生物标本制作方法和技术.doc

1、1生物标本制作方法1、 干制标本植物腊叶标本 植物腊叶标本要保管在密封干燥的腊叶标本橱内新制标本 因为常有害虫和虫卵寄生，入橱最好用药消毒。就是用二硫化碳约 0.5KG 盛在容器内，放入杀虫箱（1.7 平方米）中，两日后开箱，使毒气散尽，拿出标本。二硫化碳气体比空氧重。药品应放在标本上面。或者把未上台纸的标本放入 0.5%升汞酒精（工业用75%）溶液中浸一次，制好后入橱。升汞）有毒，并不能与金属起化学作用，切忌使用金属器械。用时要带橡皮手套，事后用肥皂北朝洗手，标本用什么药品杀虫，应在台纸上注明，以防中毒。腊叶标本橱内要放樟脑精以防虫害。分类 入橱标本要进行分类才便于利用。植物根、茎、叶花果实

2、的干制标本，可按课本上的次序排列。分类标本在按照分类系统，分科排列。目前标本室常用的分类系统有恩格斯（AENGLER） 、克朗奎（A。CRONGUIST）等分类系统。橱门上应有分科目录表，橱内要有分科标签，便于查找。维修 如果标本中的叶片脱落，可用毛笔刷胶水（植物胶）在叶背面，按照自然姿态贴好，阴干。枝茎断裂的要用醋酸乙烯胶粘贴，再贴上胶水纸。发霉和虫蛀的标本，用毛笔蘸 95%酒精或 10%福尔马林液洗刷，干后用毛笔刷除霉斑。台纸和盖纸破损的要调换新的。 移动标本，手脚要轻，不要翻转颠倒。入橱标本，不要太挤。标本外借，要多用填纸包装，注意防潮。植物种子标本 要选择典型无病虫害的新种子，清除杂质

3、后晒干，装入种子瓶中，并贴上标签，经常检查，以防发霉虫蛀。昆虫标本和植物病虫害等盒装标本 大型昆虫的腹部和柔软部分以及烘干的幼虫，都容易发霉。盒装的昆虫生活史、病虫害等标本里的安瓿容易破碎和标签脱落，可将损坏部分掉换。植物损坏部分可按照维修腊叶标本方法维修。盒装标本内应放入樟脑、硅胶等防虫防潮药品。其它 化石标本要防止震动和碰撞，损坏时用石膏填补和聚醋酸乙烯胶（乳白胶水）粘接。鸟卵标本卵壳损坏，可分块取下粘贴。循环系统干制标本是用赛璐珞作填充物的，脆性大，要防震，如果损坏，可以用毛笔蘸丙酮液粘接。浸制标本和材料浸制标本和实验材料都应有标签，标签要贴实，外面涂蜡，按编号平稳地放入生物橱中保存。标

4、本瓶不能震动，以免打碎，并且不宜放在有阳光直接照射、高温或 0以下的地放，以防封蜡熔化和玻璃瓶冻裂。植物实验材料也可以不用药液浸制，标本瓶底放些浸有 20%福尔马林的药棉，上盖白纸，再封口材料多时可以在塑料袋里放少量 20%福尔马林液体，再放入实验材料，扎紧袋口。也能长期保存。要用登记簿按记号记下每瓶标本的制作日期和药液配方，便于日后检查处理。原色标本要放在有板门的生物橱内，防止因阳光照射而退色。溶液发黄浑浊和标本露出液面，要及时更换和补充新液（加 10%福尔马林等） 。如果保存的实验材料将要变质，可增加保存液浓度。浸制透明标本会产生许多气泡，可用注射器抽出。标本上贴字号等如果落下，可用药棉吸

5、干脱落部位，用明胶液（明胶克，浸在 50 毫升水中泡一天后，再隔水加热到溶化）粘贴。如果固定标本的玻璃板打碎，用钻石刀划好玻璃，用砂轮奖四边磨平，重新固定放入。加换溶液和封瓶宜在夏季进行，因为夏季瓶盖容易开启，转动盖上的玻璃球，然后拨出瓶盖。也可用刀尖除去封蜡后开瓶。22、 剥制标本剥制标本应按号放在生物橱中，过大的要自制玻璃橱箱存放，要防潮、防腐、防尘、防虫、防鼠。橱内用硅胶或生石灰（用两层纱布包好）作干燥剂，用樟脑制剂驱虫防霉（用纱布包好） 。剥制标本不能长期裸露放在橱顶上积尘。新剥制的未干标本不要放入生物橱。可以用烟熏剂消灭害虫，在春季，把标本放在消毒箱里，箱里放碟子，上面放碗，碗里放硫

