RIGOL L-3530用户操作指南.docx

1、RIGOL L-3535 用户操作指南一、 原理简介：L-3535 蒸发光散射检测器用于检测高效液相色谱系统（HPLC）中的洗脱溶液组分。当洗脱溶液流速处于 100L/min 到 2.5mL/min 之间时，L-3535 蒸发光散射检测器均可进行检测。蒸发光散射检测器技术应用非常广泛，可以检测任何非挥发性分析物质。与其它类型的检测器（如 UV 检测器）不同，它不依赖于放射线的吸收，也并不受溶剂吸收特性影响。因此，可使用具有紫外放射线吸收的溶剂。由于溶剂会完全蒸发，可执行梯度操作以优化分离效果。检测器通过前面板上的键盘和数字显示器控制。此外，也可通过RS-232端口连接外部电脑控制检测器。输出结

2、果可发送至记录仪，积分仪或数据站。检测器包含雾化池，蒸发管和检测舱。运行过程中蒸发管会被加热，以实现溶剂的蒸发。 检测器操作包含三个独立步骤：洗脱溶液雾化，溶剂蒸发和组分检测（见下图）。 雾化指将洗脱溶液转化为细微的气溶胶。转化后的气溶胶进入蒸发器蒸发溶剂，蒸发形成的雾经光源照射，照射所产生的散射光由光电二极管进行测量，该过程与样品组分浓度相关。 检测蒸发雾化将流动相和样品雾化成气溶胶使流动相等可挥发物蒸发检测待测物：半挥发、不挥发二、 仪器操作：1、开机a) 按下后面板的开关按钮启动检测器。b) 打开气体分配阀并将压力设置为 3.5bar（51 Psi） 。压力将在 Status 界面显示。

3、c) 确保雾化室虹吸溢流管中有足够的液体。如果需要的话，可通过仪器抽取几毫升的溶剂填入虹吸管。d) 选择所需的温度。在 Status 界面下，按 上的向下方向键两次可打开Setup 界面。在 Setup 界面下即可设置温度。e) 使流动相流经仪器并运行整个系统至少 30 分钟以确保所有组件处于平衡状态且基线稳定。2、 参数设置1）通过外部按键设置（适用于非Ultrachrom工作站软件反控）：Status界面为初始界面：Status 界面下（未通过软件控制检测器） ，按 或 上的任一按键即可进入 Menu界面，如下图。Menu 界面下，若 10 秒无操作，则返回 Status 界面。Menu

4、界面下，按 键可立即返回Status 界面。Menu 界面下，按 上的向下方向键可打开 Setup 界面，如下图。当前可编辑功能位于括号内且位于屏幕中心。Setup 界面中的可设置项垂直循环，因此上的上下方向键均可用于选择所需的功能。使用左右方向键可以选择需要修改的字符，然后使用 ， 和 修改和确认参数值。a) Temperature（温度）：该功能用于设置蒸发温度值（20至 100） 。如果使用的是水性流动相，则初始温度应当设定在60，如果使用的是有机流动相(流速为lmLmin)，则初始温度应当设定为40。在方法优化过程中，这些设定值还需视情况变化进一步调整。b) Gain（增益）：该菜单用

5、于修改光电探测器的增益。可设置范围为 0 至 7。每增加 1，增益值增加 2 倍。建议增益值设置为 6 或 7 即可满足分析需求。选择“Dyn”时，SAGA功能被激活。增益值由检测器自动控制。激活SAGA功能时，需使用SAGA兼容的驱动器以使用色谱数据软件与检测器连接，从而使SAGA功能更具有优势。检测器的模拟输出不能运用SAGA功能的检测器的全部响应范围，将在1100mV处饱和。c) Offset（偏移值）：该功能设置基线的偏移量。用于仅具有正信号值采样能力的采样系统。此操作可通过数字按键或工作站来实现。d) Filter（噪声过滤值）：可设范围如下： NO（无需过滤），0.5s（每次过滤0

6、.5s），1s.10s(每次过滤1s到10s)。默认值为1s，一般即可满足分析需求。2）通过RIGOL工作站中（适用于使用Ultrachrom工作站反控的用户）方法设置采集进行参数设置(如下图所示)3、关闭检测器a) 关闭输液泵或断开与ELSD的连接管路。b) 将载气通入检测器（建议30分钟）从而排空蒸发管和检测舱中残留样品，否则会造成本底升高，噪音大，有鬼峰等现象； c) 切断检测器的电源（如果需要）。 注意事项：1、请使用惰性气体（例如：氮气）雾化流动相。 2、检测器的尾气应当排入通风橱或其他类似排气装置，保证尾气不会泄露到实验室中。3、载气压力不能超过4.5bar(67psi)，否则可能

7、损坏压力传感器。当流动相进入该系统后，应确保载气的稳定供应。如果载气的中断超出了一定时间范围，则有机溶剂可能会损坏压力传感器和或光电倍二极管。4、虹吸管中的液体量必须保持稳定且两边的液体量应相等。5、如果使用的流动相中含有盐，酸或碱，请在关机之前用水或甲醇冲洗该系统，防止盐在仪器中沉积； 必须使用可挥发性盐，否则会堵塞过滤孔且无法修复。6、如果L-3535作为备用设备且长时期内不会使用，建议断开检测器与色谱仪之间的流路，以防堵塞喷雾器或使物质沉积在检测器中。 输液泵运行期间关闭气阀可能会严重损害喷雾。附录（外置按键说明）：用于开启或关闭机器，关机时，该按键闪烁。用于增加用户可设参数（如温度）的

