实验四 酶的特性实验.doc

1、说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性） 必做，其他三个小实验选做（至少做一个） 写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！ 实验四 酶的特性实验 一、实验目的 酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了 解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力 的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制 剂对酶活力的影响 4 个小实验组成。 （一）酶的专一性 1、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作

2、用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还 原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏 试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧 化亚铜。 2、材料、仪器与试剂 (1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 (2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架； (3)试剂：2% 蔗糖溶液； 溶于 0.3% NaCl 的 0.5%淀粉溶液；班氏试剂。 3、实验操作 （1）稀释唾液的制备 唾液的获取 用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含 10-20ml 饮用水，轻 漱 2min 左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶

3、。 不同稀释度唾液的制备（用大试管） 本实验需制备 1：1、1：5、1：20、1：50、1：200 等五个不同浓度的稀释唾液。 举例说明：1:5 指的是稀释了 5 倍的唾液，制备方法为 1 份原液+4 份蒸馏水。 1：20 指的是稀释了 20 倍的唾液，制备方法为 1 份 1：5 的稀释液+3 分蒸馏水。 （2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表 1 添加顺序做实验，用小试管做实验） 表 1 唾液淀粉酶稀释度的确定 管号 1（1：1） 2（1：5） 3（1：20） 4（1：50） 5（1：200 ） 0.5%淀粉溶液（滴） 4 4 4 4 4 稀释唾液（ml ） 1 1 1 1 1 37恒温

4、水浴中保温 5 分钟 班氏试剂（ml ） 1 1 1 1 1 沸水浴 23 分钟 实验结果 （2）淀粉酶的专一性 表 2 淀粉酶专一性实验 （二）温度对酶活力的影响 管号 1 2 3 4 5 6 0.5%淀粉溶液（滴） 4 4 4 2%蔗糖溶液（滴） 4 4 4 最佳稀释度唾液（ ml） 1 1 煮沸过的最佳稀释度唾液 （ml ） 1 1 蒸馏水（ ml） 1 1 37恒温水浴中保温 5 分钟 班氏试剂（ml） 1 1 1 1 1 1 沸水浴 23 分钟 实验结果 1、实验原理 酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉 遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈

5、蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精 遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水 解混合物遇碘呈现的颜色来判断。 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴； （3）试剂：溶于 0.3% NaCl 的 0.5%淀粉溶液；KII2 碘溶液； 3、实验操作 取 4 支干燥的试管，编号后按下表加入试剂： 表 3 温度对酶活力影响实验加样顺序 管号 1 2 3 0.5%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 最佳稀释度唾液（ml） 1 1 煮沸过的稀释唾液 （ml） 1 实验结果 摇匀后，将 1、

6、3 号试管放入 37恒温水浴中，2 号试管放入冰水中。10 分钟后 1、2、3 管均取出（将 2 号内液体分两半） ，用 KII 2 溶液来检验 1、2、3 号管内淀粉被唾 液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将 2 号管剩下的一半溶液放入 37水浴中继续保 温 10 分钟后，再用 KII 2 液实验，记录实验结果。 （三）PH 对酶活力的影响 1、实验原理 酶的活力受环境 PH 值的影响极为显著。不同酶的最适 PH 不同。本实验观察 PH 对唾 液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适 PH 约为 6.8。 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：新配制的溶于 0.3%NaCl 的 0.5%淀粉溶液

7、（2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴 （3）试剂：PH 为 5.0、5.8、6.8、8.0 的缓冲溶液；KI I 2 碘溶液；PH 试纸 3、实验操作 表 4 PH 对酶活性的影响实验 PH 5 58 68 8.0 缓冲液（ml） 3 3 3 3 0.5%淀粉溶液（ml） 1 1 1 1 向第一个试管加入稀释唾液后，置于 37的恒温水浴；等待 1min 后 向第二个试管加入稀释唾液，置于 37的恒温水浴；依次类推！ 最佳稀释度的唾液 （ml） 1 1 1 1 检查淀粉水解程度 待向第四只试管加入唾液 2min 后，每隔 1 分钟从第 3 管中取出 1 滴 反应液于白瓷板上，加碘液检查

8、反应进行情况，直至反应液变为淡 棕黄色（颜色有点淡即可） 。即可从第一只试管依次添加碘液，时间 间隔也为 1min。 碘液(滴) 1 1 1 12 现象 为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明： 各取缓冲液 3ml，分别注入 4 支带有号码的试管，随后于各个试管中添加 0.5%淀粉溶 液 1ml 和最佳稀释度的唾液 1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为 1 分钟。将各试 管中物质混匀， ，并依次置于 37恒温水浴中保温。 待向第 4 管加入唾液 2ml 后，每隔 1 分钟由第 3 管取出一滴混合液，置于白瓷板上， 加 1 小滴 KI I2 溶液。添加 KII 2 溶液，检验淀粉的

9、水解程度。待混合变为淡棕黄色 （颜 色有点淡即可）后，向所有试管依次添加 1-2 滴 KII 2 溶液。添加滴 KII 2 溶液的时间间 隔，从第 1 管起，亦均为 1 分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析 pH 对唾液淀粉酶 活性的影响。 （四）唾液淀粉酶的活化及抑制 1、实验原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制 剂。 2、材料、仪器与试剂 （1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液 （2）仪器：试管及试管架；恒温水浴 （3）试剂：1% NaCl 溶液； 1% CuSO4 溶液；KII 2 碘溶液；1%Na 2SO4 溶液 3、实验操作（注意

10、本实验的淀粉溶液为无 NaCl 的淀粉溶液） 表 4 唾液淀粉酶活化及抑制实验 管号 1 2 3 4 0.5%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 最佳稀释度唾液 （ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 1% NaCl 溶液（ml） 0.5 1% CuSO4 溶液（ml） 0.5 1% Na2SO4 溶液 （ml） 0.5 蒸馏水（ml ） 0.5 37恒温水浴中保温 10 分钟 KII 2 溶液（滴） 23 23 23 23 现 象 三、注意事项 各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验， 以确定最佳稀释度。 四、思考题 1、何谓酶的最适 pH 和最适温度？ 2、说明底物浓度、酶浓度、温度和 pH 对酶反应速度的影响。 3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？