口蹄疫专项培训口蹄疫病毒诊断及防控相关知识.ppt

1、口蹄疫病毒流行与诊断,一、口蹄疫的基本情况,（一）口蹄疫病毒1.口蹄疫病毒的基本情况口蹄疫病毒属于微RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员。口蹄疫病毒粒子直径为2325nm，无囊膜。电镜观察口蹄疫病毒的细胞培养液，有4种粒子：（1）完整病毒，直径为232nm，沉降系数为146S。（2）不含RNA的空衣壳，直径为21nm，沉降系数为75S。（3）衣壳蛋白亚单位，其直径为7nm，沉降系数为12S14S。（4）病毒感染相关抗原(VIA抗原)，沉降系数为4.5S。,口蹄疫病毒形态：无囊膜，正六边形粒子,现已知有7个血清型，即O、A、C、SAT、SAT、SAT 及Asia。每一型内有亚型，亚型内又有众多抗原差异

2、显著的毒株。根据7个血清型的同源性将其分为两群，即O、A、C和Asia型为一群，SATl 、SAT2、SAT3为一群，两群之间的血清型同源性仅为25%40%，群内同源性可达60%70 %。各血清型之间没有交叉免疫力。同一型病毒株之间，抗原性上也有不同程度的差异。在中国范围内以O、A、和Asia1型的流行为主。,2.口蹄疫病毒的型,应用血清学方法先后鉴定出许多亚型，1977年世界口蹄疫参考实验室公布的亚型共有65个(编号)，实际只鉴定出62个亚型，其中A型有32个亚型(缺A6，A9)；O型有11个亚型(缺O4)；C型有5个亚型；Asia1型有3个亚型；SAT1型有7个亚型(缺SAT1-1)；SA

3、T2型有3个亚型；SAT3型有4个亚型。但随着口蹄疫病毒血清亚型的增多，20世纪80年代后期已不再确定口蹄疫新分离病毒株的亚型归属。,3.口蹄疫病毒的基因型20世纪90年代以来，用PCR技术结合核酸序列测定技术鉴定口蹄疫病毒分离株之间的亲缘关系。Knowles和Samuel(1995)认为口蹄疫病毒核苷酸序列的测定和系统发育分析是更准确、也是更适用的研究不同口蹄疫病毒分离株特性的方法。世界口蹄疫参考实验室收集整理世界各地测定的口蹄疫病毒7个血清型的近1500个病毒株的VP1基因序列，完成了系统发育分析，绘制了系统发育树。图为口蹄疫病毒7个血清型代表病毒株的系统发育树。,目前，划分同一血清型的口

4、蹄疫病毒株普遍采用基因型，将同源性大于85的病毒株划分为同一基因型，大于90的病毒株划分为同一基因亚型，大于95的病毒株划为遗传关系高度密切的同一基因亚型。对于新出现的口蹄疫病毒株，通过VP1基因系统进化比较分析，可以快速确定其所处地位，选择与之亲缘关系密切的疫苗株，生产疫苗，进行免疫预防。应用部分或完整VP1基因核苷酸序列数据进行系统发育树分析来研究口蹄疫的分子流行病学，这种方法已被OIE列为标准诊断方法。,Samuel和Knowles(2001)对OIE/FAO口蹄疫参考实验室的105个O型口蹄疫病毒进行VP1基因系统发育树分析，根据核苷酸差异大于85%分为不同基因型的标准，将试验的105

5、个O型口蹄疫病毒株分为8个基因型，以拓扑型 (Topotype)命名。,4.病毒变异口蹄疫病毒非常容易发生变异。口蹄疫病毒的毒力、抗原性均易封锁变异。不断出现新的抗原性变异的毒株，使已有疫苗的免疫效果不好，而导致口蹄疫出现新的流行。,5.口蹄疫病毒的抵抗力FMDV对外界环境的抵抗力较强，耐干燥。含毒组织和污染的饲料、饲草、皮毛及土壤等可保持传染性达数周甚至数月之久。病毒对酸和碱十分敏感。病毒对热敏感，水疱液中的病毒在60经515分钟可灭活，80100很快死亡。鲜奶中的病毒在37生存12小时，18生存6天，酸奶中的病毒迅速死亡。,口蹄疫病毒在不同条件下的结构变化,A：完整的FMDV粒子B：FMD

6、V粒子结晶C：pH6,10min或温度高，不完全裂解的病毒粒子D：pH5,20min或温度高，时间长，完全裂解的病毒粒子成份; 衣壳裂解为12S。,（二）口蹄疫的流行特点1.易感动物 口蹄疫主要感染偶蹄兽。牛、羊、猪、驼、野生偶蹄兽。幼龄动物较成年动物易感性高。 2.传染源 病畜和带毒动物（包括潜伏期、恢复期和免疫带毒）。3.传播途径 通过消化道、呼吸道以及损伤与未损伤的皮肤传播。,4.口蹄疫的流行病学特征口蹄疫可感染多种动物（牛、羊、猪、驼、鹿等），呈现多种动物相互传染，共同发生。口蹄疫的传染性极强，流行迅速。口蹄疫多呈现大流行的方式。口蹄疫的传播方式有扩散式和跳跃式。本病的发生没有严格的季