6、磺，碗上放铁片条，点着硫磺，密封箱盖。两日后打开箱盖，拿出标本放入生物橱中保存。脊椎动物标本如果损坏，要选用种类、性别、大小相似的动物，切下损坏的相应部分，用大头针固定，涂上 40%福尔马林液防腐，干后作修补用材料。修补后再整形涂色。如鱼的鳍条、爬行动物的趾骨等断裂，可切成两个斜面，用聚醋酸乙烯胶帖。大型哺乳动物缺损可用油灰填补，再拔下腋窝、腹部等处毛，用聚醋酸乙烯胶帖在油灰上。3、骨骼标本骨骼标本要防止震动和撞散，用后盖好。受潮脱胶，关节容易掉落。阳光久射要发黄变色。骨骼断裂或脱落时，可用聚醋酸乙烯胶帖（用线固定）。切片标本切片标本要编号放在特别分格切片的木盒内，盒内两侧刻很多凹沟，载波片的

7、两侧沿凹沟插入，使载玻片直立在盒中。每盒可装 50100 片。盒子要直放，使标本保持平放位置。盒内应有每片标本的编号和名称目录，以方便查找使用。木盒应放在干燥地方，避免日光照射。切片也可用玻片标本夹（格隔）保存。常用染料性能简介（一）天然染料1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟“。苏木精的“成熟“过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸

8、铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸-酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜

9、，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。3组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中

10、褪色。2、刚果红 刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。3、甲基蓝 甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。4、固绿 固绿是酸性染料，能溶

11、于水（溶解度为 4%）和酒精（溶解度为 9%）。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。5、苏丹 苏丹是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为 0.15%）。苏丹是脂肪染色剂。6、伊红 这类染料种类很多。常用的伊红 Y，是酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15 摄氏度是溶解度达 44%）和酒精（溶于无水酒精的溶解度为 2%）。伊红在动物制片中广泛应用，是很好的细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。7、碱性品（复）红 碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度1%）和

12、酒精（溶解度 8%）。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中，长用来鉴别结核杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。8、结晶紫 结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度 9%）和酒精（溶解度 8.75%）。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色

13、体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。 9、龙胆紫 龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。10、中性红 中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度 4%）和酒精（溶解度 1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性

14、红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。11、番红 番红是碱性染料，能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。12、亚甲蓝或美蓝 亚甲蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度 9.5%）和酒精（溶解度 6%）。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。13、甲基绿 甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水（溶解度 8%）和酒精（溶解度 3%）。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一4起可作植物木质部的染色。二、常用药品试剂和培

15、养基的配制（一） 反应剂1、检查葡萄糖试剂配方一 本尼迪克（Benedict）溶液（1） 在 400 毫升蒸馏水中溶解 85 克柠檬酸钠和 50 克无水碳酸钠。（2） 在 50 毫升加热的蒸馏水中溶解 8.5 克硫酸铜。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如果产生沉淀，要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用（存放时间较久而产生沉淀是，取上层清液使用，不必重新配制）。本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖，可测出 0.15 0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时，如果未知物中有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。配方二 裴林（Fehling）溶液（1）把 34.5

16、克硫酸铜溶于 500 毫升蒸馏水中。（2）把 125 克氢氧化钾（钠）和 173 克酒石酸钾钠溶解在 500 毫升蒸馏水中。上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时，使他们等量的混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。2、检查淀粉的试剂鲁哥氏（Lugols）溶液（碘液）取 6 克碘化钾溶于 20 毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入 4 克碘，等碘充分溶解，在加入 80 毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉，也用作染色剂，例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。3、检查蛋白质的试剂配方一 米伦（Millon ）试剂在 60 毫升浓硝酸（比

