1、重组 DNA药物Recombinant DNA Drugs三峡大学医学院盛 德 乔QQ:834309103n 重组 DNA药物： 应用重组 DNA技术（包括基因工程技术和蛋白质工程技术）制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。n 重组基因的表达？克隆基因的表达n 表达载体的构建n 受体细胞的建立n 表达产物的分离纯化n 表达体系包括：表达载体 原核表达载体 真核表达载体宿主细胞 大肠杆菌、芽孢杆菌、链霉菌（原核） 酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞（真核）1. 原核表达体系 (E.coli 表达体系 )n 标准： 选择标志 多接头克隆位点 强启动子 翻译调控序列 n E.coli表达体系的不足： 不宜表
2、达真核基因组 DNA； 不能加工表达的真核蛋白质； 表达的蛋白质常形成不溶性包涵体 (inclusion body) ； 很难表达大量可溶性蛋白。大肠杆菌表达载体的结构除了含有与克隆载体相同的元件之外，还必须含有表达载体所需要的其它元件 : 启动子是 DNA链上能与 RNA聚合酶结合并起始mRNA合成的序列大肠杆菌表达系统常用的启动子有： lacZ启动子 强启动子n 核糖体结合位点 SD序列 （ Shine-Dalgarno sequence） -mRNA中用于结合原核生物 核糖体 的序列。 SD序列与 AUG之间的距离也会影响翻译效率，一般以 5 13个碱基为宜 表达载体都含有相应的 SD序列及适当长度的 SD-ATG间隔距离n 终止子基因或操纵子 3的一段核苷酸序列在表达载体中多放在多克隆位点的下游表达载体常用的大肠杆菌表达载体l 非 融合蛋白表达载体表达的蛋白与天然状态下存在的蛋白在结构、功能、免疫原性方面基本一致。l 融合蛋白表达载体融合蛋白（ fusion protein） 表达的蛋白质或多肽的 N末端由原核 DNA编码， C末端由克隆的真核DNA编码。
