水稻根系活力测定.doc

1、一、水稻根系活力测定 1. 水稻根系流液的测定（1） 测定意义 水稻根伤流液的多少与根系活力有密切的关系，在一定时间内测定伤流液的重量，是衡量根系活力的一个较为简便的方法。（2） 测定方法 选用一端封闭，一端开口的很薄的塑料套管，管内放进少时脱脂棉（在天平上称得重 W2），两次重的差数，代表一定时间内（t）的伤流量，并按下式计算：伤流量（g/小时）=（W 1-W2）/t（3） 注意事项 如果没有合适的塑料套管，可以自己制作，直径大小出切口直径稍大一点，使能自由套昆为度。水稻伤流量较少，套管的长度一般 2-3cm 即可。用塑料薄膜根据所需大小栽成小片，在需要合缝的地方折迭起来上面紧贴上玻璃纸，而

2、后将烧燃的烙铁在纸上前后左右移动，检查套管不漏气即可使用。 收集伤流液在一天当中的最适时间随植物种类和环境条件而异，一般最好在上午进行。 套管理与地上部切口套管理接之处，一般不须密封。一则可省去手续上的麻烦，二是水分从套接的地方蒸发的机会微不足道，不影响测定结果。2. 水稻根系氧化的测定（a-萘胺法）（1） 测定意义：水稻根系的氧化力除了叶部吸收的氧转入根部外，根部还有一条乙醇酸氧化途径，这条途径可产生过氧化验氢，以后在过氧化酶的作用下产生氧，是水稻根产生氧化力的一条特殊代谢途径，由于水稻根有氧化力，可氧化土壤中有害的还原物质，从而保证了根的正常代谢。据试验报道，当根氧化力增大时，根的有氧呼吸

3、较旺盛，吸收养料也较多。根的 a 蔡胺氧化力可作为水稻根系活力的一个重要指标。（2） 原理与方法 a-蔡胺吸附在水稻根表面时，能被根系氧化，生成红色羟基蔡胺，故可从根表面染争的深浅，粗略地估计根的氧化力。定时测定则是对 a-蔡胺氧化前后浓度的变化进行测量。一般用对氨基苯磺酸和硝酸作显色剂，使与 a-蔡胺起显争反应，生成对一碘酸-a 蔡胺偶氮苯。其化学肥应如下：（3） 试剂配制 100g/ml a 蔡胺标准浓液。精确称了取分析纯 a-蔡胺 1. 0000g，溶于 1000ml 蒸馏水中。充分溶解后从中吸取 100ml 稀释至 1000ml 即成 100g/ml a-蔡胺溶液，保存在棕我瓶中，置于

4、低温黑暗处。使用前稀释至 40g/ml。 1%对氨基苯硫酸溶液。称 1g 对氨基苯磺酸，深于 100ml30%的乙醇溶液中。 100ppm 亚硝酸钠溶液。称 0.1g 亚硝酸钠于 1L 蒸馏水中。 0.1M 磷酸盐缓冲液。同 0.1M 磷酸二氢 钾、0.1M 氢氧化钠溶液按 6. 32:3. 77 的窖混合而成。此缓冲液的 ph 应为 7. 0。 标准曲线的绘制：用吸管分别注入 40g/ml a-蔡溶液于 6 只 25ml 的容量瓶中，使含量分别为 0（空白）、12. 20、30、40、50、60g。加入等量的磷酸缓冲液，显色。并分别测定各溶液的光密度，绘制曲线。（4）测定方法 取具有代表性水

5、稻植株若干，尽量避免伤根，洗去根部泥土后，再用蒸馏水淋洗，最后用吸水纸将根部水分吸干。将距根尖 2cm 长的一段取下，混合均交，称 1g 重（或沿根的基部将根部切下取混合根 1g），置于 100ml 三角瓶中，加 40g/ml a-蔡胺所引起的。把此时作为零值。为了测定这一浓度值，在根系浸入 a-蔡 10 分钟后，立即从此平衡液中准确地吸取 2ml入入 25ml 容量瓶中，这是第一次取样。紧接着塞好瓶塞，置于振荡器上，于 25振荡 3-6 小时。再次从平衡液中准确地吸取 2ml，放入另一 25ml 容量瓶中，这为第二次取样。无论哪一次取样；如溶液混浊，均须过滤。由于 a-蔡胺在空气中振荡时会自

