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乳酸菌的分离纯化毕业设计1解读.doc

1、LUOYANG NORMAL UNIVERSITY2015 届 毕 业 论 文乳酸菌的分离纯化及抑菌实验院 ( 系 ) 名 称 生 命 科 学 学 院专 业 名 称 生 物 技 术学 生 姓 名 勾 倩 倩学 号 111344045指 导 老 师 易 力 副 教 授完 成 时 间 2015 年 5 月 7 日Comment 微微微微1: 因为什么,做了什么实验,得出什么结论Comment 微微微微2: 前言内容太少,乳酸菌的好处多陈述一些0乳酸菌的分离纯化及抑菌实验勾倩倩生命科学学院 生物技术专业 学号:111344045指导教师:易立 副教授摘要:本文对乳酸菌的分离纯化,革兰氏染色以及抑菌实

2、验进行阐述,从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌,革兰氏染色进行鉴定,最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验!实验主要是分离纯化,革兰氏染色,最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。关键词:乳酸菌:分离纯化;革兰氏染色;抑菌乳酸菌 (LA B ,Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称,这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中 1,2。在自然界中比较常见,用途广泛,它可以改善食物的风味,并延长食品的货架期,作为保健食品和药品,可以改善和提高人的健康水平,延年益寿,还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物 3。酸菜是世界性大

3、众化蔬菜腌制品,在我国历史悠久 4,其自然发酵的主要菌群是乳酸菌 5。人体在摄人发酵酸菜时,也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物 6。乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌,在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。因此在微生物学和食品科学的研究中,对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的 7。本实验从酸菜中分离纯化得到 6株乳酸菌(1,2,3,4,5,6), 进行革兰氏染色,为紫色杆状,最后进行抑菌实验,比较 6株乳酸菌的抑菌能力。1 材料与仪器1.1 菌种乳酸菌1.2 样品来源Comment 微微微微3: 方法里的图片是很常规的,不用要1市售新鲜酸菜1.3 培养基(1)乳酸菌分离培养基(固体

4、MRS培养基):蛋白胨 5g,酵母膏 2.5g,牛肉膏5g,葡萄糖 10g,磷酸氢二钾 1g,柠檬酸铵 1g,乙酸钠 2.5g,硫酸镁 0.29g,硫酸锰0.125g,吐温 80 0.5 mL,琼脂 8.5g,蒸馏水 500mL,pH7.0(2)乳酸菌纯化培养基:MRS 培养基+1%的碳酸钙溶液(碳酸钙 1g,蒸馏水100mL)(3)乳酸菌富集培养培养基(液体 MRS培养基):蛋白胨 5g,酵母膏 2.5g,牛肉膏 5g,葡萄糖 10g,磷酸氢二钾 1g,柠檬酸铵 1g,乙酸钠 2.5g,硫酸镁 0.29g,硫酸锰 0.125g,吐温 80 0.5 mL,蒸馏水 500mL,pH7.0(4)抑

5、菌实验培养基(牛肉膏蛋白胨培养基):牛肉膏 1.5g,蛋白胨 5g,NaCl 2.5g,琼脂粉 7.5g,水 500mL,pH7.21.4 仪器及用具 恒温培养箱,高压蒸汽灭菌锅,超净工作台,培养皿,锥形瓶,移液枪,涂布棒,接种针2 方法与过程 2.1 酸菜中菌种的分离培养(平板涂布法)吸取汤汁 0.1ml,加入 9ml无菌水中进行 100倍稀释,依次做 5个梯度,每个梯度分别取 0.2ml涂布于灭好菌 MRS培养基中,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀,然后用封口膜封住培养皿,平放于试验台上 20 min,然后倒置于 37恒温箱中培养 48h。2.2 酸菜中菌种的纯化培养(平板划线法

6、)248h 无菌条件下,从培养基中挑选不同的菌落,放入 1.5ml 无菌水中稀释,用接种环挑取菌液,用平板划线法接入含有 1%碳酸钙的 MRS 培养基,用封口膜密封培养皿,倒置放在 37恒温培养箱中培养 48 小时。2.3 革兰氏染色在洁净的载玻片上加蒸馏水一滴,然后用接种环分别挑选取少量培养基透明圈中的单菌落与水滴混匀,涂开,而后将此玻片在酒精灯火焰上通过 34 次,使细菌固定在载玻片上。然后,加草酸铵结晶紫液,染 12min,水洗并除尽水滴。然后在涂片上滴加碘液,染 12min 除尽水滴。而后在涂片上,滴加复红乙醇溶液,维持 1min,水洗,用吸水纸轻轻吸干,最后进行油镜镜检。2.4 抑菌

7、实验3首先用打孔器制作药敏片并高温灭菌。然后把培养在液体培养基里的乳酸菌倒在灭过菌的培养皿上,做好的药敏片放在里边浸泡 20 分钟左右,拿出来沥干(药敏片仍然是湿的,但是没有水珠)。其次,倒平板,分别涂布金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。最后,每个培养皿放 4 个药敏片。用封口膜密封培养皿,倒置放在 37恒温培养箱中培养 24 小时。2.5 保种甘油和乳酸菌菌液 1:1 放在冻存管中,放在冰箱20保存。3 实验结果3.1 分离培养结果乳酸菌菌落大约 1-3 mm,圆形隆起,表面光滑,呈乳白色、灰白色或暗黄色。3.2 纯化培养结果分离纯化放在一起,是一个统一的过程,需要看到的是单菌落照片,这几张照片没任何体现。453.3 革兰氏染色结果6紫色棒状乳酸菌,证乳酸菌为革兰氏阳性菌3.4 抑菌实验结果7分离得到的 6 株乳酸菌8金黄色葡萄球菌抑菌效果

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