1、Page : 1 CE-SDS(非还原）与SEC-HPLC方法比较报告人：袁梵雨、谢敏、娄昆、陈小龙Page : 2 CE-SDS(非还原法）原理简介：毛细管电泳是以高压直流电场为驱动力，以毛细管为分离通道。毛細管內先填充凝胶，此时凝胶会在毛細管內形成分子筛，样品依分子量的大小在毛細管內移动速度不同而进行分离，能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。Page : 3 CE-SDS(非还原）仪器组成毛细管电泳系统的基本结构包括进样、填灌/清洗、电流回路、毛细管/温度控制、检测/记录/数据处理等部分。Page : 4 CE-SDS(非还原）检测器Page : 5 CE-SDS(非
2、还原）进样方式1. 流体力学进样方式（1）进样端加压（2）出口端抽真空（3）虹吸进样进样量：毛细管长度的1%-2%；nL级、非常小；2. 电动进样方式毛细管一端插入样品瓶，加电压。3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。Page : 6 CE-SDS(非还原）工作电压的确定1、在电泳条件下，改变电压（或电流）测定对应的电流（或电压）2、做电压电流曲线3、取线性关系中的最大电压（或电流），作为分离电压（或电流）。线性以上的电压，焦耳热效应过大，一般不宜选用。但如果分离效率很高，就可以选用，以便加快分离速度。在做CGE时，电场强度应控制在150400V/cm之 ， 的 。电泳温度的选择
3、电泳温度的选 ， 毛细管 温度的选 控制。温度变 不 分离的 性， 分离效率。温度选 应 ：热效应控制、 性控制、分离效率控制 分离 对温度的 制等。数下，在2030之 进电泳，就currency1“的分离结果。Page : 7 各试剂的作用 SDS-MW Sample Buffer： 由于蛋白是两性的，与SDS结合会使蛋白带负电荷，使其在毛细管中往正极方 移动。 蛋白 ： 移时 的 。 ：与 离 ， 其 。样品理：在1.5mL离管中SDS-MW Sample Buffer 50L， 蛋白 2L， 10Lcurrency1。“试品 2.5mg/L）40L，currency1。离管于70fif
4、l 10min，currency1，温 。3000rpm离60s， 90LPCR管中。CE-SDS(非还原）Page : 8 2010中”仪器的 ：毛细管：性毛细管， 50m75 m使用较 。分离度 ， 选用20cm-100cm度。CE-SDS(非还原）流高压电：fi用0-30kV（或fl ）可流电，可应300 A电流。 压流”方式可选 。洗进样系统：进样之 毛细管 用不 洗。进样方式压力进样，压进样，虹吸进样电动进样。通过控制压力或电压时 控制进样量。检测系统：毛细管 出口端的 2mm一， ，毛细管一 一 ， 在毛细管上， 过毛细管电 。对 吸 或 的 的检测， 可fi用 测定， 在作 中
5、加入对 吸 或 的 加，在 检测口时出 方的 。Page : 9 电泳 的pH：pH能样品的 离能力，样品在极性 的介 中离度 大，电泳速度 大， 而分离选择性分离 敏度。 CE-SDS(非 ）高电压 电压 CE快速、高效的 ，电压 高，样品的 加大，分 时 分离电压 ，分离效果 毛细管中焦耳热 大，基线定性 ， 度 分 时 延长， 形变宽， 分离效率 分离电压： 温度 ：温度分离 性分离效率。温度 高， 度 ，分 时 减，分 效率 高。 温度 高，会 毛细管 温 大， 效 ，效 ，分离效率 会 。 Page : 10 SEC-HPLC (SEC)是 用 凝胶定 的 性，而的 依分子 大小的 来分离的 方法。简介：分离机理：定 是 性凝胶，大分子不能进凝胶 洞而完全被 ，只能沿凝胶粒子 的空隙通 ，首先被洗脱出来；中等大小的分子能进凝胶中 些适当的 洞中， 不能进更小的微 ，在中受到滞留，较慢地被洗脱出来；小分子 进凝胶中绝大部分 洞，在中受到更 的滞留，会更慢地被洗脱出。