6、动氧化，故须作空白试验。在两次取样的容量瓶中，各加入蒸馏 10ml，1%对氨 基苯磺溶液和 100g/ml 亚硝酸钠溶液各 1ml。充分摇动 5 分钟，使之显色，然后加蒸馏水定容，摇匀。在 20-60 分钟内用 1cm 比色杯于 510nm 波长或 50 号滤光片分别测定前后两次样品中 a-蔡含量。并求得根的净 a-蔡胺氧化值。一般用鲜根 1g，振荡 3 小时，二室温下进行，但须注明温度，以便比较。（5） 结果计算 以 1g 鲜根，振荡 3 小时为例，第一次取样是根上吸附的氧化铁氧化 a-萘受浓度（A）。它是酶促反应前 a-萘胺的起始浓度。第二次取样是在根的酶促反应 3 小时后剩余的 a-萘胺

7、浓度（B）。所以（A-B）则是根的氧化量和自动氧化量之和。空白试验是 a-萘胺在振荡 3 小时的自身氧化量（C）。溶液是等体积的 40g/mla-萘胺溶液和磷酸缓冲共 50ml，所以每毫升 a-萘胺含量为20g/ml。X 为稀释倍数。因为取样为 2ml，酶促反应是在 48ml 的 a-萘胺溶液中进行的，所以 X为 24。Y=a-萘胺氧化量（微克/克鲜根/小时）3. 用根系总吸收面积和活踽吸收面积来测定根系活力（1） 原理沙比宁理论，认为植物对溶质的最初吸收具 只附的特性，并假定这时要根系表面均匀的覆盖了一层吸附物质的单分子层。因些能根据根生活费对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲稀兰作

8、为被吸附物质，它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确的测出。已知 1mg 甲烯兰单分子层占用 1. 1M2的面积，据此即可求出根系的总吸收面积。当根系在甲烯兰在甲烯兰溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时，根系的活踽部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去，因而继续吸附甲烯兰。从后一吸附时法语出活踽吸收面积，可作为根系活力的指标。（2）材料与设备1. 250 毫升量杯或量筒 2. 小瓷杯或烧杯 3. 吸水纸 4. 甲烯兰 5. 移液管（2 毫升） 6. 小试管（3）实验步骤 取待测植物根系用排水法在量杯或量筒中测定根系体积 把 0.0002N 甲烯兰溶液（每毫升溶液中含有 0.064mg

9、甲烯兰）分别在三个编号的小瓷杯里，每杯中溶液量约 10 倍于根的体积。准确记下每杯的溶液用量。 取出根系，吸水纸小心吸干根上的水分（切勿伤根），然后依次浸入盛有甲烯兰溶液的瓷杯里，在每杯中浸 1 分钟，迅整取出。注意每次了出根系时务必要杯沿停一下，使甲烯兰溶液从根上流回到原瓷杯中。 从三个瓷杯中名取 1 毫升溶液加入试管，分别稀释至 10 倍，再与每毫升含甲烯兰0.01,0.02,0.03,0.004,0.005,0.006mg 的标准比色管进行比色，记录比色所得浓度。或在分光光度计下 650nm 处比色，读出光密度。然后在标准曲线上查得第毫升溶液中甲烯兰的毫克数。据些求得每杯浸入根系后溶液中剩下的甲烯兰 mg 数。 把结果记入下表，并依下式求出根的吸收面积：总吸收面积（M 2）=（C 1C1）V 1+(Ca-Ca)Va1. 1活踽吸收面积（M 2）=（C a-Ca）V a1. 1C=溶液原来浓度 C=浸根后的浓度（mg/ml）V=溶液量（ml） 1，2，3-瓷杯编号（蔡明历编写）