细菌标准操作规程3.doc

1、1.目的规范营养琼脂培养基配制的操作规程，保证培养基质量。2.原理培养基含有氮源、碳源和微量无机盐。适宜细菌生长繁殖。3 用途供细菌培养、菌株纯化及传种使用。4.配方营 养 琼 脂 干 粉 28g、 蒸 馏 水 1000ml。5.操 作 步 骤将 28g 营 养 琼 脂 干 粉 溶 于 1000ml 蒸 馏 水 中 ， 混 匀 至 完 全 溶 解 ， 分 装 ， 经 121 灭 菌 15 分钟 ， 冷 藏 备 用 。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做

2、质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-17表 5-17 配 制 营 养 琼 脂 培养基 质 控 方 法 及 结 果试 验 方 法 结 果无 菌 试 验 100 块 随 机 取 10 块 ， 35 培 养 2448h 无 细 菌 生 长生 长 试 验 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ATCC25923， 35 培 养 2448h 菌 落 浅 黄 色铜 铝 假 单 胞 菌 ATCC27853,35 培 养 2448h 菌 落 无 色 或 浅 绿 色 ， 直 径 2.5mm平 行 试 验 做 质 控 时 ， 取 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做 9.注 意 事 项倾 注 时

3、 温 度 不 易 过 高 ， 否 则 冷 凝 水 过 多 易 污 染 ； 若 温 度 过 低 ， 琼 脂 易 凝 固 。通辽市医院检验科微生物室作业指导书营养琼脂配制 标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 通辽市医院检验科微生物室作业指导书营养琼脂配制 标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 通辽市医院检验科微生物室作业指导书血琼脂培养基配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范血琼脂培养基配制的操作规程，保证培养基质量。2.原理羊血或兔血等是细菌生长繁

4、殖的良好营养物质。在 4550的基础培养基中加入血液可疑完好保存血液中某些布耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将 Nacl 浓度提高道 0.85%，可使血平皿在 35培养 1824 小时后色泽仍然鲜艳。3 用途供一般病原菌的分离培养培养、溶血性鉴别及保存菌种用。4.配方特 殊 蛋 白 胨 23g、 淀 粉 1g、 氯 化 钠 5g.、 琼 脂 10g、 无 菌 脱 纤 维 羊 血 （ 或 兔 血 ） 5%10%,ph 7.17.5。5.操 作 步 骤将 上 述 成 分 混 匀 ， 溶 于 1000ml 蒸 馏 水 中 ， 加 热 溶 化 ， 校 正 ph,121 高 压 灭 菌 15 分

5、钟 。 冷 却 至50 加 入 无 菌 血 液 ， 充 分 摇 匀 后 竞 逐 平 板 ， 待 凝 固 后 冷 藏 备 用 。 血 琼 脂 层 厚 4mm。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-18表 5-18 配 制 血 琼 脂 培养基 质 控 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验 100 块 随 机 取 10 块 ， 35 培 养 1824h 无 细 菌 生 长生 长

6、 试 验 化 脓 性 链 球 菌 ATCC 19615,35 培 养 1824h 生 长 良 好 ， 溶 血肺 炎 链 球 菌 ATCC 6305， 35 培 养 1824h 生 长 良 好 ， 溶 血金 黄 色 葡 萄 球 菌 ATCC 25923， 35 培 养 1824h 生 长 良 好 ， 溶 血大 肠 埃 希 菌 ATCC 25922， 35 培 养 1824h 生 长 良 好平 行 试 验 做 质 控 时 ， 取 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做平 行9.注 意 事 项倾 注 时 温 度 不 易 过 高 ， 否 则 血 细 胞 易 被 破 坏 而 溶 血 ； 若 温 度

7、过 低 ， 琼 脂 易 凝 固 。通辽市医院检验科微生物室作业指导书巧克力培养基配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范巧克力琼脂培养基配制操作规程，保证培养基质量。2.原理流感嗜血杆菌生长依赖血液中的 X 及 V 因子，当培养基加热至 8090时，可使血液中的红细胞破裂释放出 X、V 因子，以利于嗜血杆菌的生长培养。3 用途主要用于嗜血杆菌的分录培养，亦可用于奈瑟菌的增殖培养。4.配方牛 肉 浸 出 液 1000ml、 蛋 白 胨 10g、 氯 化 钠 5g.、 琼 脂 15g、 无 菌 脱 纤 维 羊 血 100ml， ph 7.2

