规范血液及骨髓标本细菌学标准操作规程.doc

1、标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 1 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 1. 目的 规范血液及骨髓标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围 血液及骨髓。 3. 标本 3.1 标本类型 血液及骨髓。 3.2 标本采集 3.2.1 采血时间 抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。 3.2.2 采血频率 对怀疑菌血症的成人患者，推荐同时在不同

2、部位采集 23 套（每套包括一 瓶需氧瓶，一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶）对感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采集； 婴幼儿患者，推荐同时在不同部位采集 2 套，可不做厌氧培养。 3.2.3 采血量 以无菌方法从患者肘静脉或股动脉采血。采血量以培养基的 1/10 为宜，成 人一次采血 10-20ml，儿童为 3-5ml。血液抽出后，立即以无菌操作注入血培养瓶，充 分混合后送检。 3.2.4 骨髓标本 用骨髓穿刺针从髂骨采集 1-2ml,立即以无菌操作注入血培养瓶，由于骨髓 标本量少可选择小儿需氧瓶及厌氧瓶。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 血培养瓶破裂或有明显污染。 3.3.2 培养瓶标识与化验申请

3、单不符。 3.3.3 用过期的培养瓶采集标本，采血量不足等。 3.3.4 对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放冰箱。冬季血培养瓶在 送检过程应采取一定的保暖措施。 4. 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、沙保罗平 板相关生化试剂等。 4.2 BACT 9050 全自动血培养系统、 ATB Expression 鉴定及药敏分析仪。成人需氧血培养 瓶，厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、TDR 系统鉴定卡及药敏板。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、

4、CO 2 培养、生物安全柜等。 4.4 试剂的有效期和使用参照试剂说明书。 5. 细菌鉴定和药敏质控 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 2 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 参见微生物组室内质量的控制程序 。 6. 检验步骤 接收标本后，立即用 Lis 系统签收对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记联系 电话等病人信息。 6.1 自动化培养 6.1.1 置

5、全自动血培养仪中。当标本有菌生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器 抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医生报告，同时转种血琼 脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置 35、5% CO 2 培 养箱培养 1824h。若涂片为酵母样真菌时，转种到念珠菌培养基上。从琼脂平板上挑 取菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性菌和革兰阴性菌分别选用相应卡 片上机进行细菌鉴定和药敏试验或者做 K-B 法药敏试验（具体操作见药物敏感性试 验标准操作规程 ） 。 6.1.2 仪器培养为阴性，报阴性后卸下血培养瓶，可报阴性结果。 6.2 手工培养 6.2.1 将血培

6、养瓶置 35孵育箱，经 1820 h 孵育在血琼脂平板或巧克力平板上盲目转种一 次。 6.2.2 盲目传种后，培养瓶继续孵育至第 5 日，每日观察一次有无菌生长，并摇匀继续培养， 下列几种情况提示有细菌生长。见下表 1。 表 1 培养瓶中有细菌生长时的不同反应 反应 菌种 浑浊并有凝块 金黄色葡萄球菌 均匀浑浊，发酵葡萄糖产气 大多为革兰阴性菌 微浑浊，有绿色变化 肺炎链球菌 表面有菌膜，培养液清晰，底层溶血 枯草杆菌 表面有菌膜，膜下呈绿色浑浊 铜绿假单胞菌 血细胞层上面出现颗粒状生长，有自上而下的溶血 溶血性链球菌 厌氧培养瓶有变化，而需氧培养瓶无细菌生长 可能为厌氧菌 根据肉眼观察，对有

7、细菌生长迹象，取菌悬液涂片作革兰染色，同时分离培养，接种 需氧血琼脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置 35、5%CO 2 培养箱培养 1824h。次日纯培养再进行鉴定及药敏试验。 7. 操作流程 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 3 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 8. 结果报告 8.1 阳性结果报告 报告通常分为三级： 8.1.1

