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临床药理学实验.ppt

1、临床药理学实验,临床药理学实验基本要求,预习实验指导分组领用器械实验室卫生实验报告HPLC外标法检测血浆左氧沙星的浓度反相-高效液相色谱法测定人血浆双氯芬酸钠浓度病例讨论,实验报告格式,实验名称目的方法结果讨论,实验一 HPLC外标法检测血浆左氧氟沙星的浓度,【实验目的】掌握血浆样品的预处理方法。掌握高效液相色谱外标法检测血浆药物浓度的原理。了解高效液相色谱仪的原理及应用。,【实验步骤】1.标准曲线的制备1.5mL EP管7支,编号空白血浆0.5mL分别加入不同量的左氧氟沙星标准工作溶液,配成浓度相当于0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00g/mL的血浆样品经预处

2、理后,进样检测测定峰面积值(A),以A与浓度C作线性回归,求出标准曲线方程。,2.血浆样品的采集健康志愿者口服200mg盐酸左氧氟沙星胶囊分别在不同时间点抽取静脉血3mL,放入肝素化试管 0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、4.0h、6.0h、9.0h、12.0 h、24.0h离心(3 000转/分10 min),取血浆待测,3.血浆样品的处理()1.5mL EP 2支,编号血浆样品0.5mL70%高氯酸30L旋涡振荡20秒15000rpm离心10min取上清液20L进样检测,4.色谱条件色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6150m

3、m,5m,Agilent,USA)保护柱:XDB-C18保护柱(4.612.5mm,5m,Agilent,USA)流动相:乙腈-水-2%冰醋酸(18:12:70,V/V/V)流速:1.0mL/min,柱温:20,检测波长:294nm,参比波长:380nm,检测灵敏度:0.1mAU。,【结果】根据测得的A值和标准曲线,求出浓度。全实验室汇总,以时间t为横坐标,浓度C和lgC为纵坐标作图。时间:0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、4.0h、6.0h、9.0h、12.0 h、24.0h,【讨论】左氧沙星样品预处理方法和检测方法药时曲线,左氧沙星,广谱抗菌作用:多

4、数肠杆菌科细菌,金黄色葡萄球菌等革兰阳性菌和肺炎支原体,肺炎衣原体。,单剂量口服0.2g后,血药峰浓度(Cmax)约为1.6mg/L,达峰时间(Tmax)约为1小时。血消除半衰期(t1/2)约为6小时。蛋白结合率约为30%40%。组织和体液中的浓度与血药浓度之比约在1.12.1之间。主要以原形自肾排泄,在体内代谢甚少。,生物样品的预处理:溶剂萃取法:乙醚、乙酸乙酯、正己烷、苯,旋涡混合后转移有机溶剂层并挥干,用流动相复溶后检测。蛋白沉淀法:乙腈、甲醇、高氯酸、三氯醋酸(蛋白沉淀剂) ,旋涡混合后高速离心一定时间,上清液可直接检测。,高效液相定量方法内标法:内标法就是用在样品中定量加入要分析的物

5、质,通过测得的实际样品量和加入样品量的比值来定量所要分析的样品含量。外标法: 用待测组分的纯品作对照物质,以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。 外标一点法和标准曲线法。内标法标准曲线法,微生物检测法和高效液相检测法,实验二反相高效液相色谱法检测人血浆中双氯芬酸钠的浓度,【实验目的】掌握高效液相色谱内标法检测血浆药物浓度的原理了解高效液相色谱仪的原理及应用。,【实验步骤】1.标准曲线的制备1.5mL EP管7支,编号空白血浆0.5mL分别加入不同量的双氯酚酸标准工作溶液,配成浓度相当于0.025、0.05、0.100、0.250、0.500、1.000、2.500

6、、5.000mg/L血浆标准溶液经预处理后,进样检测测定峰面积值(A),以A与浓度C作线性回归,求出标准曲线方程。,2. 给药及血样采集每人口服单剂量双氯芬酸钠栓剂100mg于给药前,给药后0.167h、0.333h、0.667h、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h、4.0h、6.0h、8.0h、12.0 h静脉取血3mL,放入肝素化试管离心(3000转/分10 min),分离血浆注意:实验前晚禁食(禁食不禁水)12 h,次日7:00排空膀胱后服药,给药2 h后方可饮水,4 h后进统一餐,3.样品处理10mL具塞试管:血浆0.5mL,加人2mol/L HCL100L,40L内标液(吉非罗齐