8、7.4。5.操 作 步 骤将 前 4 项 成 分 混 合 ， 加 热 溶 化 ， 校 正 ph,121 高 压 灭 菌 15 分 钟 。 冷 却 至 8085 ， 以 无 菌 技 术加 入 羊 血 ， 摇 匀 后 置 至 8085 水 浴 中 ， 维 持 15 分 钟 ， 使 之 成 巧 克 力 色 取 出 ， 倾 注 平 板 ， 待 凝固 后 冷 藏 备 用 。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表

9、5-19表 5-19 配 制 巧 克 力 琼 脂 培养基 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验 100 块 随 机 取 10 块 ,35 ,CO2 培 养 2448h 无 细 菌 生 长生 长 试 验 流 感 嗜 血 杆 菌 ATCC 10211,35 ， CO2 培 养 2448h 生 长淋 病 奈 瑟 菌 ATCC43069， 35 ， CO2 培 养 2448h 生 长平 行 试 验 做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做平 行9. 注 意 事 项水 浴 温 度 不 宜 过 高 ， 时 间 不 宜 过 长 ， 否 则

10、 X 和 V 因 子 消 耗 殆 尽 ； 水 浴 温 度 也 不 宜 过 低 ， 时 间 也不 宜 过 短 ， 否 则 X 和 V 因 子 不 能 充 分 释 放 出 来 ， 应 控 制 在 8085 。通辽市医院检验科微生物室作业指导书M-H 培养基配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范 M-H 培养基配制操作规程，保证培养基质量。2.原理M-H 培养基用 Mueller-Hinton 琼脂（水解酪蛋白琼脂）配制，淀粉为保护性胶体，能对抗细菌中的毒性物质，水解酪蛋白含多种氨基酸，牛肉浸膏能提供细菌氮源的主要营养物质。药敏试验中，为保

11、证结果重复性及抑菌环的大小、清晰，因此培养基不含对抗生素及磺胺药物的拮抗剂。3 用途用于普通细菌的抗菌药物敏感试验。4.配方成 品 OXOID M-H 干 粉 38g、 蒸 馏 水 100ml， ph 7.17.5。5.操 作 步 骤将 上 述 成 分 混 合 ， 校 正 ph,121 高 压 灭 菌 15 分 钟 。 冷 却 至 50 左 右 ， 无 菌 定 量 吸 取 25ml 于 直径 9cm 的 无 菌 平 板 内 ， 凝 固 后 冷 藏 备 用 。 琼 脂 层 厚 4mm.6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8

12、.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-20.表 5-20 配 制 M-H 培养基 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验生 长 试 验平 行 试 验平 行100 块 随 机 取 10 块 ,35 培 养 24h在 M-H 培养基上涂布粪肠球菌 ATCC 29212,， 用 甲 氧 苄啶 /磺 胺 甲 恶 唑 纸 片 进 行 药 敏 试 验 ,35 培 养 24h做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做无 细 菌 生 长出 现 一 个 边 缘

13、 清 楚 的 抑 菌圈 ， 直 径 应 20mm9. 注 意 事 项9.1 倾 注 琼 脂 量 为 25ml， 平 板 深 度 4mm.若 太 薄 ， 易 产 生 假 敏 感 。 若 太 厚 ， 平 皿 中 的 抗 生 素 往 下扩 散 而 使 抑 菌 环 变 狭 窄 ， 产 生 假 耐 药 性 。9.2 pH 会 影 响 某 些 抗 生 素 的 活 性 。 试 验 时 不 可 将 平 板 培 养 在 CO2 培 养 箱 中 ， 否 则 会 在 琼 脂 的 潮湿 表 面 产 生 碳 酸 而 降 低 pH 值 ， 将 影 响 各 种 抗 生 素 的 扩 散 速 度 、 抑 菌 环 大 小 。 通

