1、汇报内容 KRAS和 EGFR的简介及临床意义 ARMS-PCR的基本原理和技术特点 等位特异性引物设计 KRAS试剂盒开发简介KRAS和 EGFR的简介及临床意义KRAS背景 KRAS是一种原癌基因，长约 35kb，位于 12号染色体，是 RAS基因家族成员之一，编码的蛋白主要参与 PI3K、 PTEN、 AKT和 RAF、MEK、 ERK信号通路的调控； EGFR在通路中位于 KRAS上游，配体与之结合后可以激发其酪氨酸激酶活性，导致 KRAS的活化和通路中信号传导； KRAS是许多恶性肿瘤的常见突变基因：胰腺癌（ 65%-90%）、结直肠癌（ 40%）、肺癌（ 20%）、卵巢癌（ 15%
2、）。KRAS基因突变影响结直肠癌药物疗效 KRAS基因野生型的转移性结直肠癌患者能从 EGF抗体（ 西妥昔单抗、帕尼单抗 ）治疗中获益，而基因突变的患者治疗效果很差；KRAS突变型患者对西妥昔单抗无应答，其总体生存期明显低于 KRAS野生型患者Karapetis CS, 2008, N Eng J Med结直肠癌患者检测 KRAS突变相关指南 欧洲药品评估局（ EMEA， 2008）指出： KRAS野生型的进展期结直肠癌患者可能从帕尼单抗中受益，而突变型患者受益较少。 美国临床肿瘤学会（ ASCO， 2009）推荐： 转移性结直肠癌患者应检测 KRAS突变，如有 KRAS12、 13位突变，则
3、不应进行 EGFR单克隆抗体治疗； 美国 FDA指南推荐：在使用靶向药物西妥昔单抗和帕尼单抗治疗转移性结肠直肠癌前必须检测 KRAS基因的基因型； 2012年 7月 6日批准第一个用于结直肠癌的基因检测（Qiagen） ，以判断西妥昔单抗是否有效； 美国国立综合癌症网络（ NCCN， 2014）指南说： 转移性结直肠癌患者均应进行 RAS突变检测（ KRAS和 NRAS），至少应检测 KRAS第二外显子的突变情况 。 KRAS或NRAS突变型的病人不应采取西妥昔单抗或帕尼单抗治疗。 中国卫生部于 2010年 10月 14日发表了结直肠癌诊疗规范（ 2010版） 。明确指出在患者确定为复发或转移
4、性结直肠癌接受 西妥昔单抗 、帕尼单抗时，必须检测肿瘤组织的 K-ras基因状态。在晚期 /转移性结直肠癌化疗中，在治疗前检测肿瘤 K-ras 基因状态， EGFR不推荐作为常规检查项目。KRAS基因突变影响非小细胞肺癌药物疗效 KRAS基因野生型的非小细胞肺癌患者能从小分子酪氨酸激酶抑制剂（ TKI，如 吉非替尼、厄洛替尼 ）治疗中获益，而基因突变的患者易发生抵抗； KRAS突变型患者使用厄洛替尼联合化疗后，其无症状生存期和总生存期明显低于野生型患者（图中红线所示）Anderson SM, 2011, Expert Rev. Mol. Diagn Eberhard DA, 2005, J C
5、lin Oncol 非小细胞肺癌患者检测 KRAS突变相关指南 美国国立综合癌症网络（ NCCN， 2009）指出， KRAS突变与非小细胞肺癌患者 TKI抵抗有关， KRAS基因测序有助于确定哪些病人适合TKI治疗。 当 KRAS基因发生了突变，则不建议病人使用厄洛替尼进行分子靶向治疗。KRAS主要突变位点 在结直肠癌中， KRAS突变主要发生于 codon12 (80%)、 codon13 (15-20%)、 codon61和 146 (5%)；在肺癌中，约 97%的 KRAS突变发生于 codon12、 13，其余位于 codon61和 146。突变 密码子 碱基变化 Cosmic ID
6、Gly12Asp 12 GGT GAT 521Gly12Val 12 GGT GTT 520Gly12Ser 12 GGT AGT 517Gly12Cys 12 GGT TGT 516Gly12Ala 12 GGT GCT 522Gly12Arg 12 GGT CGT 518Gly13Asp 13 GGC GAC 532EGFR突变背景 EGFR基因位于染色体 7p11.2，大小约 200kb，是上皮生长因子（EGF）细胞增殖和信号传导的受体。 EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。 非小
7、细胞肺癌中 EGFR突变率在北美和西欧为 10%左右，而在东亚为30-50%。 其中在亚洲、女性、非吸烟、腺癌患者中 EGFR突变率最高，达 70-80%。EGFR突变背景 研究发现 EGFR突变与吉非替尼、厄洛替尼的疗效密切有关。 其中EGFR突变的患者对吉非替尼、厄洛替尼治疗敏感，有效率在 80%以上；而 EGFR野生型的患者的有效率在 10%以下。 吉非替尼、厄洛替尼作为一线药物治疗非小细胞肺癌，相比传统的化疗可以取得更长的无进展生存期（ PFS），且副作用相对较小，患者容易耐受，但总体生存期（ OS）并未延长。 EGFR-TKI目前主要用于非小细胞肺癌一线、二线和维持治疗。我国大部分医生将其用于二线（ 69.4%）治疗， 41.7%的医生将其用于一线治疗， 27.8%的医生将其作为维持治疗药物。
