实验四病源性球菌与杆菌xiugai.ppt

1、单击此处编辑母版标题样 式 单击此处编辑母版副标题样式 1* 病源性球菌与杆菌 一、实验目的 1.掌握链球菌、脑膜炎双球菌、结核杆菌、白喉杆菌 的形态特征和染色特性。 2.熟悉肠道杆菌培养特征、生化反应及动力学等特性 。 3.了解三种葡萄球菌产生的色素。 4.了解乙型溶血型链球菌在血琼脂平板上的菌落特点 及溶血性。 5熟悉抗 “o”试验的方法及临床意义。 二、实验内容 1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态 ;示 教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。 2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ ss培 养基）的生化反应。 3.化脓性球菌的鉴定 三种葡萄球菌的色素观察 乙型链球菌的溶血现象观察 抗

2、 “O”实验。 三、作业： 1.镜下绘出 4种形态图 2.根据生化特性及产生色素，葡萄球菌分为 哪几种类型？ 管号 加入物 1 2 3 4 5 血清（ Ab） 1： 250 血清 0.25ml 1:500血 清 0.25ml 1:750血 清 0.25ml 缓 冲液 0.25ml 0.25ml 溶血素 “O”(Ag) 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 2%兔 RBC 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 结 果 Salmonella -Shigella Mediun 主要成分 基础营养 乳糖 指示剂 抑制剂 分解乳糖 不分解乳糖 产酸 PH 指示剂变

3、红色 红色大菌落 大肠杆菌等 无明显变化 无色半透明小菌落 志贺菌等 大肠杆菌 痢疾杆菌 结核分枝杆菌 抗酸染色 乙型溶血性链球菌 溶血环 白喉棒状杆菌 异染颗粒 实验四 病原性球菌 1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性 2. 葡萄球菌、链球菌的培养物 3. 血浆凝固酶试验 -玻片法 试管法 4、抗链球菌溶血素 ”O” （ ASO）乳胶试验 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定 示教示教 （操作， 1人 /组） 示教示教 示教示教 示教示教 （操作， 1人 /组） 肺炎球菌 特殊染色可见的荚膜 G+球菌： 金葡菌 链球菌 肺炎双球菌 1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性 示教示教 G-球菌：

4、淋球菌 脑膜炎球菌 2. 葡萄球菌、链球菌的培养物 示教示教 普通琼脂平板 血平板 菌落形状 色素 溶血性 金葡 圆形凸起光滑中等大小 金黄色 + 柠葡 同上 柠檬色 - 白葡 同上 白色 - 表 1 血平板 甲型链球菌 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环 乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环 巧克力血平板 脑膜炎双球菌 菌落透明似露滴状 表 2 表 3 3. 血浆凝固酶试验 -玻片法 （操作， 1人 /组） 原理： 方法： 兔血浆 兔血浆 生理盐水 1 2 3 金葡 白葡 金葡 + + + 凝集（ +） 不凝集（ -）不凝集（ -） 4、血 浆 凝固 酶 试验 （ 试 管法） 金葡菌 白葡菌 +

5、 + 兔血 浆 兔血 浆 37 30水浴 观 察 凝集 为 阳性 不凝集 为 阴性 示教示教 凝固酶实验 （试管法） 五、抗 链 球菌溶血素 “O”（ ASO） 快速胶乳法 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平 的抗体后，还有多余 ASO，这些多余抗体即与 SLO胶乳 试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。 （操作， 1人 /组） 原理： 阳性对照 阴性对照 待测血清 各加溶血素 “O” 1 滴轻摇 1min 再加 SLO胶乳 1滴轻摇 3min 观察结果 方法： 稀释度 ASO （ IU/ml） 1： 15 400 1： 30 800 1： 60 1600 ASO250 IU/ml 阴性