14、辽市医院检验科微生物室作业指导书Cary-Blair 转运培养基配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范 Cary-Blair 转运培养基配制操作规程，保证培养基质量。2.原理该培养基具有抗氧化、缓冲等作用，能维持病原菌活力，适合标本运输。3 用途主要用于标本采集及保存使用。4.配方硫 乙 醇 酸 钠 1.5g、 磷 酸 氢 二 钠 1.1g、 氯 化 钠 5g、 氯 化 钙 0.09g、 琼 脂 5.6g、 蒸 馏 水 100ml， ph 8.28.6。5.操 作 步 骤将 上 述 成 分 加 入 蒸 馏 水 中 ， 加 热 溶 解

15、。 校 正 ph 至 , 8.28.6， 分 装 试 管 ， 每 支 5ml， 121 高 压 灭菌 15 分 钟 凝 固 后 ， 冷 藏 备 用 。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-21表 5-21 配 制 Cary-Blair 转运培养基 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验生 长 试 验平 行 试 验平 行100 块 随 机 取 10 支 ， ,

16、35 培 养 24h， 观察 有 无 细 菌 生 长,沙 门 菌 质 控 菌 株 ， 35 培 养志 贺 菌 质 控 菌 株 ， 35 培 养做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做无 细 菌 生 长3 日 内 存 活3 日 内 存 活9. 注 意 事 项 （ 略 ）通辽市医院检验科微生物室作业指导书营养肉汤配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范营养肉汤配制的操作规程，保证培养基质量。2.原理含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，如蛋白胨、牛肉膏、食盐、水等，所以供微生物生长繁殖之用。3 用途用于标

17、本及各类细菌的增菌。4.配方蛋白胨 10g、 牛 肉 浸 液 1000ml、 氯 化 钠 5g,Ph7.27.4。5.操 作 步 骤将 上 述 成 分 混 合 ， 校 正 pH， 分 装 试 管 ， 每 管 35ml。 经 121 高 压 灭 菌 15 分 钟 ， 冷 藏 备 用 。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-22表 5-22 配 制 营养肉汤 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验

18、试 验 方 法 结 果无 菌 试 验生 长 试 验平 行 试 验平 行100 支 随 机 取 10 支 ， ,35 培 养1824h， 观 察 有 无 细 菌 生 长 (若 有 细 菌 生 长 ， 则 营 养 肉 汤变 浑 浊 )大 肠 埃 希 菌 ATCC 25922,需 氧 ,35 , 1824h金 黄 色 葡 萄 球 ATCC 25923,需 氧 ,35 , 1824h 做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 营 养 肉 汤 同 时 做无 细 菌 生 长生 长生 长9. 注 意 事 项调 整 pH 时 ， 加 碱 后 ， 必 须 加 热 ， 使 pH 值 得 以 稳 定 。通辽市医

19、院检验科微生物室作业指导书碱性蛋白胨水配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范碱性蛋白胨水配制操作规程，保证培养基质量。2.原理在 pH8.09.0 环境中，霍乱弧菌能较好地生长繁殖，而其他大部分细菌在此环境中生长受抑制，因此霍乱弧菌在此培养基上生长占优势，为进一步分离培养提供有利条件。3 用途主要用于霍乱弧菌增菌培养用。4.配方蛋白胨 10g、 氯 化 钠 20g,蒸 馏 水 1000ml,pH8.48.8。5.操 作 步 骤将 上 述 成 分 混 合 加 热 溶 解 ， 调 整 pH 至 8.48.8， 煮 沸 ， 稍 冷 却 ，

20、分 装 试 管 每 支 8ml， 121 高 压灭 菌 15 分 钟 ， 冷 藏 备 用 。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-23表 5-22 配 制 营养肉汤 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验生 长 试 验平 行 试 验平 行100 支 随 机 取 10 支 ， ,35 培 养1824h， 观 察 有 无 细 菌 生 长 (若 有 细 菌 生 长

21、 ， 则 变 浑 浊 )非 O1 群 弧 菌 (质 控 菌 株 )， 35 孵 育 6h大 肠 埃 希 菌 ATCC 25922, 35 孵 育 6h副 溶 血 弧 菌 (质 控 菌 株 )， 35 孵 育 6h做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做无 细 菌 生 长生 长 良 好生 长 抑 制生 长 良 好9. 注 意 事 项蒸 馏 水 配 制 时 ， 由 于 蒸 馏 水 pH 偏 低 ， 故 pH 要 重 新 测 定 。通辽市医院检验科微生物室作业指导书牛脑心浸液培养基配制标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目

