無 有 有2. 收集細菌之溶液（Harvesting solution ）N/A 無菌水 無菌生理食鹽水3. 使用真正之污染菌 （contaminants）有 無 無4. 黴菌收集方法有特別說明 無 有 無5. 收集黴菌之溶液 N/A N/A Polysorbate 806. 標準之操作步驟 無 有 有7. 接種原為混合菌（Mixed culture）無 有 無8. 接種原為純菌（Pur

7、e culture inoculum ）是 允許 是9. 接種原有標準化菌量（cfu） 細菌 N/A 1108/mL 1108/mL酵母菌/黴菌 N/A 1107/mL 1108/mL10. 挑戰最後濃度菌量（cfu） 細菌 1106/mL 1106/mL 105106/mL酵母菌/黴菌 1104/mL 1105/mL 105106/mL11. 接種原的量 1%最後容積 1 mL 0.51%最後容積12. 檢體量 20 g or mL 100 g N/A13. 取樣時間（天） 0, 1, 2, 7, 14, 21,28 0, 7, 14, 21, 28 0, 7, 14, 2814. 使用之中

8、和劑3 種一般肉湯 分開方法：E 1054-85是，但在不同指引的章節15. 中和劑評估 無 無 有16. 對照組(Controls) 無 有 無17. 防腐劑效能評估依據細菌減少真菌減少7 天，99.9%減少7 天，90.0%減少7 天，99.9%減少28 天，90.0%減少或在試驗期間沒有增加14 天，99.9%減少14 天，與最初濃度相同或較低註：表 21-1 列出微生物名單N/A，不適用。表 3：用於防腐效能試驗之培養基（Media Used in Preservative Efficacy Testing）瓊脂培養基（Agar ）微生物（Microorganisms）目的（Purpo

9、se）方法（Procedure）Tryptic soy agar（TSA ） 細菌 一般檢驗 CTFANutrient agar（NA） 細菌 一般檢驗 CTFA, ASTMEugonagar 細菌及真菌 一般檢驗 CTFASabouraud dextrose agar（SDA） 酵母菌及黴菌 一般檢驗 CTFA,USPPotato dextrose agar（PDA ） 酵母菌及黴菌 一般檢驗 CTFAMycological (mycohil) agar 真菌 一般檢驗 CTFAMycophil agar, pH 4.7 黴菌嗜酸菌酵母菌(腐生)一般檢驗 CTFA, ASTMLetheen

10、agar 細菌酵母菌、黴菌及厭氧菌 中和/一般檢驗 CTFA, ASTMTryptic digest of casein and soy agar （TSB w/agar） 細菌酵母菌及黴菌一般檢驗 CTFA, USPInfusion agar（IA） 細菌 一般檢驗 CTFAThioglycollate agar 細菌 中和/一般檢驗 CTFATryptone-glucose-yeast extract agar（TGEA） 細菌 一般檢驗 CTFADey-Engley agar（D/E ） 細菌 中和/一般檢驗 CTFATrypticase soy agar with lecithin a

11、nd Polysorbate 80（TSA w/Lec+tween 80）細菌 中和/一般檢驗 CTFA, USPSoybean-casein digest agar（SCDA，TSA） 細菌, 酵母菌及黴菌 一般檢驗 USPLetheen broth with lecithin （LB w/Lec） 細菌 中和/稀釋 CTFALetheen broth with lecithin and Triton X-100（LB w/Lec+ Triton X-100）細菌 中和/稀釋 CTFAThioglycollate broth 細菌酵母菌及黴菌中和/稀釋 CTFAWilliamson buff

12、ered suspending fluid (modified) 細菌, 酵母菌及黴菌 中和/稀釋 CTFA表 4：防腐效能試驗方法之比較方法 使用的菌株 檢測方法 觀察結果 合格標準CTFA 金黃色葡萄球菌（S. aureus，ATCC 6538）表皮葡萄球菌（S. epidermidis）大腸桿菌（E. coli ）變形桿菌（Protus sp.）綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa，ATCC 15442, 13388）黑麴黴菌（A. niger，ATCC 9642）煙麴黴菌（A. fumigatus）白色念珠菌（C. albican）近平滑念珠菌（C. parapsil

