1、SDS 软件基本操作方法1、启动设备 先开电脑,再开定量 PCR 仪主机电源,最后启动SDS 软件。2、新建文件 菜单 FileNew,assay 选择 Absolute Quantification(实时定量模式) ,打开一个空白文件。3、探针设置 双击任意一个孔打开 Well inspector 窗口。点击Add Detector 按钮,打开 Detector Manager 窗口。点击File New,新建探针(探针名称建议使用 “基因_荧光”格式,如GAPDH_FAM、ACTIN_VIC 等) 。设置报告基团(FAM 或者 VIC)和淬灭基团(TaqMan 探针选 TAMRA;MGB
2、探针和 SYBR Green 染料选None)等。完成后点 OK。在 Detector Manager 窗口选择相关探针,点击 Add to Plate Document 按钮。点击 Done 关闭Detector Manager。4、填样品表 在 96 孔表中选定样品孔,在 Well inspector 页面的 Sample Name 栏中填入样品名称;在探针列表的 Use 选项下的方框中打钩选择探针;在 Task 栏中选定样品类型(阴性对照选 NTC;未知样品选 Unknown;标准品选 Standard。对于标准品Standard,还要在 Quantity 栏中输入浓度或者拷贝数。参比荧
3、光(Passive Reference)选 ROX) 。关闭 Well inspector 窗口。5、循环参数 切换到 Instrument 页面,循环参数不需要修改,定量 PCR 的标准反映体积是 50L 。6、启动扩增 点 Save 按钮保存文件。确认 96 孔板在主机内放置妥当后,点击 Start 按钮开始 PCR 循环。7、保存结果 程序结束后,点 Disconnect 按钮,然后File Save 保存实验结果。8、数据分析 点击自动分析实验结果。切换到 Result 页面,进入扩增曲线(Amplification Plot)子页面查看图谱。切换到Report 子页面,查看实验报告。保存结果。从 File 菜单中选择 Export,再选择数据类型,输出数据。水产养殖实验教学中心二一五年六月