1、遗传修饰动物模型在药物安全性评价中的应用转基因动物 的定义 相对于野生型动物而言，其基因组被遗传修饰的动物 有用遗传修饰动物 (Genetic altered animal)一词转基因动物分类 用于基础生物学研究- 基因的结构和功能的关系- 细胞核与细胞质的相互作用- 胚胎发育和调控等生命科学中的基本问题 用于育种改良-提高动物的生长速度-改善肉质营养-增强抵抗疾病的能力 用于生产 目的蛋白、 生物反应器- tPA，凝血因子 用于 各种疾病动物模型-癌症转基因动物模型-免疫缺陷动物模型等转基因动物模型安全 性 评价优势 对受试物的敏感性增加。-如带有激活 Pim-l肿瘤基因的转基因动物，对乙基
2、硝基脲的致癌作用，较相应的非转基因动物，其敏感性提高了 25倍。 转基因动物模型用于安全评价，节省时间，缩短实验进程，减少动物的用量，符合 3R原则-传统的致癌性实验采用普通大小鼠，实验长达2年，时间长，需要的动物数量大 ， 采用转基因动物模型，可以在 6个月内得知结果，显著节省时间-采用 TgPVR21转基因小鼠替代猴进行神经毒性测试，测试效果与猴一致国际获得广泛认可的癌症动物模型 TG:AC rasH2 p53+/- XPA-/- TG:AC， p53+/-和 rasH2模型在美国或日本已实现商品化，并获得 ICH等国际机构的认可TG:AC小鼠模型的建立和生物学特性 人类正常的 ras基因
3、家族包括 c-Ha-ras， c-Ki-ras和 c-N-ras三个成员，其中 c-Ha-ras位于 11号染色体上 ras基因编码细胞增殖信号传导途径中的一个189个氨基酸的关键蛋白分子 P21蛋白 ， 是生长因子受体与下游分子联系的必经之路，其活性可以通过与 GTP GDP的交换来调节 P21蛋白在细胞分化和抑制细胞凋亡中扮演很重要的作用 ras基因在第 12、 13、 59、 61位氨基酸发生突变时，其编码的蛋白活性增高，易诱导癌变TG:AC小鼠模型的建立和生物学特性 该模型是通过显微注射的方法获得的 受精卵来自近交系 FVB小鼠 转基因表达的部位包括胚胎期的血液、肝和胎盘。此外在成年小
4、鼠的骨髓中也有低水平的表达 用佛波酯 (Phorbol ester)处理转基因鼠， 6个星期内能诱导产生多种乳头瘤，部分小鼠发生鳞状细胞瘤，多数情况下产生恶性肉瘤RasH2转基因鼠模型的建立及生物学特性 （一） 转入该模型的 DNA为人的正常 ras基因 (c-Ha-ras)，全长大小为 6.8 Kb 转化型 ras基因最初是从日本病人恶性黑色素瘤组织中获得的，被保留在裸鼠 NIH 3T3成纤维细胞中扩增RasH2转基因鼠模型的建立及生物学特性 （二） 该模型十分稳定，从未出现过应答消失 特别 适合 对食道癌研究 rasH2转基因模型诱发肿瘤的器官主要限于肺、皮肤和前胃 2000年又建立了 c-Ha-ras转基因大鼠模型，命名为 Hras128。该大鼠转基因模型不仅可用于筛选致癌物和癌症诱导因子，还可用于筛选抑制癌症的药物c-Ha-ras转基因小鼠的检测 标记基因 斑点杂交和 PCR扩增 Southern杂交 Northern杂交 表达产物检测
