ABO血型系统及定型正反不符dy-.ppt

1、ABO血型系统及定型,上海市血液中心 郭忠慧,正定型（细胞定型）用已知抗体特异性的试剂血清检查红细胞的抗原 玻片法 试管法 微量板法,ABO常规定型,ABO常规定型,反定型（血清定型）用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体 试管法 微量板法,正反定型结果相符时，才可以记录血型结果。,ABO正反不符时,受检红细胞是洗涤后悬浮于NS.吗?是用最敏感的试管法吗?受检者年龄60吗?病人的丙种球蛋白减低吗?病人血清与O型普检红细胞的反应与试剂红细胞一样吗?病人是白血病、肠道阻塞、胃癌、结肠或直肠癌吗？混合视野反应是输血后标本吗？,技术上错误的常见来源,血液标本或试管鉴定不当红细胞悬浮液过浓或过淡及纤维蛋

2、白、小血凝块的干扰人为的书写错误标本混乱忽略观察溶血现象未加入试剂未按照试剂生产商的说明操作离心机校准不良试剂受到污染温度在离心过程中增高,造成正反定型不符的4种变异情况,减弱的或减少的抗原反应未知的抗原反应减弱的或缺少的抗体反应未知的抗体反应,减弱或减少的抗原反应,A或B抗原的亚血型A、B及AB型RBC与试剂抗血清作实验时，预期反应：4细胞分型法减弱的凝集反应：健康献血员可能A/B亚型抗AB 血清能检出某些不与抗A/抗B试剂发生反应的A/B亚型,减弱或减少的抗原反应,疾病状态下,抗原强度减弱如:A型白血病/肿瘤患者在疾病活动期改变为A2或A3亚型 ,疾病缓解期复原疾病状态下,血型物质过量,中

3、和抗A/抗B试剂,造成假阴性/弱凝集: 卵巢囊肿 胃癌 胰腺癌 肠道阻塞对策:试管法 红细胞三洗,未知抗原反应,获得性A奇异变形杆菌感染的O/B: 与抗A反应呈混合视野,未知抗原反应,获得性BRBC反应象AB型,血清中有抗B抗体细胞分型法: A抗原B抗原,获得性B的成因,Gerbal等假设细菌的脱乙酰基酶deactetylases可以将A的免疫结构域糖N乙酰氨基半乳糖胺转化为半乳糖胺。这个半乳糖胺与B的免疫多糖半乳糖非常的相似，可以与某些抗B发生反应。,抗体致敏的红细胞,抗体吸附于红细胞表面，可显示直抗阳性自身免疫性溶血性贫血抗高血压药物输血反应新生儿溶血病放散技术移去抗体,减弱或缺少抗体反应

4、,年龄70丙球蛋白过低血症丙球蛋白缺乏血症,未知的抗体反应,缗钱状凝集冷自身抗体未知的ABO同种抗体未知的其它同种抗体,ABO抗体的区别,天然抗体和免疫抗体,天然抗体未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体O型血清中多为IgG抗A和抗BA/B型血清中大多为IgM抗体免疫抗体妊娠/输血等,缗钱状凝集,球蛋白浓度增高:多发性骨髓瘤/原发性巨球蛋白血症纤维蛋白原增高血管扩张剂霍奇金淋巴瘤新生儿脐带血中的华尔道胶,冷自身抗体,抗I是反定型中最常见的自身抗体有时也见抗i和抗Pr抗I通常凝集所有供者RBC包括患者自身及反定型所用RBC抗I引起的凝集比抗A抗B所引起的凝集弱脐带血所带的I抗原量少通常不被凝集,抗HI

5、,与冷凝集有关的最常见的特异性抗体是抗I有些冷抗体与I和H抗原强的细胞如（O和A2细胞）反应最强，称之为抗HI联合抗体。,冷自身抗体之鉴别,抗I 抗i 抗H 抗HI 抗Pr 成OI + - + + + 成AI + - - - + 脐Oi - + + - +酶OI + - + + +抗HI： O成A2成B/A成脐O脐AB,未知的同种抗体,ABO同种抗体:A2/A2B中的抗A1 A1/A1B中的抗H未知的同种抗体:筛选细胞及反定型中的O细胞一组谱细胞鉴定抗体特异性,ABO亚型,A抗原中主要为A1和A2 其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、和AelB亚型一般比A亚型更少：B3、Bx、Bm和