8、 一级报告 阳性报警血培养瓶应进行涂片革兰染色，将涂片结果电话（或其他方式）通 知临床，同时记录报告的日期、时间、内容以及接收报告人的姓名和工号。血培养阳性应 列为危急值。 8.1.2 二级报告 报告直接药敏试验结果。 直接药敏试验，将血培养阳性标本进行革兰染色，如涂片找到细菌，根据革兰染色结果选 血液、骨髓 需氧培养 血培养仪报警，挑取培养物 三级报告（最终报告） 涂片、染色 置血培养仪瓶中 厌氧培养 细菌种类 直接药敏 一级报告 二级报告 转种平板 35 培养 1824 h 观察菌落特征 及涂片、染色 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：H

9、NZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 4 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 择药敏所用培养基（Muller-Hinton 或含 5%羊血 Muller-Hinton 琼脂平板） ，取阳性血培养标本 约 0.2ml，用无菌棉签均匀涂布于琼脂表面，根据革兰染色结果选择所用抗菌药物的纸片，如 镜检见革兰阴性杆菌，选择肠杆菌科常用的抗菌药物纸片；若为革兰阳性球菌，成对排列，选 择葡萄球菌用的抗菌药物纸片。然后置 35，孵育

10、1824h 读取初步药敏结果。纯培养再进行 菌株鉴定和药敏试验，发最终报告。 注：最终结果如与初步报告不符，应及时与临床沟通，并在书面最终报告注明变更内容。 8.1.3 三级报告 报告细菌种属、药敏试验、结果评价和建议。 8.2 阴性结果报告 血培养 72h 未见细菌生长，应通知临床医师，以便作相应处理，但培养瓶 要继续培养至第 5 日，方可发出阴性报告。如果发现有菌生长，可补发报告。 8.3 对发出报告进行销号，并作好菌名或无菌及报告日期登记。 8.4 传染病（伤害沙门菌）报医务部或防保科。 8.5 传染病菌种保存(伤寒沙门菌 )交疾病控制中心复核。 9. 注意事项 9.1 抽血后无需更换针

11、头即可注入血瓶中。 9.2 抽血前即应贴好标签，标签不能贴到条形码。 9.3 若不能立即送至实验室，应置于 35温箱或室温，绝不可放置冰箱。 9.4 有自动血培养仪的实验室，应及时处理阳性报警标本。 9.5 如不同部位采集的两瓶血培养瓶出现一瓶阳性一瓶阴性，或者出现两瓶均为阳性，检测结 果均为凝固酶阴性葡萄球菌， 这两种情况都应该向临床报告和沟通。 10. 临床意义 引起败血症的多为耐药性金黄色葡萄球菌、某些革兰阴性杆菌及部分球菌。疖、痈、脓 肿和化脓性骨髓炎继发的败血症主要由金黄色葡萄球菌和 溶血链球菌引起，尿道、胆道、 胃肠道炎症和黏膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌最常见，烧伤后铜绿假单胞菌

12、和金黄色葡 萄球菌多见。伤寒和副伤寒于病程第 12w 做血液细菌培养，伤寒和副伤寒沙门菌的检出率 可达 80%90%。 11. 危急值报告 仪器报警阳性标本直接涂片、革兰染色，确定细菌种类，应立即向临床报告细菌涂片结 果。 参考文献 1 CNAS-GL23医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南, 2013 2 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理

13、小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 5 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 3 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第 3 版 .南京: 东南大学出版社。 4 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 2007 5 徐英春, 倪语星, 王金良, 等主编. 血培养操作规范. 上海: 上海科学技术出版社, 2002 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601

14、 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 6 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 血液操作规程 1概述 血液是临床微生物室所接收培养的重要标本，在大多数病人血液中出现细菌为菌血症。 原发性菌血症来自机体部位污染细菌，如粘膜的细菌入血，可能经历亚临床结果，继而出 现临床的菌血症。败血症包含菌血症，意指带有临床迹象和症状，如发热、寒战和心动过 速。败血症休克提示败血症伴有血压过低，严重败血症是以败血症休克伴有器官或全身衰 竭特点，20%-40% 死亡率。继发性菌血症，如

