1、大连理工大学 环境与生命学院实验十三实验十三 流式细胞技术检测肿瘤治疗流式细胞技术检测肿瘤治疗药物诱导的细胞凋亡药物诱导的细胞凋亡指导教师：唐颖大连理工大学 环境与生命学院1. 实验目的实验目的 了解细胞凋亡、及流式细胞技术原理等基了解细胞凋亡、及流式细胞技术原理等基本知识。本知识。 学习细胞凋亡的形态学观察和流式细胞术学习细胞凋亡的形态学观察和流式细胞术检测的方法。检测的方法。 学习流式细胞技术标本的制作方法，了解学习流式细胞技术标本的制作方法，了解流式细胞仪的使用。流式细胞仪的使用。大连理工大学 环境与生命学院2.实验原理实验原理 2.1 细胞凋亡的基础知识细胞凋亡的基础知识 2.2 流式
2、细胞技术的一般原理及应用流式细胞技术的一般原理及应用 2.3 用流式细胞术检测细胞凋亡的原理用流式细胞术检测细胞凋亡的原理 大连理工大学 环境与生命学院2.1 细胞凋亡的基本知识：细胞凋亡的基本知识： 定义：细胞凋亡是细胞在一定程序控制下的自主死亡定义：细胞凋亡是细胞在一定程序控制下的自主死亡过程。细胞凋亡同细胞分裂、细胞分化一样是机体生过程。细胞凋亡同细胞分裂、细胞分化一样是机体生存和发育离不开的最基本的生物现象，通过凋亡可以存和发育离不开的最基本的生物现象，通过凋亡可以平衡机体内细胞的数目，清除衰老、过剩、有害的细平衡机体内细胞的数目，清除衰老、过剩、有害的细胞。细胞凋亡异常会引起免疫性疾
3、病或肿瘤等。胞。细胞凋亡异常会引起免疫性疾病或肿瘤等。大连理工大学 环境与生命学院（一）、细胞坏死（一）、细胞坏死 是细胞受到急性强力伤害时立即出现的反应。是细胞受到急性强力伤害时立即出现的反应。 早期表现为细胞膜破坏，线粒体肿胀。早期表现为细胞膜破坏，线粒体肿胀。 继而溶酶体破裂继而溶酶体破裂 ,细胞内容物流出细胞内容物流出 , 引起炎症。引起炎症。细胞凋亡与坏死的区别细胞凋亡与坏死的区别大连理工大学 环境与生命学院细胞凋亡与坏死的区别细胞凋亡与坏死的区别（二）细胞凋亡（二）细胞凋亡 cell apoptosis Kerr（ 1972）最先提出，与细胞坏死的区别是：）最先提出，与细胞坏死的区
4、别是： 细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体；细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体； 凋亡小体内有结构完整的细胞器；凋亡小体内有结构完整的细胞器； 不引起炎症；不引起炎症； 线粒体无变化，溶酶体活性不增加；线粒体无变化，溶酶体活性不增加； 内切酶活化，内切酶活化， DNA有控降解，凝胶电泳图谱呈梯状；有控降解，凝胶电泳图谱呈梯状； 凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。 大连理工大学 环境与生命学院细胞凋亡与坏死的区别细胞凋亡与坏死的区别大连理工大学 环境与生命学院胸腺细胞胸腺细胞正常正常 凋亡凋亡大连理工大学 环境与生命学院形态学检测 流式细
5、胞法检测DNA Ladder 检测 荧光法检测荧光法检测凋凋亡亡鉴鉴定定方方法法大连理工大学 环境与生命学院2.2 流式细胞技术的一般原理及应用流式细胞技术的一般原理及应用 流式细胞术流式细胞术 (flow cytometry)是以流式细胞仪是以流式细胞仪 (flow cytometer，FCM)为工具，在液流系统中对悬液中的单个细胞、细胞器或生物为工具，在液流系统中对悬液中的单个细胞、细胞器或生物粒子的生物、物理和化学特性进行快速测量并自动分析，并根据粒子的生物、物理和化学特性进行快速测量并自动分析，并根据这些特性将所需要的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的高技这些特性将所需要的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的高技术。术。 它的主要特点是，可以在单细胞水平上对大量细胞进行快速、准它的主要特点是，可以在单细胞水平上对大量细胞进行快速、准确、多参数的定量分析及分选，借此判断细胞的体积、确、多参数的定量分析及分选，借此判断细胞的体积、 DNA含量、含量、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数，蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数，并可在无菌状态下，对活细胞进行分类收集，收集的纯度可达并可在无菌状态下，对活细胞进行分类收集，收集的纯度可达 99。
