1、课程：基础生物化学实验学院： 班级： 学号： 姓名： 成绩： 评阅教师： 实验一 蛋白质的等电点和含量测定1蛋白质的等电点测定（pH 值沉淀法）一、实验目的1学习和掌握蛋白质的两性解离性质。 2掌握 pH 值法测定蛋白质等电点的一般原理和操作方法。二、实验原理三、试剂与仪器、耗材1试剂2仪器耗材四、实验方法取 4 支同样规格的试管，按下表顺序分别精确地加入各试剂，加入后立即混匀，加一管，摇匀一管。静置，观察各管在不同时间的混浊度。观察时可用+，+，+，表示浑浊度。表 1观察现象试剂管号H2O/mL0.01 mol/L HAC/mL0.10 mol/L HAC/mL1.00 mol/L HAC/
2、mLpH蛋白质溶液 /mL 0 min 10 min 20 min1234五、实验结果、计算与分析1.观察各管中清澈度变化，记录结果并解释现象.2.确定酪蛋白的等电点。六、思考题蛋白质在等电点沉淀的原因是什么？影响该实验结果准确性的因素有哪些？2. 双缩脲法测定蛋白质含量一、实验目的1学习双缩脲法测定蛋白质浓度的基本原理。2学习和掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的实验操作方法。二、实验原理三、试剂与仪器、耗材1试剂2仪器耗材四、实验方法1.制标准曲线取试管 6 支，编号 0-5，按下表顺序加入各试剂。表 2试管试剂/mL0 1 2 3 4 5标准牛血清白蛋白 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6
3、2.0蒸馏水 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0.0双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0蛋白质含量 mg/mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0上述试剂加完后，充分混匀，室温放置 30 min。以 0 号管为对照管，于540 nm 处比色测定吸光值，记下各管吸光度，以每管蛋白质含量为横坐标，对应吸光度为纵坐标，作吸光度-蛋白质含量标准曲线。2样品测定五、实验结果、计算与分析1使用 Excel 程序绘制标准曲线，计算回归方程。2利用回归方程，取两组测定的平均值按下列公式计算蛋白质的含量：样品蛋白质含量（mg/100 mL）=YN100/V式中，Y 为标准曲线查得的蛋白质的量（mg），N 为稀释倍数，V 为样品所取的体积（mL）。六、思考题影响标准曲线准确性的因素有哪些？注意事项：1标准曲线选择不能只看 R2，还应该看曲线斜率和截距。R 2 大小与实验操作和仪器都有关系。 2显色时间过长，可能会出现雾状沉淀，影响比色。（解决方法：尽快比色）3脂肪性物质会影响反应。（可用乙醇或石油醚使溶液澄清后离心，取上澄清液再测）4测定样品管吸光度时，其吸光值应界于标准曲线范围内，如超出，应适当稀释样品后再测。
