1、Gene Gene expression systemGene delivery systemGene vector system病毒载体概述（ 1）要求： 1、携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒 2、介导外源基因转移和表达3、对机体不致病容量： 自身基因组大小的 105%110% 类型： 1、重组型病毒载体2、无病毒基因的病毒载体 复制缺陷型可复制型 复制缺陷型组成： 1、病毒复制和包装元件2、病毒基因3、插入的外源基因或元件4、病毒外壳 /外膜 用途：基因转移和表达1、基因治疗2、疫苗3、器官移植 4、组织工程5、转基因动物6、基因功能研究 病毒载体概述（ 2）优点： 1、利用病毒天然的
2、感染性进入细胞，转导效率高；2、复杂的装配过程由细胞完成；3、不同的病毒载体具有不同的表达特点 。存在的问题： 1、安全性2、靶向性3、有效性细胞毒性染色体毒性免疫毒性转导靶向性转录靶向性转导效率靶向性基因表达水平和持续时间表达的可调控性常用的病毒载体的特点：病毒载体研究方向1、病毒包装系统 2、无病毒基因的病毒载体6、自我扩增型病毒载体7、条件增殖型病毒载体5、嵌合型病毒载体3、靶向性病毒载体4、可调控表达的病毒载体8、新病毒载体病毒载体包装系统组成： 1、宿主细胞2、辅助元件（辅助质粒、辅助病毒）3、被包装的 DNA/RNA 包含顺式作用元件 单因素生产系统（ one-component
3、system)双因素生产系统 (two-component system) gag pol envLTR LTR图 1 反转录病毒包装系统示意图图 2 腺病毒包装系统示意图293 cellE1a,bJM17Ad Shuttle293 cellE1a,b多因素生产系统 (multi-component system)多因素系统 双因素系统图 3 腺病毒伴随病毒包装系统示意图host cellHelper virusHelper plasmidrep cap Vector plasmidHost cell +vector DNAHelper virus +helper plasmid图 4 双因素
4、系统生产重组 AAV病毒示意图proviral cellRecombinant helper virus(rHSV-repcap)rep cap 无病毒基因的病毒载体被包装的 DNA/RNA中不含任何病毒编码基因，只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病毒的外壳 /外膜和感染性，但不表达病毒蛋白。腺伴随病毒载体：反转录病毒载体：腺病毒载体：单纯疱疹病毒载体：LTR LTR genegeneITR ITRpAgeneITR ITRpAgenepac ori genegenegene gene无辅助病毒包装系统图 5 重组 AAV无辅毒包装系统adenovirusgeneITR ITRaav vector plasmidE2a E4orf6 VA Helper plasmid:293细胞E1a,bcre293-cregeneITR ITRAdenovirus with packagingsignal flanked by loxP 图 6 mini-adnovirus无辅毒包装系统靶向性病毒载体转导靶向性转录靶向性（特异性）改造病毒外壳 /外膜 连接靶向性结合分子Modified adenoviruscell组织特异性启动子 肿瘤选择性启动子 细胞周期调控启动子 肿瘤血管内皮导向启动子 双特异性启动子 病毒增殖的特异性转录调控
