1、等 电 聚 焦 电 泳Isoelectric Focusing Electrophoresis， IEFE一、 IEFE 定义 IEFE一种利用具有 pH梯度的支持介质分离 等电点不同 的蛋白质的电泳技术。各种蛋白质各自都有一个等电点 ,在一特殊的 pH环境中 ,蛋白质分子呈电中性 ,在电场中不会迁移。等电聚焦 就是在电泳介质中放入 载体两性电解质 ，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由 阳极到阴极逐步增加的 pH梯度 ，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中，电泳技术中的等电点聚焦也称为聚焦电泳。二、 IEFE的 特点（一）优点n 1.
2、分辨率高（精密度可达 0.01pH单位），灵敏度高（最低检出量达 0.1ng）。n 2.电泳区带相当狭窄。n 3.重复性好。（二）缺点n 1.要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀。n 2.样品中的成分必须停留在其 pI， 不适用在 pI不溶或发生变性的蛋白质。分辨率较不连续 PAGE更高，特别适合于分离分子量相同而电荷不同的生物大分子。三、 IEFE的基本原理蛋白质分子在不同 pH下的解离状态NH3+ NH3+ NH2P P PCOOH COO- COO- pH pI pH pI pH pI 在电泳介质中放入载体两性电解质，当通入直流电时，两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的 pH梯度，正极附近是低 pH区，负极附近是高 pH区。蛋白质分子的电聚焦过程+ pI1pI2pH=pI pI3 pIn-a b cn 蛋白质分子在负极端n 蛋白质分子在正极端n 蛋白质样品中各组分聚焦成区带+