6、Bel等,判断ABO亚型:,1 红细胞与抗A抗A1抗B及抗AB的凝集程度2 红细胞上H物质活性的强弱3 血清中是否存在抗A14 分泌型人的唾液中A、B和H物质,A1和A2的鉴别,各种弱A亚型的鉴别程序,A2,与人源性抗A试剂的反应强度为4, 与抗H+/2+可能有不规则抗A1存在 (sometimes)1-8% A2和22-35%的A2B存在抗 A1血型物质 A H举例 抗A 抗B Ac Bc Oc 4+ 4+ + - -,A2,A1和A2决定簇的区别是仅存在量的差异还是抗原决定簇结构不同？用A2细胞重复吸收来源于B型个体的抗A血清可以移去所有抗体，表明二者之间仅是量的差别。A2和A2B个体常常

7、产生抗A1，说明A2细胞上缺乏A1细胞上的一种决定簇。,血型前体物质：,Type1 Gal13GlcNAc 1R（血清）Type2 Gal14GlcNAc 1R （红细胞）Type3 Gal13GalNAc1R（红细胞）Type4 Gal13GalNAc 1R （红细胞）Type5 Gal13Gal 1R（人工合成）Type6 Gal14Glc 1R,A1和A2同样存在质的区别,A1细胞出现重复的3型A抗原结构，但A2细胞却没有。抗A1是3型或4型A特异性的，或者抗A1可以优先与3型或4型A反应。,只有A1转移酶能够转化3型H加一个N乙酰氨基半乳糖基成为3型A因此A2细胞上可以检测到3型H而不

8、是3型A抗原。,双花扁豆植物血凝素检测N乙酰氨基半乳糖胺，当过量的浓度下，它可以凝集A2细胞，因此将它用作A亚型分型试剂更多是依赖A1和A2表现型数量上的差异。,A3,最早由Friedenreich在1936年描述与抗A和抗AB共同孵育时：“混合视野外观”（mixed field agglutination）。即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。与抗A反应强度低于A2与抗AB反应呈混合视野,但并不增强偶有抗A1 (occasionally) 血型物质 A HA3不像是A2和O细胞的嵌合体,Aend（Afinn，Abantu）,Aend最早由Weiner 等于1959年描述类似于A3细胞：它们

9、与一些抗A和抗AB表现很弱的混合视野外观Aend分泌型的唾液中只有H物质，但是无A物质抗A1出现在部分Aend个体的血清中10细胞凝集（Mf）,Am,Am细胞不能被抗A和抗AB凝集，或者仅能发生很弱的凝集。Am细胞可以吸附放散抗A 。Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物质，Am血清中通常无抗A1。Am作为ABO位点上一个稀有的等位基因遗传Am在法国献血者的频率是150 000中有1例。（A型人中占0.0015%），中国台湾的数据是400 000万人中1例。,Am,抗原性较弱 抗A: - / w+抗H 4+(甚至会超过Oc)无抗A1产生,与抗AB反应不增强血型物质: A H,Ax,Ax表现型

10、最初由Fischer和Hahn于1935年报道，它的主要血清学特点是：红细胞与多数来源于B型血清的抗A不发生反应，但是可以被大多数来源于O型个体的抗AB凝集，没有混合视野表现。血清中含有抗A1，后者有时候可以凝集A1和A2细胞。除了H物质，Ax分泌型个体唾液中可以捡出痕量的A物质,Ax,抗A: -/ w+抗H:4+(与Oc的抗H差不多)常有抗A1(Frequently) ,比A2 A3都高与抗A+B的反应比抗A明显增强血型物质 H,Ax,Ax表现型具有很高的遗传异质性：许多家系资料表明Ax以ABO位点上一种稀有的等位基因的方式遗传在一些家庭中遗传背景不清楚在两项独立的研究中，法国Ax的频率为1