7、or卡马西平)。振荡30秒,加乙醚5.0mL,混旋2min,静置10min将有机相4mL转移至10mL刻度离心试管中37C水浴挥干,加流动相100L复溶,进样20L用内标法峰面积定量分析。,4.色谱条件:色谱柱:HypersilC18柱(4.6mm250mm,5um,Agilent,USA);保护柱:ezs柱(大连依利特科学仪器有限公司)流动相:甲醇:1.5%冰乙酸(72.5:27.5,v/v)流速:0.9mL/min;检测波长276nm;柱温:室温。,【结果】内标法定量汇总不同时间的血药浓度DAS软件处理,【讨论】双氯酚酸萃取法内标法药动学特征,Drug And Statistics,病例讨

8、论1,患者男,75岁。有帕金森病史3年,服用美多巴超过半年。美多巴剂量早250mg、中、晚各125mg。入院前连续4个月无明显诱因出现反复头昏,心前区和胸骨后烧灼感,恶心,腹部饱胀不适,大便干结,焦虑不安,失眠,每次发作几小时至1d不等,可逐渐自行缓解。入院时检查:T36.7,P 73次/min,R 20次/min,BP 130/80mmHg。焦虑病容,神清,慌张步态,行动缓慢,上肢轻微静止震颤,语声低微,语速缓慢,肌肉僵直,颈略强直,双肺未闻及干湿鸣,心界不大,HR 73次/min,律齐,各瓣膜听诊区未闻及杂音,腹部平软,无压痛,反跳痛,肝、脾肋下未及,肠鸣音5次/min,双肾区无叩痛,双下

9、肢不肿,病理征未引出。入院后三大常规正常,肝、肾功,电解质、血脂正常。胸片:心肺未见异常;B超:前列腺明显肿大;床旁心电图:窦性心律,电轴不偏,P波略低平,无ST-T的改变。胃镜:浅表性胃炎,Hp,阴性。入院后患者无规律地反复出现上述症状,对症治疗:胃粘膜保护、增强胃动力、通便、抗抑郁等,均无效。后调整美多巴剂量:美多巴总量500mg/d不变,平分1次/6h服用;总量调整为375mg/d,1次/8h平分服用,上述症状消失两日后又复发;总量375mg/d,1次/4h平分服用,以上症状消失,持续7d未再出现。患者轻微震颤等PD症状无加重。好转出院。,分析:1.帕金森病是一种慢性进行性疾病,主要症状

10、为震颤,肌肉僵直,运动障碍和语言、姿势方面的改变,严重影响患者的生活质量。主要的病理机制是黑质纹状体系统多巴胺神经元退行性病变,胆碱能神经相对占优势,多巴胺能和胆碱能系统功能失平衡。目前的药物治疗主要是着眼于重建纹状体递质的平衡,即提高DA水平(拟多巴胺药)或降低Ach水平(抗胆碱药)。,2.美多巴为L-多巴与外周多巴脱羧酶抑剂苄丝肼的复方制剂。目前仍是治疗PD的有效、常用药物之一。L-多巴为体内合成多巴胺等的前体物质,本身并无药理作用,通过血脑屏障进入中枢,经多巴脱羧酶作用转化成DA而发挥药理作用。改善肌强直和动作迟缓效果明显,持续用药对震颤、流涎、姿势不稳及吞咽困难亦有效。对轻、中度病情者

11、效果较好,重度或老年病人效果差。苄丝肼为外周多巴脱羧酶抑制剂。L-多巴有95%在肝脏转化为DA,合用苄丝肼可减少在外周的转化,使进入中枢的量增多,提高疗效并减少外周DA引起的副作用。,3.L多巴常见的不良反应:胃肠道反应有恶心,呕吐、食欲不振,见于治疗初期,约80病人出现症状。用药3个月后可出现不安、失眠、幻觉精神症状,此外尚有体位性低血压、心律失常及不自主运动等。应注意调整剂量,必要时停药。“开关”现象(患者突然多动不安为“开”,而后又出现肌强直运动不能为“关”)见于年龄较轻的病人,约在用药后8个月左右出现。可采用减少剂量或静注本品扭转或控制这一现象。本例PD患者是典型的服用美多巴后出现消化

12、系统症状及焦虑、抑郁等精神症状。,4.本例患者经过减少日剂量或日剂量不变,改为少量多次服用后不良反应消失。说明美多巴可通过少量多次服用相同日剂量来减少其引起的不良反应。5.其他注意事项:与维生素B6或氯丙嗪等合用疗效降低;禁与单胺氧化酶抑制剂、麻黄碱、利血平及拟肾上腺素药合用;消化道溃疡、高血压、精神病、糖尿病、心律失常及闭角型青光眼患者禁用。,病例分析2,患者男,30岁。行为异常、多疑6年,因近10个月少语,睡眠差入院,诊断为“有精神病状的抑郁症”。检查:T36.8,P 96次/min,BP 132/82mmHg,既往体健,无药物过敏史,无血压病史。,入院后给予氯氮平片,中午150 mg,晚