22、的规范牛脑心浸液培养基配制操作规程，保证培养基质量。2.原理该培养基营养丰富，营养要求较高的细菌在此环境中能较好地生长繁殖，为进一步分离培养提供有利条件。3 用途主要培养营养要求较高的细菌。4.配方牛脑浸液培养基 12.5g、牛心浸液培养基 5g、 蛋 白 胨 10g、 琼 脂 粉 10g、 氯 化 钠 5g,、 磷 酸 氢 二 钠2.5g、 蒸 馏 水 1000ml,pH7.27.6。5.操 作 步 骤将 上 述 成 分 加 入 1000ml 蒸 馏 水 中 ， 加 热 溶 解 。 调 pH 至 7.27.6， 分 装 ， 121 高 压 灭 菌 15 分 钟 。冷 藏 备 用 。6.储 存

23、 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-24表 5-22 配 制 牛脑心浸液培养基 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验生 长 试 验平 行 试 验平 行100 支 随 机 取 10 支 ， ,35 培 养1824h， 观 察 有 无 细 菌 生 长 (若 有 细 菌 生 长 ， 则 变 浑 浊 )大 肠 埃 希 菌 ATCC 25922,需 氧 ,35 , 1824

24、h金 黄 色 葡 萄 球 ATCC 25923,需 氧 ,35 , 1824h 做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做无 细 菌 生 长生 长生 长9. 注 意 事 项若 再 加 入 酵 母 提 取 物 5g/1000ml， 效 果 更 佳 。通辽市医院检验科微生物室作业指导书厌氧血琼脂培养基配制 标准操作规程文件编号：XX-JY-CZ-XJ-XXX版本生效日期：共 页 第 页 1.目的规范厌氧血琼脂培养基配制操作规程，保证培养基质量。2.原理本培养基含有丰富营养，能提供厌氧菌生长繁殖所需的生长刺激剂、还原剂等，即使营养要求较高的厌氧菌亦能生长良好。3 用途用于厌

25、氧菌的分离培养。4.配方成品厌氧琼脂粉 46g、 蒸 馏 水 1000ml、 脱 纤 维 羊 血 50ml。 5.操 作 步 骤将 成 品 厌 氧 琼 脂 粉 加 入 1000ml 蒸 馏 水 中 ， 121 高 压 灭 菌 15 分 钟 ， 冷 至 50 左 右 ， 加 入 脱 纤 维羊 血 50ml。 混 匀 后 倾 注 平 板 ， 冷 藏 备 用 。6.储 存 条 件28 冰 箱 。7.有 效 期实 验 室 自 行 规 定 ， 确 保 培 养 基 质 量 。8.质 量 控 制8.1 质 控 频 度 每 次 新 配 制 时 做 质 控 。8.2 质 控 方 法 及 结 果 见 表 5-25

26、表 5-25 配 制 厌氧血琼脂培养基 质 量 控 制 方 法 及 结 果试 验 试 验 方 法 结 果无 菌 试 验生 长 试 验平 行 试 验平 行100 支 随 机 取 10 支 ， ,35 厌 氧 培 养 24h脆 弱 拟 杆 菌 ATCC25285， 厌 氧 ， 35 ， 2448h产 气 荚 膜 杆 菌 ATCC13124， 厌 氧 ， 35 ， 2448h具 核 梭 杆 菌 ATCC25586， 厌 氧 ， 35 ， 2448h厌 氧 消 化 球 菌 ATCC27337， 厌 氧 ， 35 ， 2448h产 黑 色 素 普 雷 沃 菌 ATCC25845， 厌 氧 ， 35 ， 2448h做 质 控 时 ,要 求 新 旧 批 号 的 培 养 基 同 时 做无 细 菌 生 长生 长生 长 , 溶 血生 长生 长生 长新 旧 批 号 结 果 相 同9. 注 意 事 项温 度 应 适 宜 ， 若 温 度 过 高 ， 冷 凝 水 过 多 易 致 污 染 ； 若 温 度 过 低 ， 部 分 琼 脂 凝 固 ， 平 板 表 面 高 低 不平 。 高 压 灭 菌 后 加 入 脱 纤 维 羊 血 时 的 温 度 不 能 太 高 ， 否 则 会 引 起 溶 血 。