6、结果判定： 注意事项： 1. 液体量要一样，菌量一样。 2. 血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点， 不能干。 3. 涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂 凝集物可被涂散，变阴性。 肠 道杆菌 n 一、 肠 道杆菌的形 态 及染色性 n 二、 肠 道杆菌的培养特性 n 三、 肠 道杆菌的生化反 应 特点 n 四、 Widal实验 肠 道杆菌的形 态 及染色片 肠 道菌的菌落形 态 n EMB n 大 肠 ：菌落呈紫黑色，有金属光 泽 。 n 伤 寒 痢疾：菌落无色半透明。 n SS n D大 肠 ：大而不透明的 红 色菌落。 n 伤 寒 痢疾：中等大小淡黄色菌落。 大 肠 杆菌（ EMB培养基 ）

7、 肠 道致病菌（ SS培养基 ） 粪 便 标 本中致病性 肠 道杆菌的分离与 鉴 定 生化反 应 1 单 糖 发 酵 n 葡萄糖及乳糖 发 酵 一） 实验 目的与原理 n 了解糖 发 酵 试验 方法 二） 实验 材料 1、菌种：大 肠 杆菌、 伤 寒杆菌、痢疾杆菌培 养物 2、培养基：乳糖及葡萄糖 发 酵管 三） 实验 方法 、用接种 环 将大 肠 杆菌、 伤 寒杆菌分 别 各接 种于葡萄糖及乳糖 发 酵管中（方法同前）。 2、 37孵育 1824小 时 ，取出 观 察 结 果。 n 动 力 检测 菌名 葡萄 糖 甘 露 醇 乳 糖 靛 基 质 甲基 红 VP 试 验 枸椽 酸 盐 硫化 氢

8、尿素 分解 动 力 福氏志 贺 菌 + + /+ + 伤 寒沙 门 菌 + + + /+ + + 乙型副 伤 寒沙 门 菌 + + + 大 肠 杆菌 + + + 产 气杆菌 + + + 普通 变 形杆菌 + + /+ + + + 常 见肠 道杆菌的生化反 应鉴别 表 斜面 底部 H2S 初步 鉴 定 + + 非病原菌 非病原菌 + +/ 副 伤 寒杆菌及其他沙 门 氏菌 + + 伤 寒杆菌 + 痢疾杆菌 铁质 双糖 琼 脂基上各种 肠 道杆菌的生 长 情况 肠 道杆菌在 KI培养基上的培养特性 Indol实验 生化反 应 2 Indol实验 2. 肠道杆菌在 SS培养基上的生长现象 示教示教

9、大肠杆菌 伤寒杆菌 SS平板 红色大菌落 无色透明小菌落 基础培养基，乳糖 (底物 )，胆盐、煌绿 (抑制非致 病菌 )，中性红（指示剂）。 SS培养基： 3. 五类肠道杆菌的生化反应及动力 示教示教 大肠杆菌 - - + + + / 变形杆菌 - + + +/- + - / 乙型副伤 寒杆菌 - + - - + -/ 伤寒杆菌 + - +/- - - + -/+ 痢疾杆菌 + - - - +/- - -/+ 葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基质 动力 双糖铁 4. 肠道杆菌未知菌 1和未知菌 2的鉴定 （操作， 2人 /组） 未知菌 双糖铁培养基 (乳糖 /固体 /上，葡萄糖 /半固体 /下 ) 生化反应 葡萄糖发酵 乳糖发酵 尿素酶试验 H2S试验 靛基质试验（ 蛋白胨水液体培养基 ） 动力试验（ 半固体培养基 ） （ 微量发酵管 ） 方法： 血清学鉴定（玻片凝集反应） （ 37 1824h） 伤寒诊断血清 伤寒诊断血清 + + 未知菌 1 未知菌 2 血清学鉴定（玻片凝集反应） ？ ？ 结果： 双糖铁 葡 乳 尿 H2S 靛 动力 血清学 未知菌 1 未知菌 2 结论： 未知菌 1：？ 未知菌 2：？