11、/77000 (A型人中的0.003%)和1/44000,Aint,与抗A1反应较弱 2+与抗A及抗H反应较强 4+/3+仅有A1和Aint的细胞与抗A1发生反应,Aint,Landsteiner和Levine：有些A型个体的红细胞既不能定义为A1也不能定义为A2Aint在黑人中较白人更为常见，Aint是作为ABO位点上的一个等位基因遗传的。它的H抗原强度象A2一样强，甚至更强。,Ael,在通常的条件下，Ael细胞与抗A和抗AB不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体可以通过吸收放散技术检测到Ael分泌型唾液中无A物质，仅有H物质，血清中常含有抗A1，也可以含有能够凝集A2细胞的抗体,

12、Ael,在Ael血清和红细胞膜上不能检出A转移酶。在法国150000例献血者中，没有检测到Ael表现型，在中国台湾400000人中捡出5例Ael个体Ael以ABO位点上的一种稀有的等位基因遗传的。,Aw,Olsson等对其它弱A亚型的ABO基因的外显子、剪切部位和启动子进行序列测定那些表现型不太容易被划分到任何现存的分类中。这些异常的基因被称作Aw（15）。,Subgroups of A,B亚型,弱的B变异型是很少的。可能是由于在许多群体中B基因的频率要相对低得多。弱B亚型较难以分类。Salmon做出结论：B亚型最好的分类应参照A变异型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4种类型

13、的Bw。,B3,1972年 Wiener和Cioffi首先报道一例ABH非分泌型B3。它被作为最稀少的一种B亚型 这种表现型以与抗B和抗AB呈现混合视野反应为特点血清中缺乏抗B唾液中含有正常含量的B抗原B3通常是由于ABO位点上的稀有等位基因所致。,Bx,一种异质性的血型典型的Bx红细胞与抗B和抗AB呈弱凝集。血清中含有弱的抗BBx分泌型唾液中含有一些B物质，后者常常仅能通过Bx细胞与抗B的凝集抑制试验才能检测到Bx是ABO位点上的一种稀有的等位基因。,Bm,Bm细胞不能被抗B或抗AB凝集B抗原仅能通过敏感的技术比如吸收放散抗B才能检测到。Bm分泌型唾液中B物质的含量接近正常BBm个体的血清中

14、不含有抗B。通常Bm是作为ABO位点上一个变异的基因来遗传的，但是有几个例外报道。,Bel,Bel红细胞与抗B和AB不发生凝集反应，但是它们的确可以结合抗B，抗体可以通过放散技术被检测到。Bel分泌型唾液中不出现B物质，血清中可能存在抗B抗体。Bel作为ABO位点上的稀有基因而遗传，,Bw,Olsson等确认了7种新的等位基因，它们与正常B基因相比有1个核苷酸改变，导致一个氨基酸的取代（见表2.19Bw2到8），所有这些等位基因与B的弱表达相关，但是没有做进一步分类。,正反不符的解决,正定型中意外阳性或阴性洗涤细胞加入自身对照增加血清/细胞比例降低孵育温度,延长孵育时间 4 /22 /37 1

15、5min-30min镜检用不同来源的抗体试验用人源性试剂作吸收放散(并作相应对照),吸收放散试验 检测红细胞上的弱A/B 抗原,NS.三洗受检1ml红细胞加入等量人源性抗A或抗B充分混匀41小时，离心去上清4冷盐水充分洗涤细胞58次（留末次洗涤液）56热放散检测放散液及最后一次洗涤液注意：要有阴阳性对照,正反不符的解决,反定型中意外阳性或阴性A1细胞阳性,A2细胞和筛选细胞阴性,自身阴性: 可能是含有抗A1的A或AB型部分筛选细胞阳性,自身阴性: 血清中可能含有意外抗体,用一组谱细胞,确定抗体特异性,正反不符的解决,室温盐水反应抗体:MN、P、Lewis抗人球试验阳性抗体：Ss Rh Kell Duffy Kidd排除冷抗体及缗钱状凝集 ： HI抗体 排除多凝集 ： 同型成人新鲜血清、脐带血清 植物血凝素（Tn、T抗原活化）酶处理的成人O细胞,