1、碱性蛋白与酸性蛋白的显示,目的要求,1.学会制血涂片2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的原理及操作步骤3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布,实验原理,以酸性氨基酸成分为主的蛋白质为酸性蛋白;以碱性氨基酸成分为主的蛋白质为碱性蛋白。细胞核内有组蛋白（碱性蛋白）及少量酸性蛋白，细胞质中主要有酸性蛋白，标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同pH值的快绿染液分别染色，使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。,实验用品,1.器材：水浴锅，染色缸，载玻片，注射器等2.试剂：70乙醇溶液 5三氯醋酸溶液 0.2快绿 0.005Na2CO3溶液 1.75mol/L HCL:盐酸0.109ml（比重1.19）加蒸
2、馏水至100ml（若盐酸比重1.16则取0.13ml） 酸性蛋白染色液（pH2.2）：0.2快绿和等量1.75mol/L HCL溶液混合而成 碱性蛋白染色液（pH8.0）：0.2快绿和等量0.005Na2CO3溶液混合而成。3.材料：蟾蜍血涂片。,蟾蜍取血,常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约l2mm，随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为
3、止。 以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡盘中，剪开胸腔，打开心包。小心将心脏剪一小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。,1取一滴血滴于玻片的一端2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片，中间不要停顿，不可反复涂片，动作要快以防止血液凝固。3自然干燥后固定。,方法与步骤,1.新鲜血涂片自然干燥10min，入70%乙醇溶液中固定10min。2.取出晾干入70905三氯醋酸溶液1520min。3.在冷5三氯醋酸溶液漂洗后，蒸馏水洗3次（每次5min）。4.分别插入染色液中染色（酸性蛋白染色液染色15min，碱性蛋白染色液染色45min）5.取出，蒸馏水洗。6.风干，二甲苯透明2min，树胶封片。,观察结果,酸性蛋白染色时，蟾蜍红细胞质内遍布绿色，细胞核内绿色稀少。碱性蛋白染色时，蟾蜍红细胞核为绿色。,酸性蛋白与碱性蛋白的分布有何区别？,显示细胞内酸性蛋白,显示细胞核内碱性蛋白,
