巴旦杏组织培养快速繁殖技术研究.doc

1、1 巴旦杏组织培养快速繁殖技术研究 陶秀东 吴春兰 王越铭 汪志军 王玉兰 Tao Xiu-dong Wu Chun-lan Wang Yue-ming Wang Zhi-jun Wang Yu- lan 新疆林科院经济林研究所 Institute of Economic Forestry, Xinjiang Forestry Academy Urumqi 830000 China 摘要：采用水培芽作为组织培养的外植体材料，并获得具根、茎、叶完 整的巴旦杏试管苗，其中增殖培养接种在 MS+6-BA1.0mg+NAA0.01mg/LR 的 培养基上，增殖倍数 3 倍左右。不定芽的生根培养接种在

2、MS+IBA0.3- 0.5mg/L 培养基上，或用 100ppm 的生长素 IBA、IAA 侵泡不定芽基部，接种 在不加激素的培养基上，两种生根培养法，生根率都达 95%以上。 关键词：巴旦杏；组织培养；快速繁殖； 巴旦杏又名扁桃（Amygdalus Communis l） ，属于蔷薇科、扁桃属的一 种中等落叶乔木，高 4-10 米。它是世界著名的四大干果之一，在市场上 售价很高，有着广阔的发展前景。新疆栽培巴旦杏历史悠久，是我国巴旦 杏栽培面积较大的地区，并且成为我区的特产。巴旦杏的繁殖主要以嫁接 和实生两种方法进行，采用嫁接方法进行繁殖能够保持品种的优良特性 ，遗传性状稳定，但可利用的优

3、良品种穗条少，繁殖速度慢，限制了巴旦 杏产业的发展。实生繁殖虽然数量大，但变异也较大。而组织培养能用较 少的材料，在短时间内批量繁殖出优良的巴旦杏品种苗木。为此我们从 1986 年开始对新疆经济树种的组织培养技术进行了研究，经过科技人员近 十年的努力取得了较好的研究结果。其中巴旦杏的研究被与会专家评为国 际先进水平，该项研究成果荣获 1996 年自治区科技进步三等奖。现将巴 旦杏的组织培养技术总结归纳如下。 2 一、 材料与方法： 2 月底-3 月初从巴旦杏良种繁育基地采集未发芽的优质品种条。采 回的种条经剪截处理后，在室内进行水培发芽。待芽长至 2 厘米左右时将 嫩芽采下，在超净工作台上进行

4、灭菌处理，先用 70%的酒精处理一次，再 用 0.1%的升汞灭菌，经无菌水冲洗后剪切接种在全量 MS 增殖培养基上。 当增殖培养基上的芽长至 1 厘米左右时，将其剪下接种至生根培养基中诱 导生根，或将试管苗基部用生长素浸泡后，接种到无激素的培养基中诱导 生根。生根的试管苗经自然光照锻炼后移栽到不同介质的苗床中，保温、 保湿 25 天左右成活。 二、结果与分析： （一） 外植体的取材与灭菌： 1、 外植体灭菌时间不同对成活率的影响： 通过试验发现外植体灭菌时间不同，成活也不同。这是因为外植体 是经水培后萌发的嫩芽，灭菌时间越长对芽造成的伤害就越大，成活率 低，反之时间过短芽上的细菌灭不干净，造成

5、接种后污染，成活率也低。 根据试验得出水培芽用升汞灭菌 4-6 分钟即可，超过这一时间芽的成活 率很低，当灭菌 8 分钟时芽全部死亡。 2、 取材季节不同外植体成活率对比研究： 组织培养前期外植体成活率的高与低，决定着试管苗扩繁的数量 及 生产周期的长短，因此外植体成活数量决定着试管苗的繁殖速度。试 验 3 中我们对不同季节取材外植体的成活情况进行了对比研究，如表 1 ： 表 1 不同季节取材外植体成活对比研究 Table 1 collected in different season Study on the survival contrast of explants 由表 1 可知冬季水培

6、芽成活率最高达 73%，其次是春季萌发芽 成活率 38%，夏季萌发芽最低 16%。这是因为水培芽未受室外杂菌 的严重侵染，芽本身含菌少，而且水培芽营养储藏丰富健壮，自身 抗性强，萌发能力强，生长快，因而成活率高。春季萌发的芽，因 环境温度不是很高，空气湿度较大，浮尘及细菌也少，相应对芽的 浸染程度降低，灭菌较容易，所以成活率也相对较高。夏季采取打 顶萌发取芽，因这时苗木处于生长旺盛期，植物体营养主要用于生 殖生长，取芽后萌发不好，又因此时环境温度很高，杂菌多，灭菌 非常困难，所以成活率低。 取材时间 collecting tine 外植体 explants 接种数 inoculate numb