8、当前值，按一下增大一个单位。长按此键会提高参数修改速度。用于减小用户可设参数（如温度）的当前值，按一下减小一个单位。长按此键会提高参数修改速度。 用于确认编辑好的参数值（使修改生效） 。通过更新偏移值将检测器当前信号设置为零。用于点亮检测器光源。当光源点亮时，雾化室变亮。菜单导航键。当通过计算机控制检测器进行操作时，控制面板上的按键被禁用以防止误操作。修改任何参数后，需按 键进行确认，否则，修改无效。用于菜单导航，当前可编辑的行在括号内，上下方向键用于选择需要编辑的行，左右方向键用于选择需要编辑的字符， 和 用于修改数值， 用于确认修改。三、ELSD的计算（以药典为例）：外标两点法对数方程是在

9、应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）进行药物分析时的含量计算方法。比如银杏叶、知母、黄芪、人参、署预、（中药含有皂苷的），化药也有一些。下面以黄芪药材为例，进行详细解析：方 法：照高效液相色谱法，ODS 柱，以乙腈-水（32：68）为流动相，流速 1ml/min，经蒸发光检测器检测，用外标两点对数方程计算黄芪药材中黄芪甲苷的含量。仪 器：RIGOL L-3000 型液相色谱仪、蒸发光检测器（ELSD） 、ODS 柱（4.6um*5mm*200mm）供试品：黄芪药材（检测成分：黄芪甲苷）关键词：高效液相法、蒸发光检测器、黄芪甲苷、粉碎、提取物、外标两点对数方程正 文：前 处

10、理：取约 20g 的黄芪药材放置于小型粉碎机内，粉碎后，盛装在密闭的容器中待用。供试品制备：取黄芪药材粉末两份，.4.0037g；.4.0022g。分别置索氏提取器中，加甲醇 40ml，浸泡过夜（大于 8 小时） 。第二天，加甲醇适量，加热回流 4 小时，提取液浓缩至干，残渣加水 10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇（制法：把水加入正丁醇中至饱和）振摇提取 4次，每次 40ml，合并正丁醇液；用氨试液充分洗涤 2 次，每次 40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，放冷；通过 D101 型大孔吸附树脂柱(备注：自己装填)，并以水 50ml 洗脱，弃去水液；再用 40%乙醇

11、30ml 洗脱，弃去洗脱液；继用 70%乙醇 80ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干；用甲醇溶解并转移至 5ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。简单讲，即把黄芪药材最后提取物（黄芪甲苷）溶解到 5ml 甲醇中。对照品制备：称取黄芪甲苷对照品（中检所购入）0.0512g 至 100ml 容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，摇匀，即得。测 定：系统平衡后，精密吸取对照品溶液 10ul 进样，得色谱峰面积：259457 ；进样 20ul，得色谱峰面积：523039。供试品溶液进样 20ul，两针，色谱峰面积为：.909836，. 902925 。根据对照品峰面积和进样量，以外标两点对数方程计算供试品

12、含量。两点对数方程：即利用两点的对数值呈线性的关系求解方程式。本例是用外标法求得样品峰面积后，再利用进样量对数值和峰面积对数值成正比的关系，来求解二元一次方程 y=ax+b。数据处理：根据外标两点对数方程，应先计算得到方程式中的 x、y 值，才能求解此方程式。即取对照品进样量的对数值为 x，取对照品峰面积对数值为 y，计算结果如下：对照品 进样量： 0.0512g/100ml10ul（5.12ug） 0.0512g/100ml20ul（10.24ug）进样量取 lg，得 x： 0.7093 1.0103 色谱峰面积： 259457 523039峰面积取 lg，得 y： 5.4141 5.718

13、5 方程式求解：根据“数据处理”中求得的x、y值，通过Excel图表中的XY散点图，以（0.7093，5.4141） 、(1.0103, 5.7185)两点，求得方程如下：供试品进样量求解：取供试品色谱峰面积的对数值，得 y，带入已求得的方程式 y=1.0113x+4.6968，求得 x，如下：供试品 称样量： 4.0037g 4.0022g 色谱峰面积： 909836 902925峰面积取 lg，得 y： 5.9590 5.9557 通过方程，求得 x： 1.2481 1.2448根据 lg(进样量)=x，求 x（1.2481、1.2448）的反对数，得供试品进样量:. 17.7052ug . 17.5711ug含量计算：根据供试品称样量. 4.0037g；. 4.0022g 、样品的稀释倍数 5ml 及 20ul 进样量中黄芪甲苷的量（. 17.7052ug 、. 17.5711ug） ，求得：供试品含量：（17.7052ug/20ul5ml/4.0037g）100%=0.1106%供试品含量：（17.5711ug/20ul5ml/4.0022g）100%=0.1098%平均值为：（0.1106%+0.1098%）/ 2 = 0.11%结 果：该批黄芪药材中含黄芪甲苷的量为 0.11%。