荧光显微镜操作手册.doc

1、荧光显微镜操作手册Olympus BX51物镜： 4 0.16 （无 DIC） 100.40 200.75 401.00 oil 1001.40 oil 荧光滤色块转盘： 1. WU 蓝2. WIB 绿（长通）3. WIBA 绿（带通）4. WIG 红5. CFP 青6. YFP 黄操作步骤：（注意：样品须在低倍镜下放置和取下）DIC 观察：1. 打开明场电源开关（“”为开， “”为关）2. 将样品置于载物台上，用样品夹夹好3. 将起偏器、检偏器、DIC 棱镜推入光路，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC 棱镜应与相应的物镜倍数相匹配4. 先选用低倍物镜（“10” ）5. 调节透射光的强度，调节

2、焦距，找到视野6. 换到高倍镜头，观察样品7. DIC 观察时，光路选择拉杆拉到中间位置，既可观察，也可拍照荧光观察：1. 打开明场电源开关2. 打开汞灯电源开关3. 将样品置于载物台上，用样品夹夹好4. 检偏器、DIC 棱镜在光路外5. 将荧光光路 shutter 打开（“”为开， “”为关） ，需保护样品时关闭 shutter6. 光路选择拉杆推至最里边7. 根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置8. 通过两组减光滤片调节激发光强度9. 从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野，10. 依次换到高倍镜头，观察样品11. 拍照时光路选择拉杆完全拉出普通明场观察：1. 打开明场电源开关（

3、“”为开， “”为关）2. 将样品置于载物台上，用样品夹夹好3. 起偏器、检偏器、DIC 棱镜在光路外，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC 棱镜拨到明场（BF）位置4. 先选用低倍物镜（“4” ）5. 调节透射光的强度，调节焦距，找到视野6. 依次换到高倍镜头，观察样品7. 光路选择拉杆拉到中间位置既可观察，也可拍照关机：1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启）2. 将透射光调到最小，关闭明场电源开关3. 将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头4. 确认数据已经保存，关闭软件5. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据

4、）6. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况Olympus IX71物镜： 物镜倍数 相差环4 0.13 PHL 100.30 PH1 200.45 PH1 400.60 PH2 601.35 oil （无相差） 荧光滤色块转盘： 1. WU 蓝2. WIB 绿（长通）3. WIBA 绿（带通）4. WIGA 红5. CFP6. YFP操作步骤：相差观察：1. 打开明场电源开关（“”为开， “”为关）2. 将样品置于载物台上3. 将光路选择旋钮调至观察位置4. 从低倍镜开始观察，调节到与镜头相匹配的相差环，荧光滤块转盘拨到 “1”的位置5. 调节透射光光强，调节焦距，找到预观察视野6.

5、依次换到高倍镜， （注意调节相差环）观察样品7. 拍照时将光路选择旋钮调至相机位置荧光观察：1. 打开明场电源开关2. 打开汞灯开关3. 将样品置于载物台上4. 将荧光光路 shutter 打开（“”为开， “”为关） ，需保护样品时关闭 shutter5. 将光路选择旋钮调至观察位置6. 根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置7. 通过两组减光滤片调节激发光强度8. 从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野，9. 依次换到高倍镜头，观察样品10.拍照时将光路选择旋钮调至相机位置普通明场观察：1. 打开明场电源开关（“”为开， “”为关）2. 将样品置于载物台上3. 将光路选择旋钮调至观

6、察位置4. 从低倍镜开始观察，相差环拨到明场（BF）位置，荧光滤色块转盘拨到 “1”的位置5. 调节透射光光强，调焦，找到预观察视野6. 依次换到高倍镜，观察样品7. 拍照时将光路选择旋钮调至相机位置关机： 1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启）2. 将透射光强调到最小，透射光选择按钮按出3. 关闭明场电源开关4. 将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头5. 确认数据已经保存，关闭软件6. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据）7. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况Olympus SZX16物镜： 1变倍

7、： 0.711.5荧光滤色块转盘： UV 蓝 GFPHQ 绿RFP2 红操作步骤：明场观察：1. 将样品置于载物台上2. 推入光路选择拉杆，荧光滤块转盘拨到空位3. 选择合适的光源1冷光源观察使用不透明的底板（黑或白） ，打开环形光电源开关（“”为开， “”为关） ，调节光强度，找到预观察视野，调节变倍比，观察样品2底光源观察使用透明玻璃底板，打开底座电源开关（“”为开， “”为关） ，将LBD 滤片推入光路，调节反光镜方向、对比度和光强度，找到预观察视野，调节变倍比，观察样品4. 拍照时将光路选择拉杆拉出荧光观察：1. 将样品置于载物台上2. 一般选择黑色不透明底板3. 打开汞灯电源开关4.

8、 荧光光路挡板推出5. 根据样品的标记情况将荧光滤块转盘转到相应的位置6. 找到预观察视野，调节变倍比7. 观察样品8. 拍照时将光路选择拉杆拉出关机：1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启）2. 将明场光强调到最小，关闭明场电源开关3. 取出样品，将变倍比调到最小4. 确认数据已经保存，关闭软件5. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据）6. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况软 件 应 用1. 双击打开 DP Controller 软件2. 点击预览键，选择 image size(一般 1360 X 1024)、objectiv

9、e、ISO sensitivity(明场拍照选择 ISO200，荧光拍照选择 ISO400)、exposure mode(一般选择 manual)，调节exposure time3. 调节黑/白平衡（明场拍照用白平衡，荧光拍照用黑平衡） 。点击 color 面板，点击 one touch 在图片背景位置选个小框，软件自动做好平衡4. 若需添加标尺，点击 scale 面板，选中 show scale，选择标尺显示模式和长度，选中free size，改变标尺长度5. 若需调整图象色阶，点击 level 面板，拖动小滑块调整色阶，可以改变图象对比度6. 点击 capture 面板，还可再次调节曝光时

10、间、图象亮度及对比度。点击拍照键，获取图象7. 此时弹出 DP manager 软件，选择保存图象格式保存图象到硬盘上8. 若需将不同通道图象合成，可点击 DP manager 软件中 imageimage composition，选择需合成图片的名称，点击 apply，merging image 生成，保存合成图象9. 若需拍摄 Timelapse,点击 Timelapse/Movie 面板，选择拍摄模式，选择拍摄时间、间隔时间等参数，再点击 capture 面板点击拍摄键，即可拍摄连续图片注意事项1. 工作日使用仪器,开关机器、汞灯由工作人员负责，操作者不得自行开关！2. 若使用油镜，使用完毕后，镜头的檫拭也由工作人员负责。3. 中午、晚上及双休日为经过培训后具有完全独立操作资格使用者的使用时间，需本平台特批，课题组长签字同意并担保仪器的使用安全。