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微生物感染的快速诊断.ppt

1、微生物感染的快速诊断指标经典的微生物检测方法n 涂片结核菌涂片一般菌涂片真菌涂片n 培养细菌培养真菌培养结核菌培养新的快速诊断指标l 降钙素原 (PCT)l 内毒素l -D(1,3)葡聚糖l 肽聚糖l 结核的快速诊断噬菌体法PCR方法l 实时荧光定量 PCR(UU、 CT、 NG、 HBV、 HCV、其它病毒)降钙素原全身炎症性疾病的经典快速诊断指标 :体温改变白细胞增多心动过速血沉( ESR)加快C-反应蛋白( CRP)升高缺点 :不能区分感染性因子(细菌、病毒)和非感染因子(创伤、红斑狼疮等)引起的炎症 降钙素原n 鉴别细菌感染和其他原因引起的炎症反应,n 可以早期诊断降钙素原n 是 降钙

2、素( Calcitonin, CT)的前肽物质 ,是一种含有116个氨基酸的蛋白质,分子量大约为 13KD,n 正常情况下, PCT主要存在于 甲状腺滤泡旁细胞,即 C细胞中,n 该细胞首先在内质网中翻译成含 141个氨基酸的前 PCT,分子量约为 16KD,包括 N端部分( 84个氨基酸,其中含25个氨基酸的信号肽),活性 CT( 32肽),下钙素(Katacalcin, 21肽)三部分组成,前两部分之间和后两部分之间分别以 2肽和 4肽来连接。前 PCT经糖基化和特异性酶切除 N端的信号肽,生成含 116个氨基酸残基的 PCT,以后再经过蛋白水解酶的水解,切除含 157氨基酸的 N端肽(

3、N-PCT),最后酶解生成 CT和下钙素。 CT是有激素活性的物质,由于代谢的刺激而释放入血。降钙素原n 由于甲状腺 C细胞中的 PCT绝大部分被水解成 CT,只有少数的 PCT分子释放入血,因此 健康人血中的 PCT浓度很低甚至检测不到(一般0.1ng/ml),n 在严重的全身感染时, PCT的水平显著升高(可 100 ng/ml)而 CT无明显变化。n Assicot等人 2观察到甲状腺全切除患者在严重感染时,血中仍有很高浓度的 PCT,因此认为此时的 PCT主要 来自于甲状腺外组织 。但迄今为止,仍不能确定 PCT产生的确切部位。降钙素原n 细菌内毒素是 PCT产生的主要刺激物 ,n 给

4、健康志愿者注射小剂量细菌内毒素( LPS),2h即可检测到 PCT, 68hPCT浓度快速上升,1248h达到峰值, 23天后恢复正常。n Brunkhorst 等人在给一位老年患者误输入污染有细菌(鲍曼不动杆菌)的小牛血透析液后,也发现了类似的 PCT变化。 PCT在活体内十分稳定,与 CT只有 1小时的半衰期不同,其半衰期长达2024小时。降钙素原n PCT在室温下也比较稳定,n 对冷、热和反复冻融均有较强的抵抗力这为其体外检测提供了方便。降钙素原检测方法放射免疫分析法:耗时 1922小时灵敏度为 4pg/ml,可测得正常机体或轻度炎症反应时血清 PCT浓度。该方法测量结果准确,灵敏度高,存在放射性污染,不宜在临床常规使用。该方法同时检测的是氨基降钙素原、完整的降钙素原及降钙素基因相关性多肽前体,因此特异性较差

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