酵母基因组DNA提取试剂盒离心柱型.DOC

1、 1 酵母 基因组 DNA提取试剂盒（离心柱型） GK1091 50 Preps GK1092 100 Preps GK1093 20 Preps 一 .试剂盒组成 Components GK1091 50 Preps GK1092 100 Preps GK1093 20 Preps GenClean Column 2.0-ml Collection Tube LysisY buffer Digestion Solution(a) Wash Solution(b) PB Solution Ext Solution Elution Buffer(c) TE(pH8.0) Boiled RNase

2、 A Proteinase K(d) Lyticase(e) protocol 50 50 10 ml 20 ml 12 ml 20 ml 20 ml 10 ml 15 ml 240 ul 250 ul 250 ul 1 100 100 20 ml 40 ml 24 ml 40 ml 40 ml 20 ml 25 ml 480 ul 500 ul 500 ul 1 20 20 10 ml 8 ml 12 ml 8 ml 8 ml 10 ml 15 ml 120 ul 100 ul 100 ul 1 (a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于 55适当加温溶解后使用，不

3、会影响实验结果。 (b) 首次使用前 ，必须在 Wash Solution瓶中加入 4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持 Wash Solution中的乙醇含量。如果发现 Wash Solution由于运输或保管不当造成体积严重不准，请用量筒定容后再加入 4倍体积的无水乙醇。 (c)Elution Buffer为 2.5 mM Tris-HCl, pH8.5，请 4保存。 TE (pH8.0) 或者水 （ pH7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱 效率通常要低 20%左右。 (d)Proteinase K分装冻存 ， 不得将 Proteinase K直接加 到 Di

4、gestion Solution中，以免酶失活。 (e)请于 -20分装保存 Lyticase，减少反复冻融的次数，以免酶失活。 二 产品简介 酵母细胞 有一层坚硬的细胞壁，妨碍了研究人员从酵母细胞中快速有效地分离提取基因组 DNA。本试剂盒提供可以高效酶解酵母细胞壁的 Lyticase和能够特异结合 DNA的离心吸附柱，用于提取酵母细胞中的基因组 DNA。 同时本产品对经典的 SDS裂解液进行了改良，并使用 PB Solution与 Ext Solution处理细胞裂解液，再经过能高效、专一吸附 DNA的离心柱吸附后，可最大限度去除杂质蛋白以及脂类物质。 三 主要用途 从 酵母等真菌 中小规

5、模抽提基因组 DNA。 四 主要特点 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复 性 好。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在 2小时 内完成。 4.多次柱漂洗确保 提取酵母 基因组的 高纯度， OD260/OD280典型的比值达 1.7 1.9，长度可达 50Kb100kb，可直接用于 PCR， Southern-blot和各种酶切反应。 五 需自备试剂 无水乙醇 2 六保存方法及注意事项 试剂盒于常温运输， Proteinase K 、 Lyticase 以及 Boiled RNase A 请于

6、 -20保存，其它组分室温（ 15-25）保存，有效期为一年。 Digestion Solution中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤。眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮 助。 七 操作步骤 1. 取 1-2ml过夜培养的酵母菌液，加入至 1.5ml离心管中，室温 8,000rpm离心 1分钟，尽量吸除上清，收集菌体。 2. 向菌体 中 加入 200ul LysisY Buffer， 加入 5ul Lyticase, 充分混匀， 30温育 30min。 3. 8,000rpm离心 5min，弃上清，收

7、集沉淀。 注意：以上为 5 107酵母细胞的 Lyticase用量，实验时应根据酵母的菌株和酵母细胞的数量的不同，对Lyticase 的浓度和温育时间进行适当调整。 4. 向沉淀中加入 200ul TE溶液重悬沉淀，充分混匀。 5. 在 200ul TE悬浮样品中，加入 300ul Digestion Solution，混匀； 加入 4ul RNase A混匀， 55 保温 10分钟； 再加入 4l Proteinase K， 55 保温 10 30分钟。 注意 ：（ 1） 应按次序加入，不得将 Proteinase K先加入 Digestion Solution，再加到样品中。 （ 2） 保

8、温时间取决于样品的类型。对于细胞样品， 55 保温 10分钟足以使细胞裂解，释放出基因组 DNA。降解完全的样品应是透明粘稠液体。 6. 依次 加入 300ul Ext溶液和 300ul PB溶液 ， 充分摇动 混匀， 12000rpm室温离心 5分钟 ，溶液将分 为上下两 层 ， 上层溶液为蓝色，基因组 DNA存在于下层溶液中， 两层中间 可能 会有一些沉淀物 。 然后用 1ml Tip头 伸到下层，将下层中溶液 全部转移到套放于 2ml收集管内的 GenClean柱中 ，注意 尽量 不要 吸到上层溶液和中间层沉淀 。 注意：此步骤加入 Ext和 PB 溶液后，一定要 充分摇匀，否则后面离心

9、时杂质不容易分层。 7. 8,000rpm室温离心 1分钟。 取下 GenClean柱，弃去收集管中的废液。 8. 将 GenClean柱放回收集管中，加入 500ul Wash Solution， 8,000rpm，室温离心 1分钟 。 取下 GenClean柱，弃去收集管中的废液。 9. 重复步骤 8一次。 10. 将 GenClean柱放回收集管中， 12,000rpm，室温离心 1分钟，以 去除 残留 的 Wash Solution。 注意： 此步骤高速空离是为了去尽残留的乙醇，请勿省略，否则可能因所纯化的核酸中残留有乙醇而影响后续的实验效果。 11. 将 GenClean柱放入新的洁

10、净 的 1.5ml离心管中，在 GenClean柱中央加入 50 100ul Elution Buffer，室温或 37 放置 2分钟。 注意 ：（ 1） 为提高洗脱效率，可以将 Elution Buffer预热到 55 80 。 （ 2） 如果样品中基因组 DNA含量很低 ，用 30ul Elution Buffer洗脱可以提高洗脱液的样品浓度，但产率有所下降。 12. 12,000rpm，室温离心 1分钟。离心管中的液体即为基因组 DNA。根据用途，样品可以 4 或 -20 保存。 注 意 ： 重复步骤 11 12， 将洗脱液再次加入到吸附膜上，重新洗一次， 可以提高产率 10% 20%。

11、 八 . DNA浓度及纯度检测 得到的基 因组 DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在 OD260处有显著吸收峰， OD260值为 1相当于大约 50ug/ml双链 DNA、 40ug/ml单链 DNA。 OD260/OD280比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用本试剂盒提供的 Elution Buffer，而去使用去离子水，比值会偏低，因为 pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 Product Use Limitation: This product is developed, designed and sold exclusively for research purpose and in vitro use only.