17、重 1.42）中溶解 40 克汞（水浴加温可助溶），溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。在待测物中加入少量米伦试剂，加热，如果有蛋白质，会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。配方二 双缩尿试剂分别配制 10%氢氧化钠溶液和 1%硫酸铜溶液。在 3 毫升待测物中加入 1 毫升 10%氢氧化钠溶液和 1 滴 1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。4、检查脂肪的试剂苏丹（）酒精饱和溶液取 0.2 克苏丹（或苏丹），放入纯酒精中，加热，使它充分溶解，成为饱和酒精溶液，过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。5、酸碱指示剂配方一 酚酞试剂和试纸酚酞试

18、剂 取 1 克酚酞，溶解在 100 毫升 60%的酒精溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚态试纸 取 1 克酚酞，溶解在 100 毫升 95%酒精溶液里，加入 00 毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后，取出，放在无氨气影响处晾干。5酚泰试剂（试纸） pH 值变色范围 8.210，在酸性和中性溶液中都无色，再碱性溶液中呈深红色。配方二 红蓝石蕊试纸取市售石蕊 1 克，放在 80 毫升 10%酒精溶液中搅拌，使它溶解，然后过滤。把滤液分成两份。1 份滴入稀磷酸或稀硫酸，到出现红色为止。另 1 份滴入稀氢氧化钠溶液，到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条，随后取出滤纸条，放在蔽光处、无酸

19、碱性气体影响的地方晾干，即的红、蓝两种石蕊试纸。红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝，蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。6、检查二氧化碳的试剂检查二氧化碳的试剂，可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。配方一 溴代麝香草酚蓝溶液取 0.1 克溴代麝香草酚蓝，溶解在 100 毫升蒸馏水里，滴入少量 0.1%氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。溴代麝香草酚蓝溶液 pH 值变色范围是 6.0（黄）7.6（蓝）。待测物中如果有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。配方二 石灰水在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙），变加边搅拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后，倾出上层清液，用滤纸过滤，放在密闭瓶内保

20、存。如果测定的物质中有二氧化碳，会生成碳酸钙，使石灰水变浑浊。7、检查细胞生活力的试剂 检查细胞有无生活力，可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制 1%中性红溶液和 1%甲基蓝溶液，这两种溶液各取 1 份混合，用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色，而使死细胞全部染成蓝色。（二）分离液1、肌细胞分离液配方一 马克凯郎（Maccallum）液取 1 份浓硝酸、 2 份甘油、3 份水，混合后就得到马克凯郎液。把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需13 日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。配方二 氢氧化钾溶液取 35 克氢氧化钾，放在 100

21、 毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中，浸泡 1530 分钟后，肌细胞便可分离。2、上皮细胞分离液配方一 福尔马林-氯化钾溶液称取 58.44 克氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到 1000 毫升，加入 2 毫升福尔马林。这种溶液是很好的上皮细胞分离液，分离很迅速，而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块，放在此溶液里 2 小时即可分离，口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需 3 日左右。配方二 水和氯醛溶液称取 5 克水和氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到 100 毫升，就得到 5%水合氯醛溶液。从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织

22、一小块，投入以上溶液中，浸泡 2448小时。3、神经细胞分离液配方一 可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林-氯化钠溶液来分离神经细胞（见 2）。6配方二 硼酸生理盐水溶液在生理盐水溶液内加入一些硼酸，搅拌到不再溶解时为止，使成为饱和溶液。把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。4、植物茎细胞分离液杰弗里氏（Jeffreys）液取等量的 10%铬酸溶液和 10%硝酸溶液混合，成铬酸-硝酸溶液。这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里，加热煮沸，冷却后再加热煮沸。这样重复几次，到材料全部沉于水底后，投入分离液内，分离时间是 2448

23、小时。5、植物根尖细胞分离液配方一 盐酸-酒精溶液在 1 份 95%酒精中慢慢的加入 1 份浓盐酸，即成盐酸-酒精溶液，装瓶密闭保存。把植物根尖部位截下一小段，投入以上溶液中分离。配方二 4%盐酸溶液配制 4%盐酸溶液。截下植物根尖部位，投入盛有 4%盐酸溶液的小烧杯内，在 60 摄氏度温水中隔水温热12 分钟，使根尖软而不酥，这时分离效果最好。6、植物纤维分离液取 10 克氢氧化钠（或氢氧化钾），溶解在 90 毫升水里，制成 10%氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，放在瓶里密闭保存。把植物茎纵切成细条，剪成小段后，投入分离液内。7、植物细胞质壁分离液配方一 30%蔗糖溶液取 30 克蔗糖，溶解在

