实验室常用溶液的配制.doc

1、实验室常用溶液的配制1 30%丙烯酰胺溶液（100ml ）【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N,N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的蒸馏水中。加热至 37溶解之，补加水至终体积为 100ml。用 Nalgene 滤器（0.45m 孔径）过滤除菌，查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0，置棕色瓶中保存于 4温度。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约

2、0.2 体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于 1 年的溶液应该被丢弃。2 40%丙烯酰胺（用于 DNA 测序，1L ）【配制方法】把 380g 丙烯酰胺（ DNA 测序级）和 20g N,N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L。置棕色瓶中保存于室温。【注意】见上述配制 30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定。3 0.1mo

3、l/L 腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml）【配制方法】在 0.8ml 蒸馏水中溶解 60mg ATP，用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0，用蒸馏水稀释 1ml【注意】分装成小份保存于-704 10mol/L 乙酸铵溶液（ 1L）【配制方法】把 770g 乙酸铵溶解于 800ml 蒸馏水中，加水稀释至 1L 后过滤除菌。在 4C储存。【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。5 10%过硫酸铵溶液（10ml）【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶于 8ml 蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至 10ml。该溶液可在4 保存数周。6 1mol/L CaCl2 溶液（200ml）【配制方法】

4、称取 54g CaCl26H2O 并溶解在 170ml 蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至 200 ml。用 0.22m 滤器过滤除菌，分装成 10ml 小份贮存于-20。【用法】制备感受态细胞时，将等分试样解冻，用蒸馏水稀释至 100ml。通过 Nalgene 过滤器（0.45 微米）过滤除菌，并在使用前冷却至 0。7 2.5mol/L CaCl2 溶液（20ml）【配制方法】称取 13.5g CaCl26H2O 并溶于 15ml 蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至 20ml。用 0.22 m 滤器过滤除菌，分装成 1ml 小份贮存于-20 。8脱氧核苷三磷酸（dNTPs）溶液【配制方法】把每一种 dN

5、TP 溶解于水至浓度各为 100mmol/L 左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris 碱分别调节每一 dNTP 溶液的 pH 值 7.0（用 pH 试纸检测），把中和后的每种dNTP 溶液各取一份作适当稀释，在给出的波长下读取光密度计算出每种 dNTP 的实际浓度。碱基 波长 消光系数（）（M -1cm-1）A 259 1.54104G 253 1.37104C 271 9.10103T 260 7.40103计算每个 dNTP 的实际浓度。对于路径长度为 1cm 的比色皿，吸光度等于消光系数和摩尔浓度的乘积。然后用蒸馏水稀释成终浓度为 50mmol/L 的 dNTP，分别分装成小

6、份贮存于 -70。9 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT ）溶液（20ml）【配制方法】称取 3.09g DTT，溶于 15ml 蒸馏水中，用 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH5.2）补足体积至 20ml。通过 0.22 微米过滤器过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于-20。【注意】不要对 DTT 或含有 DTT 的溶液进行高压灭菌。10 0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液（1L ）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中加入 186.1gNa2EDTA2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0（约需 20g NaOH 颗粒），然后稀释至 1L，分装

7、后高压灭菌备用。在室温下保存。【注意】EDTA 二钠盐不溶于水，需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0，才能完全溶解。分配适当的等分试样并通过高压灭菌消毒。11溴化乙锭（10mg/ml 溶液）（100ml）【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于 4C。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。使用后，这些溶液应进行净化。有关如何执行此操作的详细信息，请参阅机构指南。12 2HEPES 缓冲盐溶液（100ml）【配制方法】用 90m

8、l 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g 葡萄糖和 1gHEPES，用 0.5mol/l NaOH 调节 pH 值至 7.05，再用蒸馏水稀释至 100ml。用0.22m 滤器过滤除菌，分装成 5ml 小份，贮存于-20。13 1mol/l 异丙硫基- -D-半乳糖苷 IPTG 溶液（10ml ）【配制方法】IPTG （分子量为 238.3），在 8ml 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏水稀释至10ml，用 0.22m 一次性滤器过滤除菌，分装成 1ml 小份贮存于-20。14 1mol/L 乙酸镁（ MgOAc）溶液（1