15、肺炎原始部位的感染播散菌血症。 2标本采集 2.1 一般情况下，在病人发热高峰时，采集血液标本。对持续性菌血症可不考虑采血时间， 而某些间歇性菌血症，应在病人体温上升期采血。采血时间原则上应选择在抗菌药物 应用前，对已用药而不能中止用药的病人，应在下次用药前采集。用药前 24 小时内采 集 34 次血液标本，可使细菌检出率高达 90。 2.2 一般在肘静脉采集血液，其次是股动脉。采血部位的局部皮肤应彻底消毒，通常用碘酒 涂布消毒，干后用 75酒精擦拭，消毒时应以穿刺部位为中心逐渐向外延伸消毒。 2.3 系上止血带，抽取 5-10ml 血液，若为婴儿或小孩则只抽取 2-5ml 血液。 2.4 将

16、液注入 BD 血培养瓶，婴儿或小孩则用小儿专用 BD 血培养瓶。 2.5 疑似分枝杆菌感染或霉菌感染之病人则抽取血液 10ml，注入血液于专用结核培养瓶或 真菌培养瓶。 3标本处理及注意事项 3.1 每一发烧病人抽血次数以每次抽二瓶为原则，同时左右肘臂各抽一瓶。如果病患情况 危急，同时亦可采集身体不同部位血液做两套培养。但是不可由血管导管抽取血液样 本。 3.2 抽取血液后，不需要更换针头即可注入血瓶中，以避免针扎后污染率提高。 3.3 抽血前，血瓶应先将病患标签贴好，病患标签不可贴在血液培养瓶的条码上及玻璃上。 3.4 注入标本的血培养瓶务必立即送至微生物室。如因某种原因不能立即送检时，应放

17、置 室温，切勿存放冰箱。微生物室收到血培养瓶后应立即登记后放入培养箱。 3.5 两种以上细菌或细菌和真菌同时或交替感染引起的败血症，虽其中有一种主要致病菌， 但必须同时报告。对检出的细菌肯定是血中的病原菌的标准是： 3.5.1 两次血培养结果为同一细菌。 3.5.2 患者 23 周后血中抗体滴度明显升高，应作败血症的病原菌处理。 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 7 页 共 63 页 湖南省肿

18、瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 3.6 对于血培养中出现的细菌，如果暂时鉴定不了或罕见细菌，可作药物敏感试验，将结 果报告临床医生。同时将菌种报上一级单位继续鉴定。 4检验步骤.(血液培养仪 BACTEC 9050 操作规程) 4.1 放入培养瓶 4.2 开门前按复位键，打开机箱门。 4.3 按放瓶键 4.4 拿瓶子上的条形码在机器右下角发红光处扫描，听到叫声后扫描完毕。 4.5 根据屏幕显示的位置放入培养瓶。 4.6 按 OK 键 4.7 按关门键退出，关门。 4.8 取出阴/阳性瓶 4.9 开机前按复位键，开门。 4.10按阴性瓶键/阳性瓶键指定位置选择取出阴/阳性瓶 4.11

19、将阴/阳性瓶上的条形码扫描。 4.12按关门键退出，关门。 4.13若有阳性瓶，仪器将会自动报警，按以上方法取出阳性瓶，直接涂片镜检，并转种相 关培养基。 5分级报告 5.1 紧急口头（电话）报告：血培养仪在血液出现阳性时会自动报警，接到报警，将仪器 上培育瓶取出，立即进行转种血平板；涂片革兰染色；镜检。并在最短时间内将结果 向临床主管医生进行紧急口头（电话）报告。报告内容应包含以下内容： 5.1.1报告者全名（或工号） ； 5.1.2报告的时间（无论成功或不成功） ； 5.1.3所联系医生的全名（或工号） ； 5.1.4报告镜检结果,并强调其紧急价值； 5.1.5确认临床医生收到报告并复述结

20、果。 5.2 做直接药敏试验，第二天报告结果。 5.3 按涂片、染色、纯分血平板菌落形态，选择相应的方法作进一步鉴定及药敏试验。 阳性培养报告最终鉴定结果、最终药敏结果。 6其他报告和记录 如血液培养仪没有报警，每天必须观察一次，作好记录。五天阴性者，可报告：血液 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 8 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 培养五天无细菌生长。

