1、基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学第四节 基因定点诱变2.4.1 盒式诱变利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段取代野生型基因中的相应序列 .返回目录 返回第二章基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学2.4.2 寡核苷酸引物诱变使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物 ,启动单链 DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成为了新合成 DNA子链的一个组成部分。基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学寡核苷酸引物诱变过程p正链 DNA合成p突变引物合成p异源双链 DNA分子制备p闭环异源双链 DNA分子富集p转化p突变体筛选寡
2、核苷酸引物诱变法的局限性n异源双链 DNA分子并非真正异源n突变体子代中突变碱基被错配修复体系修复基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学提高寡核苷酸引物诱变突变效率的方法(1) Kunkel 定点诱变法 : 1985年由T.A.Kunkel发明(2) ung:尿嘧啶脱糖苷酶基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学(2) 硫代磷酸诱变法 : 已知有些限制酶不能切割硫代磷酸 DNA分子在异源双链 DNA分子制备时，加入硫代核苷酸，使之掺入突变链中然后用前述酶切割，并用外切酶局部消化后，进行聚合反应，从而产生具有定点突变的异源双链 DNA基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学2.4. 诱变(1) 重组 PCR定点诱变 :克服 寡核苷酸引物诱变能力仅限于 5端 .特点 :经 3轮 PCR反应 ,一对互补的带有突变碱基的内侧引物和 2个外侧引物基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学(2) 大引物诱变 :核心是第一轮 PCR产物为第二轮 PCR引物基因工程第二章 基因工程技术原理西北师范大学西北师范大学返回目录 返回第二章