9、 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 214.46g 四水乙酸镁，稀释至 1L 过滤除菌。在室温下保存。15 1mol/L MgCl2 溶液（1 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 203.4g MgCl26H2O，用水稀释至 1L，分装成小份并高压灭菌备用。在室温下保存。【注意】MgCl2 极易潮解，应选购小瓶（如 100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。16酚 /氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L TrisHCl(pH7.6)萃取几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的 0.01mol/l TrisHCl(pH7.6)液层，保存于

10、 4。【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。17 10mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液（10ml）【配制方法】用 10ml 异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg，分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液（ 100mmol/L）。【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被 PMSF 污染的衣物应予丢弃。PMSF 的

11、水溶液在其已经变为碱性（pH 8.6）并在室温下储存几小时后可以安全地丢弃。（PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随 pH 值的升高而加快，且 25的失活速率高于 4。pH 值为 8.0 时，20 mmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为 35min。）18 1mol/L 乙酸钾（ pH7.5）溶液（100ml）【配制方法】将 9.82g 乙酸钾溶解于 90ml 蒸馏水中，用 2mol/L 乙酸调节 pH 值至 7.5 后稀释到 100ml，分装成小份后保存于-20。19 3mol/L 乙酸钠（ pH7.0）溶液（1 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 408.1g 三水乙酸钠，用

12、冰乙酸调节 pH 值至 5.2，稀释到 1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。20 3mol/L 乙酸钠（ pH5.2）溶液（1 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH 值至 7.0，稀释到 1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。21 5mol/L NaCl 溶液（1 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 292.2g NaCl 加水稀释至 1L，分装后高压灭菌。在室温下保存22 10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液（1 升）【配制方法】在 900ml 蒸馏水中溶解 100g 电泳级 SDS，加热至 68溶溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的 pH

13、 值至 7.2，加水稀释至 1L，分装备用。在室温下保存。【注意】SDS 的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的 SDS。10%SDS 溶液无须灭菌。23 20SSC（ NaCl 和柠檬酸钠）溶液（ 1 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠，加入数滴 10mol/l NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0，加水稀释至 1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。24 20SSPE 溶液（盐，磷酸钠，EDTA）（1 升）【配制方法】在 800ml 毫升水中溶解 175.3g NaCl，31.2g NaH2

14、PO42H2O 和 7.4g EDTA，用NaOH 溶液调节 pH 值至 7.4（约需 6.5ml 10ml/L NaOH），加水稀释至 1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。25 100%三氯乙酸（ TCA）溶液（500g TCA）【配制方法】在装有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 蒸馏水，形成的溶液含有 100%（M/V）TCA。在室温下保存。26 1mol/L Tris 溶液（1 升）【配制方法】在 800ml 蒸馏水中溶解 121.91g Tris 碱，加入浓 HCl 调节 pH 值至所需值。对于 pH 7.4，加入 70ml HCl; 对于 pH 为 7.6 加入 60ml

15、HCl; 对于 8.0 的 pH，加入 42ml HCl。加水稀释至 1L，分装后高压灭菌。在室温下保存。【注意】如 1mol/L 溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的 Tris。尽管多种类型的电极均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris 溶液的 pH 值因温度而异，温度每升高 1，pH 值大约降低 0.03 个单位，应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值。例如：0.05mol/L 的溶液在 5、25、和 37时的pH 值分别为 9.5、8.9 和 8.6。27 Tris 缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）（1 升）【配制方法】

16、在 800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 碱，加入 0.015g 酚并用HCl 调至 pH 值至 7.4，用蒸馏水稀释至 1L，分装后高压灭菌（15 lb in-2 液体循环中 20min），于室温保存。28电泳用 Tris-乙酸（TAE）（ 50X）（1 升）【配制方法】称重 242g Tris 碱,加入 800 毫升蒸馏水溶解。加入 57.1ml 冰醋酸和 100ml 0.5mol/l EDTA（pH8.0 ），用蒸馏水补足体积至 1 升。在室温下保存。【用法】用蒸馏水稀释 1:49。TAE 具有相当低的缓冲能力，并且在延伸电泳期间倾向于耗尽。因此，当在高电流下长时间进行电泳时，建议更换缓冲液或两个储存器之间的再循环。