21、6.1 标本被拒收时，应立即通知临床医生，立即重新采血，并记录在案。 6.2 最终结果与紧急报告结果不符，需变更时，应立即与临床医生沟通，做紧急口头报告。 同时必须在书面报告上提供正确的结果，同时注明变更的内容。 6.3 其他需要临床医生注意的事项如：本次采血量不足；标本转运时间过长；标本采集份 数不够等信息。 7检验结果的判断与分析 7.1 急性败血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎、急性未处理的细菌性肺炎和肾盂肾炎，应该 在治疗前从不同部位采集血液标本，分别接种于需氧、厌氧血培养瓶内。 7.2 可疑为心内膜炎，体温不太高的持续菌血症，应增加采血次数。 7.3 急性病例：治疗前在 1-3h 内在 3

22、 个不同部位取 3 份标本。 7.4 亚急性病例：第 1 天取 3 个标本，24h 后，若全阴性再取 3 个标本。 7.5 若已用了抗生素的心内膜炎患者，连续 3 天每天取 2 个标本。 7.6 已用抗生素治疗的其他患者，在 48h 内取 6 个血标本，每次在使用抗生素前采标本。 8血液培养中常见的病原菌 革兰阳性菌: 革兰阴性菌: 葡萄球菌属 脑膜炎奈瑟菌 链球菌属 卡他莫拉菌 肠球菌属 伤寒及副伤寒沙门菌 厌氧链球菌 肠杆菌科细菌 李斯特菌属（产单核） 假单胞菌属 产气荚膜梭菌 不动杆菌属 丙酸杆菌 流感嗜血杆菌 念珠菌 弯曲菌属 拟杆菌属 梭杆菌属 9操作流程 标题：血液及骨髓标本细菌学

23、检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP- WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 9 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 血液、骨髓 （需氧及厌氧） 涂片、染色、镜检 分离培养 直接药敏试验 需氧培养 真菌培养 厌氧培养 35 及 CO 环境培养 （血琼脂平板 46h （血琼脂平板和 等分离培养基） 巧克力琼脂平板） 初步报告 菌落观察 涂片、革兰染色、镜检 纯培养 血清学检查 确定报告 生化反应试验、药敏试 验 最终报告 参考文献

24、 全国临床检验操作规程 （第 3 版） BACT9050 血培养仪使用说书 标题：脑脊液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-602 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 10 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 1. 目的 规范脑脊液标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围 脑脊液培养。 3. 标本 3.1 标本类型 脑脊液。 3.2 标本采集 由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液 2ml3ml

25、，盛于无菌容器中送检。脑膜 炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。因 此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 标本标识与化验申请单不符。 3.3.2 标本未用无菌试管留取。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，放置时间不应超过 2h，切勿放冰 箱，否则影响检出率。 4. 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试 剂等。 4.2 药敏纸片、ATB 板条/TDR 系统鉴定卡及药敏板等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接

26、种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO 2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控 参见质量管理。 6. 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查 6.1.1 一般细菌涂片检查 外观混浊或脓样脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应 3000r/min 10min15min 离心后取沉淀物涂片、革兰染色、镜检。根据染色及形态特征， 常可初步提示细菌的种类。 6.1.2 新生隐球菌涂片检查 取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉 淀物接种于沙氏培养基上，置于 35培养 2 日5 日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出 报告。必要时可作生化反应进一步鉴定。

27、 6.2 分离培养 标题：脑脊液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-602 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 11 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 6.2.1 用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力 琼脂平板和中国蓝平板，置于 5%10%CO2 环境中 35培养 1824 h，观察细菌生长情况， 根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。 7. 操作流程 8. 结果

28、报告 无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌， 报告菌名和药敏结果。经培养 48h，仍无细菌生长者，报告“ 培养 2 日无细菌生长” 。 9. 注意事项 9.1 抽取的脑脊液分置于无菌试管中，迅速送至实验室，病毒、霉菌、分支杆菌培养样本置 4 保存待送。 9.2 流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟菌对寒冷和干燥均很敏感，在体外容易 自溶，故不论是涂片镜检还是进行培养均应及时送检。 10. 临床意义 正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化 脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。5 岁以下儿童细菌性脑