7、节性，但其流行却有明显的季节规律。一般冬、春季较易发生大流行，夏季减缓或平息。口蹄疫的流行具有周期性，35年流行一次。,临床症状,潜伏期：接触病原后最短6小时可在上皮组织中找到病毒 。24小时可出现鼻吻部病变。48小时内可出现蹄部病变 。1-3天内病猪体温可能会超过41，造成母猪流产。口蹄疫的潜伏期为114d,平均26d,可变性较大,其长短取决于病毒毒株、感染剂量、传播途径、动物的种类和饲养条件等。当口蹄疫在畜群内传播时,动物相互间接触的频率和强度,即与病畜的接触强度越高,潜伏期越短。动物的咽部通常是感染起始部位,病毒也可以通过损伤的皮肤感染易感动物。病猪蹄部病变主要发生在蹄叉、蹄冠及蹄踵和趾

8、间隙,初期呈现潮红、发热、肿胀、敏感等症状,之后蹄冠部皮肤发白,出现水疱。,1.猪感染口蹄疫病毒的临床表现较为严重,以蹄部水疱为主要特征。猪群一旦感染口蹄疫病毒,出现相同症状的猪将急剧增加。2.猪口蹄疫潜伏期一般为214d,但是,随着环境的变化,潜伏期可缩短或延长。对猪进行蹄部上皮人工感染,24h后即可在接种部位出现初期病变,24d后发展为全身性感染。3.猪感染口蹄疫后,首先出现急性发热,体温可以升高至4041,伴随食欲不振、精神沉郁等症状。4.对病死仔猪解剖检查,会发现心脏肌肉,尤其心室肌肉出现坏死,并呈现灰色或黄色斑纹,形似虎皮,称为“虎斑心”。5.口蹄疫病毒通过局部淋巴结进入循环系统,在

9、皮肤、舌和口腔表皮的上皮细胞中,病毒进行第二阶段的复制和感染,导致病畜出现病毒血症，通常病毒血症会持续45d。,1.口蹄疫传染性强,发病率高。成年发病动物的死亡率通常比较低,而发病幼畜,尤其是羊和猪幼崽,因发生心肌炎而死亡率很高；2.口蹄疫宏观病变的特征是：口腔、鼻镜、蹄冠和蹄叉部上皮出现水疱；3.口蹄疫会导致母猪流产,患病母猪乳房皮肤有明显水疱性病损。4.病牛在蹄部发生水疱的稍前或同时,出现口腔病变,一般是在舌背面出现环形、粗糙的白色隆起,随着液体的积聚,隆起增大,有时多个水疱相互融合,凸现于正常的舌面组织,使舌面凹凸不平。,蹄部病变（仔猪）,病猪蹄甲与皮肤接触处发白，起水泡。,病猪蹄部溃烂

10、，感染，不愿站立。,后期病猪蹄甲脱落，站立不起。,肢体水疱破溃,蹄部病变（母猪）,蹄甲脱落与出血,病猪倒地不起、食欲降低或废绝，造成断奶母猪发情率极低，给猪场的生产流程带来极大的困难；怀孕母猪,怀孕母猪食欲降低或废绝，造成死胎、弱仔相对增多。,鼻镜病变,乳房病变,母猪奶头起泡，仔猪吃有水泡奶头，造成接触性传播。,乳头水泡,乳房水泡,舌头水泡,口蹄疫：病牛唾液分泌增加，流涎,犊牛感染口蹄疫死亡（心肌炎）,口蹄疫：病牛口腔、舌粘膜出现糜烂溃疡,口蹄疫：病牛舌上水疱破溃，形成烂斑,口蹄疫：病牛蹄踵的水疱破溃，形成糜烂,口蹄疫病牛乳头病变,口蹄疫：病牛乳头水疱破裂后，形成溃疡,（四）口蹄疫的诊断临诊诊

11、断根据病的急性经过，流行性发生，主要侵害偶蹄兽，一般为良性转归以及特征性的临诊症状可作出初步诊断。确诊须进行实验室检查。实验室诊断病毒分离鉴定 取病畜水疱皮或水疱液接种乳鼠、BHK-21等细胞进行病毒分离鉴定。做补体结合试验、反向间接血凝试验或酶联免疫吸附试验(ELISA)进行病毒鉴定。,病毒抗原检测中和试验 可用于型和亚型鉴定。补体结合试验 可进行定型鉴定。反向间接血凝试验 可鉴定病毒主型。间接夹心酶联免疫吸附试验RT-PCR 扩增口蹄疫病毒特异性核酸序列。具有快速、灵敏、特异性强的特点。 PCR方法结合VP1基因序列测定可进行流行毒株的基因亚型测定,血清学试验间接血凝试验 采取患病动物或康复动物血清，应用间接血凝试验检测口蹄疫病毒的特异性抗体进行诊断。免疫琼脂扩散试验 采取患病动物或康复动物血清，应用VIA抗原作琼脂免疫扩散试验进行诊断。中和试验酶联免疫吸附试验(ELISA) 液相阻断ELISA(LAB- ELISA)试验非结构蛋白ELISA(3ABC-ELISA) 试验 能够鉴别免疫动物和自然感染动物。,