13、225 mg,用药期间监测血压正常。氯氮平治疗13d后加用氟西汀分散片,20mg。联合用药第2天患者血压升高到150/105 mmHg, 36.2, P 94次/min,血常规检查正常,患者主诉轻微头昏,无恶心呕吐、头痛及其他不适。,入院第21天,氯氮平减:中午125 mg,晚200 mg;氟西汀分散片加量:早40 mg。剂量调整后,血压升高到160/110 mmHg。患者安静合作,情绪偏低,当日多次监测血压,波动于130160/80110 mmHg,未给予抗高血压治疗。次日停用氟西汀分片,氯氮平进一步减量:中午100 mg,晚175mg。2d后血恢复至130/80mmHg,患者自觉情绪低落有

14、明显改善。改氯氮平+碳酸锂治疗,氯氮平剂量:中午25 mg,晚125 mg;碳酸锂剂量:中午0.5g,晚0.5g。血压无明显波动,2个月好转出院。,讨论,1抑郁症的药物治疗:氟西汀,氯氮平2.判断药物不良反应的标准患者既往无高血压病史,治疗前血压正常。氟西汀联合氯氮平治疗后,患者出现头晕,血压升高到150/105mmHg。氯氮平减量、氟西汀增量后,血压继续升高至160/110 mmHg。停用氟西汀,氯氮平进一步减量, 2 d后患者血压恢复正常,因此考虑患者的血压升高与氟西汀及氯氮平均有关系。合并氟西汀1 d后即发现血压升高;氟西汀加量、氯氮平减量后血压继续升高;停用氟西汀、继续服用氯氮平,血压

15、正常,故认为氟西汀分散片致高血压的可能性大,但也不排除两药联用所致。,3.是否为5-羟色胺综合征氟西汀为选择性5-羟色胺再摄取抑制剂,可以引起5-羟色胺综合征,其典型表现有心动过速、高血压和高热等。该患者体温、心率正常,可排除由氟西汀片引起的5-羟色胺综合征的可能。4.结论:氟西汀分散片和(或)氯氮平片引起血压升高明显,但其机制不明,有待进一步研究。,病例分析3,患者男,59岁,2年前起无明显诱因出现呼困难,伴全身大汗、乏力,双下肢水肿.去年起出现呼吸难伴意识丧失,全身紫绀,机械通气治疗好转。今年初呼吸困难再次加重入院。既往有高血压病、2型糖尿病、混型高脂血症、酒精肝、肾功不全、肾结石等病史。

16、检查:血压正常,口唇紫绀,颈静脉充盈,巩膜黄染,双下肺叩诊呈实音,呼吸音减弱,腋前线以外可闻及湿罗音.心界向左下扩大,心率71次/分,律齐,各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音。腹部平软,肝肋下4 cm,质中,脾肋下未及,肾区无叩击痛,移动性浊音阴性,双下肢重度水肿,双侧足背动脉搏动消失.超声提示双侧胸腔积液。,考虑主要诊断:冠心病,不稳定型心痛,心功能不全,心功能34级;胸腔积液原因待查(心能不全?肿瘤?结核? )入院后经改善心肌供血及心功,降压、降糖、调脂等治疗,上述症状好转。住院20天突发吸困难伴意识丧失,经简易呼吸器辅助呼吸好转。10天后再次无诱因出现上述症状,紧急气管插管、机械通气、吸氧后有

17、好转,但仍有呼吸困难。经详细询问病史,患者因肾绞痛口服盐酸曲马多150250 mg/d长达4年,于今年初自行停用。此后每次呼吸困难时,给予盐酸曲马多2550 mg口服,约3 min内症状缓解。同时联合应用硝普钠、多巴胺以及利尿、强心等措施控制心衰,症状好转。后家属强烈要求听从戒毒科会诊意见,减少盐酸曲马多用量,患者戒断症状控制不佳,最终死于感染性休克引起的多脏器功能衰竭。,经验教训:询问病史要全面详细,以免漏诊;药物成瘾患者应先治疗其他危及生命的疾患,如心衰、感染等,待治愈或控制良好后,再到戒毒所进行正规戒毒治疗;及时行气管插管、机械通气可挽救呼吸衰竭患者生命,但呼吸机相关肺炎不能完全避免,且治疗困难,尤其合并肾功能不全时,可能发展为致死性感染;慎用盐酸曲马多,防止长期服用导致依赖,特别是对于曾有阿片类物质依赖基础的患者,更需防止形成新的药物依赖.,

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