1、液相色谱法分离手性 药物 刘志英 2004.11.23 概念 n 许多药物中存在着分子组成与构造完全相同但 分子的立体结构不同的化合物，他们是立体异 构体，不能完全叠合但能互为镜像，（如左手 与右手），这就是 手性 (chirality)。 手性药物 n 药物作用的靶分子都是手性的，因此药物分子与靶分 子的不对称性必须相匹配（ 手性识别 手与手套）。 n 另外，分子药理学研究发现，含有手性因素的化学药 物对映体，在人体内的药理活性、代谢过程和毒性存 在着显著差异。在通常情况下，只有一个对映体具有 药理作用，而另一个对映体不仅无药理作用，还会产 生一定副作用。 n 如 20世纪 60年代 ， 镇
2、静药反应停（ thalidomide,沙利度 胺）的消旋体用作缓解妊辰反应作用，后来发现在欧 洲服用过的孕妇不少产下海豚状畸形儿。随后研究表 明：反应停右旋体（ R型 ）有镇静作用，左旋体（ S型 ) 具有胚胎毒性和致畸作用。 研究背景 n 1992年 FDA发布手性药物指导原则，要求所有在美国 上市的消旋体新药，生产者均需提供详细报告，说明 药物中所含对映体各自的药理作用、毒性和效果。 n 显然， 单一异构体 的试验次数比较单纯，经济上更合 算。 n 目前普遍使用的 2000多种合成药物中有 600余种为手 性药物，而活性的单一对映体药物不足 100种，其它 500余种都是左右旋混在一起的消
3、旋体药物。 n 1999年，手性药物市场第一次超过 1000亿美元，单一 异构体药物销售额达到 1150亿美元，占世界药品市场 3600亿美元的 32%。 常用的手性药物测定技术 n 高效液相色谱 (HPLC) n 气相色谱 (GC)(样品需具有一定的挥发性及热稳 定性 ） n 毛细管电泳 (HPCE) n 超临界流体色谱（ SFC) HPLC n 80年代初 HPLC法迅速成为药物对映体分 离和测定最为广泛应用的方法。 n 特别适用于极性强、热稳定性差的手性 药物的分析。 n HPLC用于手性分离概括起来可分为两大 途径： 间接 (CDR)和 直接 (CMPA、 CSP)方 法。 液相色谱法
4、分离手性药物 n 直接法（ CMPA、 CSP）： 对映体之一与手性固定相或手性流动相添加剂间发生 分子间的三点作用（较稳定），另一对映体发生两点 作用；形成暂时的非对映异构体的结合物质，通过洗 脱分离。 n 间接法（ CDR) n 又称为非对映体拆分法或柱前 手性 衍生化法 n 对映体混合物在预处理中进行柱前衍生组成一对非对 映体 (Diastereoisomers) ，依其理化性质的差异，在非 手性柱上得以分离。 间接法：柱前衍生 n 优点： *可采用通用的非手性柱分离； *通过衍生化可提高检测灵敏度； *分离条件简单； *分离效果好 n 缺点： *要有可被衍生化的基团； *要有高光学纯度
5、的手性试剂； *对个对映体衍生化率速和平衡常数应一致； *衍生化和色谱过程中不能发生消旋化； 直接法： n 手性流动相添加剂（ CMPA） 法 ： （ 又可称为 手性 流动相 (CMP)拆分法或 手性 洗脱法） 若流动相中有烷烃则不可用乙腈 . n 水溶性化合物最好用反相柱，如 OD-R、 OD- RH、 OJ-RH、 AD-RH、 AS-RH; 可用醇 -水、乙 腈 -水作流动相。 柱子压力过高 n 原因：可能是杂质堵住了柱头（ frit）。 n 可更换在线过滤器（ in-line filter)或保护 柱，或注射前过滤样品。 n 由于乙醇、异丙醇粘度大，正常流速下 可能会导致压力过高。可降低流速直至 达到容许的上限。 保护柱 n 保护分析或半制备柱子免受易于在固定相上吸 附或溶化填料的物质的损坏。 n 保护柱材料与柱子相同。 n 以下情况需要更换保护柱： # 失去分离作用； # 峰宽增加； # 脱尾； # 增加体系压力降