13、osis）青黴菌（Peniicillum luteum，ATCC 9644）蠶豆腐皮鐮孢黴菌（Fusarium solani）芽孢桿菌（Bacillus spp.）混合培養 測定 0, 1, 2, 7, 14, 21, 28 天結果細菌：培養 7 天時菌數降為原來的0.1%，並繼續減少或不再增加，芽孢應保持在休眠狀態。真菌：培養 7 天時降為原來的 10%，繼續減少或不再增加。ASTM 金黃色葡萄球菌（S. aureus ，ATCC 6538）綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa，ATCC 9027）白色念珠菌（C. albican）黑麴黴菌（A. niger，ATCC 96

14、42）平滑青黴菌（Penicillu levitum）混合培養或純培養分別測定0, 7, 14, 21, 28 天的結果細菌和酵母菌：培養 7 天時降低為原來的 0.1%，並不再增加。其他真菌：培養到 28 天時降低到原來的10%，並不再增加。USP 金黃色葡萄球菌（S. aureus，ATCC 6538）大腸桿菌（E. coli ，ATCC 8739）綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa，ATCC 9027）黑麴黴菌（Asperillus niger ，ATCC 16404）白色念珠菌（Condida albican， ATCC 10231）純培養 測定 0, 7, 14,

15、 28 天的結果細菌：培養 14 天時菌數應降低到原來的0.1%，並不再增加。真菌：培養 14 天維持在起始水準，並不再增加。表 1：防腐效能試驗建議使用的微生物微生物（Organism）ATCC號碼 CTFA ASTM USP甲、細菌（Bacteria） 一、革蘭氏陰性桿菌 產氣腸桿菌 （ Enterobacter aerogenes） 13048 大腸桿菌 （ Escherichia coli） 8739N/A變形桿菌 （ Proteus spp） N/A * 綠膿桿菌 （ Pseudomonas aeruginosa） N/A902715442 或 13388*二、革蘭氏陽性桿菌 枯草芽

16、孢桿菌（ Bacillus subtilis var. globigii）N/A * 金黃色葡萄球菌 （ Staphylococcus aureus） 6538 表皮葡萄球菌（ Staphylococcus epidermidis）N/A * 乙、酵母菌及黴菌（Yeasts and Molds） 煙麴黴菌 （ Aspergillus fumigatus） N/A * 黑色麴黴菌 （ Aspergillus niger） 164049642 近平滑念珠菌 （ Candida parapsilopsis） N/A * 白色念珠菌（Candida albicans ） 10231N/A 蠶豆腐皮鎌孢

17、黴菌（Fusarium solani ） N/A * Eupericillium Levituma（青黴菌的一種） 10464 Penicillium pinophilumb 9644 *代表 CTFA 方法中液體及半固體狀態的眼部化妝品採用的試驗菌；N/A 表示在此方法中未註明 ATCC號碼。aATCC 菌名; 方法中菌名為 Penicillium levitum.bATCC 菌名; 以前稱為平滑青黴菌 Penicillium luteum.使用生物安全操作箱(安全箱:Biosafety Cabinet)或無菌操作台(操作台:Laminar Flow)為生物實驗中保護操作人員免受感染的第一道

18、防線，其亦可避免實驗室人員受到生物性樣本中病原菌外洩的危害以及確保試驗物的潔淨，因此，安全箱及操作台可說是進行生物試驗不可或缺的工具。為使安全箱及操作台能確實發揮其功效，除了依照實驗安全的不同而選用不同分級的櫃體形式外，安全箱及操作台本身的各項性能的確效檢測亦十分重要。安全箱及操作台安裝後需每年定期檢測，以避免使用不合格之安全安全箱及操作台影響實驗正確性，更可預防人員暴露在外而罹患疾病，甚至爆發疫情。安全箱及操作台的定期檢驗也是 GMP 認證的基本需求。表一:：安全箱(Biosafety Cabinet)及操作台(Laminar Flow)檢測服務項目測試項目 認證測試 年度測試 操作測試HEPA 過濾器洩漏測試 入口氣流速度測試 下吹氣速度度測試 氣流煙霧型態測試 震動測試 照度測試 噪音測試 紫外燈強度測試 追蹤氣體秀洩漏測試 空氣落菌測試 注 1： ：重要測試(Guarantee) ：次要測試(For Reference Only)