7、er 成活数 survival number 成活率 % survival rate 2 月 28 日 February 28th 水培芽 buds cultured in water 30 22 73 5 月 8 日 May 8th 春季萌发芽 buds germinate in the spring 50 19 38 7 月 16 日 July 16th 夏季萌发芽 buds germinate in the summer 60 9 16 4 （二）不同激素浓度对试管苗增殖倍数的影响： 1、外植体的增殖诱导： 灭菌后的外植体接种在全量 MS 附加糖 3%，琼脂 0.45%，PH5.8，6-

8、BA0.5mg/L，NAA0.01mg/L 的培养基上，经 20 天左右 的培养外植体基部略有膨大，腋芽大多数未萌发，高 2 厘米左右， 这是可将外植体在超净台上剪切后接种到较高浓度的激素中，进行 继代扩大培养。 2、 诱导增殖培养基的筛选： 试验中我们对培养基中附加不同浓度激素，试管苗增殖情况进 行了研究对比，从而选出了适合巴旦杏增殖的培养基。 试验结果表明，激素浓度 6-BA 为 10.-1.5mg/L，NAA 为 0.01mg/L， 试管苗增殖倍数高，丛生芽萌发好；而激素浓度 6-BA 为 0.5mg/L, NAA 为 0.01mg/L，高生长明显，叶芽不萌发；激素浓度 6-BA 为 2

9、.0- 3.0mg/L，NAA 为 0.01mg/L，高生长明显降低，丛生芽萌发不好，繁殖 倍数降低，试管苗生长形态出现了变异。因此巴旦杏试管苗的增殖 培养不适宜在激素浓度较高的培养基中进行。 （三）试管苗的生根与移栽： 1、壮苗培养： 增芽试管苗在用于生根之前，要进行壮苗培养。即把试管苗从 高浓度激素中转入低浓度激素中培养。壮苗培养不仅可以加快芽的 高生长速度，还能起到降低或减少芽细胞中 6-BA 的含量，避免了因 芽中含有过高的激素而影响试管苗的生根及生根率。壮苗培养基选 5 用全量 MS、附加糖 3%，琼脂 0.45%，激素 6- BA0.5mg/L，NAA0.01mg/L，经 25 天

10、左右的培养剪下嫩芽用于生根。 2、 试管苗的生根培养： 2.1 培养基中的附加激素生根法： 试管苗经壮苗培养，当高生长至 2 厘米左右时，可将健壮的芽 剪下接种到生根培养基中，经 20 天左右的培养就可生根。生根培养 基采用 1/2MS，附加糖 3%，琼脂 0.45%，IBA 或 IAA0.5mg/L，生根率 达 95%以上。 2.2 培养基中不加激素生根法： 首先将生长激素 IAA 或 IAA 配制成 100pmm 的浓度，分装后灭 菌。然后在洁净台上剪取试管苗，取出摆放到灭过菌的 50 毫升的烧 杯中并加入无菌的生长素浸泡基部 30 分钟，浸泡结束把试管苗接种 到无激素的 1/2MS 培养

11、基中，统计结果生根率达 95%以上。 3、 试管苗的移栽： 生根试管苗移栽前，需移入温室进行自然光照锻炼一周，然后 取出试管苗洗净根部附着的培养基，移栽到基质中，盖上塑料薄膜 保温、保湿 30 天左右成活。 三、讨论与建议： 1、 外植体选择对试管苗生根的影响： 巴旦杏外植体取材部位不同，生根率及难易程度不一样。经试 验研究发现，一年生枝，根部萌生条，树茎萌生条，抪种一年生苗 易生根，生根率高。结果枝生根较难。 6 2、 试管苗的变异： 试管苗长期在高浓度的激素中进行增殖培养，易出现试管苗外 部形态特征的变异，如茎变成扁粗，矮壮，叶变小等，试管苗玻璃 化严重，繁殖能力及速度降低，所以巴旦杏试管苗不适宜在高浓度 的激素中培养繁殖。 3、 生根培养基中不加激素亦可获得高生根率： 试验表明培养基中加入激素和不加激素的生根率都达 95%以上。 因此建议巴旦杏生根培养不加激素，这样即可获得高生根率，又可 降低成本。