24、70 毫升蒸馏水里，装瓶备用。配方二 5%氯化钠溶液取 5 克食盐，溶解在 95 毫升蒸馏水里，装瓶备用。配方三 5%硝酸钾溶液取 5 克硝酸钾，溶解在 95 毫升蒸馏水里，装瓶备用。（三）生理盐水配方一 各种动物需用的生理盐水哺乳类 需用生理盐水浓度是 0.9%。称取 0.9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100 毫升。鸟类 需用的生理盐水浓度是 0.75%。称取 0.75 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。两栖类 需用的生理盐水浓度是 0.65%。称取 0.65 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100毫升。配方二 任氏（Ringers ）生理盐水氯化钠 6.5 克 碳酸氢

25、钠 0.2 克氯化钾 0.14 克 磷酸二氢钠 0.01 克氯化钙 0.12 克先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到 980 毫升。然后取氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内，边滴、边搅拌，以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。7此溶液用于变温动物，尤其常用于两栖类。配方三 乐氏（Lockes ）生理盐水氯化钠 9.0 克 碳酸氢钠 0.10.3 克氯化钾 0.42 克 氯化钙 0.24 克把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混合后加蒸馏水到 980 毫升。把氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水里，逐滴加入上述溶液中。以

26、上溶液用于恒温动物，尤其常用于哺乳类。（四）培养液1、人造海水配方一 氯化钠( ) 24.72 克氯化钾（ ） 0.67 克 氯化钙（ ） 1.36 克氯化镁（ ） 4.66 克硫酸镁（ ） 6.29 克碳酸氢钠（ ） 0.18 克蒸馏水 加到 1 升把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中，再加入碳酸氢钠，最后用蒸馏水稀释到 1000 毫升。配方二 氯化钠 45.0 克 硫酸镁 0.1 克氯化镁 5.0 克 氯化铁（1%溶液） 1 滴先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到 980 毫升。随后取硝酸钙溶解在 20 毫升蒸馏水里，把此溶液逐滴加到上述溶液内，装瓶保存。配方二 克诺普氏（

27、Knops）溶液硝酸钾 1 克 硫酸镁 1 克磷酸二氢钾 1 克 硝酸钙 3 克先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到 980 毫升。随后取硝酸钙，用 20 毫升蒸馏水溶解，加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。在以上溶液中加入蔗糖溶液（14% ），能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。3、植物无土培养液配方 霍格伦德（Hoagland）和斯纳德（Snyder）液硝酸钙 0.821 克 硝酸钾 0.506 克磷酸二氢钾 0.136 克 硫酸镁 0.120 克酒石酸铁 0.005 克把上述盐类溶解在少量蒸馏水里，然后稀释到 1000 毫升。（五）培养

28、基1、细菌培养基配方一 牛肉膏琼脂培养基牛肉膏 0.3 克 蛋白胨 1.0 克氯化钠 0.5 克 琼脂 1.5 克8水 1000 毫升在烧杯内加水 100 毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用 10%盐酸或 10%的氢氧化钠调整 pH 值到 7.27.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌 30 分钟。配方二 马铃薯培养基取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250 克，用刀细细剁成肉末后，加入 500 毫升蒸馏水和 5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖 2 小时。过滤，

29、滤出的肉末干燥处理，滤液 pH 值调到 7.5 左右。每支试管内加入 10 毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。配方四 根瘤菌培养基葡萄糖 10 克 磷酸氢二钾 0.5 克碳酸钙 3 克 硫酸镁（ ） 0.2 克酵母粉 0.4 克 琼脂 20 克水 1000 毫升 1%结晶紫溶液 1 毫升先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。2、放线菌培养基配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉 2 克 硝酸钾 0.1 克磷酸氢二钾 0.05 克 氯化钠 0.05 克硫酸镁 0.05 克 硫酸亚铁 0.001 克琼脂 2 克 水 1000 毫升先把淀粉放在烧

30、杯里，用 5 毫升水调成糊状后，倒入 95 毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整 pH 值到 7.27.4，分装后灭菌，备用。配方二 面粉琼脂培养基面粉 60 克 琼脂 20 克水 1000 毫升把面粉用水调成糊状，加水到 500 毫升，放在文火上煮 30 分钟。另取 500 毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整 pH 值到 7.4，分装，灭菌，备用。3、真菌培养基配方一 萨市（Sabourauds）培养基蛋白胨 10 克 琼脂 20 克麦芽糖 40 克 水 1000 毫升先把蛋白胨、

31、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入 40 克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。配方二 马铃薯糖琼脂培养基把马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块，加水 1000 毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入 10 克琼脂，煮沸溶解后加糖 20 克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。把这培养基的 pH 值调到 7.27.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。配方三 黄豆芽汁培养基9黄豆芽 100 克 琼脂 15 克葡萄糖 20 克 水 1000 毫升洗净黄豆芽

32、，加水煮沸 30 分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到 1000 毫升，分装，灭菌，备用。把这培养基的 pH 值调到 7.27.4，可用来培养细菌和放线菌。配方四 豌豆琼脂培养基豌豆 80 粒 琼脂 5 克水 200 毫升取 80 粒干豌豆加水，煮沸 1 小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。4、食用菌菌种培养基配方一 马铃薯-蔗糖- 琼脂培养基20%马铃薯煮汁 1000 毫升蔗糖 20 克 琼脂 18 克把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块 200 克，加水 1000 毫升，煮沸 20 分钟后，过滤。在滤汁中补足水

33、分到 1000 毫升，即成 20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对 pH 值要求不严格，可以不测定。配方二 综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁 1000 毫升磷酸二氢钾 3 克 硫酸镁 1.5 克葡萄糖 20 克 维生素 10 毫克琼脂 18 克先配制 20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整 pH 值到 6。分装，灭菌，备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。（六）染色剂1、细菌染色剂配方一 齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液甲液 取石炭酸 5 克，溶解在 95 毫升蒸馏

34、水中。乙液 取 0.3 克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入 10 毫升 95%酒精，继续淹没，使它溶解。将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。配方二 罗氏（Loefflers）美蓝染液甲液 取 5 克美蓝，溶于 100 毫升 95%酒精中，制成美蓝-酒精饱和液。乙液 取氢氧化钾 0.01 克（或 1%氢氧化钾溶液 1 毫升），溶液也可用于放线菌染色，0.1%浓度可用于酵母菌染色。配方三 革兰氏（Grams ）染液用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。四种液体的配方如下：甲液（结晶紫液）（1）结晶紫 2 克 95%酒精 20 毫升10（2）草酸铵 0.8 克

35、 蒸馏水 80 毫升使用钱江（1）、（2 ）液相混，静置 48 小时后使用。乙液(碘液)碘 1 克 碘化钾 2 克 蒸馏水 300 毫升将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至 300 毫升。丙液 95%酒精溶液丁液（番红花红液）2.5%番红花红酒精溶液 10 毫升 蒸馏水 100 毫升2、细菌特殊染色剂配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。甲液 取 5 克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到 100 毫升，即成孔雀绿染液。乙液 取番红花红 0.5 克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到 100毫升，集成番红花红复染液。配方二

36、荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。甲液 取结晶紫 0.1 克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到 100 毫升，再加入 0.25 毫升冰醋酸一结晶紫染液。乙液 取硫酸铜（ ）31.3 克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到 100 毫升，即成 20%硫酸铜脱色剂。配方三 鞭毛染液甲液饱和明矾溶液 2 毫升 5%石炭酸溶液 5 毫升20%丹宁酸溶液 2 毫升 乙液碱性品红 11 克 95%酒精 100 毫升使用前取甲液 9 毫升和乙液 1 毫升相混，过滤即可。3、植物细胞壁染色剂配方一 纤维素细胞壁染液（）取固绿 0.1 克，溶于 100 毫升 95%酒精中，即成 0.1%固绿-酒精溶液。该液能染

37、色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。配方二 纤维素细胞壁染液（）氯化锌 20 克 碘化钾 6.5 克碘 1.5 克 蒸馏水加至 100 毫升先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入 6.5 克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到100 毫升，即成碘-氯化锌溶液。该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。配方一 纤维素细胞壁染液（）甲液 取 1 克碘和 1.5 克碘化钾，溶于 100 毫升蒸馏水中，即成 1%碘液。乙液 取 7 份硫酸和 3 份蒸馏水相混，即成 66.5%硫酸溶液。染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。 配方四 木质化细胞壁染液（）硫酸化苯胺（或盐酸话本安） 1 份蒸馏水 70 份 95%酒精 30 份硫酸 30 份将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。