29、膜炎的主要致 病菌是流感嗜血杆菌，结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85%脑脓肿患者脑脊液培养可检出厌 氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。 11. 危急值报告 直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病 报告。 脑脊液 血琼脂平板、巧克 力平板、中国蓝平 板 5% CO2 35 培 养 18-24h 离心 观察菌落特征 及涂片、染色 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 发出报告 沉淀物涂 片、染色 标题：脑脊液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-602 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管

30、理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 12 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 参考文献 1 CNAS-GL23医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南, 2013 2 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007 3 叶应妩, 王毓三, 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第 3 版 .南京: 东南大学出版社, 2006 4 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press,

31、 2007 5 ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则, 2007 标题：呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-603 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 13 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 1. 目的 规范呼吸道标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围 呼吸道标本培养和涂片检查。 3. 标本 3.1 标本类型 痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺

32、等。 3.2 标本采集 3.2.1 采集时间 以晨痰为好；支气管扩张症患者，清晨起床后进行体位引流，可采集 大量痰标本。 3.2.2 自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐入无菌 容器内。 3.2.3 气管镜下采集法 在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。 3.2.4 气管穿刺法 在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。 3.2.5 棉拭采集法 用无菌棉拭子轻轻擦拭患者鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送 检。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。 3.3.2 痰标本呈水样或唾液样。 3.3.2 痰涂片白细胞25

33、低倍视野。 3.3.4 标本容器溢漏，无瓶盖。 3.3.5 痰标本留取放置时间太长，超过 2h。 3.3.6 未用指定的无菌容器留痰作细菌培养。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过 2h。 4. 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3% 触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化 试剂等。 4.2 药敏纸片、ATB 板条 TDR 系统鉴定卡及药敏板等，有效期及储存条件参见试剂说明 书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO 2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控：参见质量管理。 6. 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

34、 标题：呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-603 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 14 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 6.1 肉眼观察 包括颜色、黏度、有无血丝或脓。 6.2 涂片检查 可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白 细胞和上皮细胞数目多少来评定，见下表 5-30。并可初步判定是否有病原菌存在。 表 5-30 痰标本镜下分类 分级 白细胞 （个） 上皮细胞 （个） A

35、 25 25 25 25 10 5 CFU /ml，提示感 染（膀胱炎、肾盂肾炎、肾或膀胱结核等） 。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、肠 球菌等。 10. 危急值报告 如查出抗酸杆菌阳性，则应及时向临床报告并报作传染病报告。 参考文献 1 CNAS-GL23医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用指南, 2008 2 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海: 上海科学技术出版社, 2007 3 叶应妩, 王毓三 , 申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第 3 版 .南京: 东南大学出版社, 2006 4 Murray PR. Manual of Clini

36、cal Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 2007 5 ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则, 2007 操作规程： 发出报告 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-605 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 29 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 1概述 尿液的细菌学检查（中段尿培养加菌落计数）对于泌尿道感染的诊断有重要价值。正常 尿液

37、是无菌的，而外尿道有正常菌群寄生，标本的采集必须无菌操作。另外，细菌培养必须 结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数10 5cfu/ml,提示泌 尿道感染，膀胱炎、肾盂肾炎等。 2标本采集 一般原则：先用水和中性肥皂清洁阴部，特别是会阴部应前后擦拭干净（男性则清洁 阴茎前端，特别是包皮附近） 。将阴唇用手指向两旁拨开，先排弃前段尿液。 2.1 在应用抗菌药物前采集晨起第一次尿液，不加防腐剂及消毒剂。 2.2 以无菌容器收集，小心打开容器盖子后，接取中段尿液 5ml10ml。 2.3 盖上容器盖子,送至微生物实验室。若不能马上送检或检验人员不能立刻接种于适当培 养基时，

38、应将样本置于冰箱（48）内保存，最好不要超过 2 小时。若培养基长出 多种细菌混合生长，可能由于采样本时受到污染所致，应退回重新采集。 2.4 沙门氏菌感染：病后 2 周采集。 2.5 结核分枝杆菌感染：留取晨尿或 24 小时尿沉渣部分 10ml15ml 送检。若培养，患者 应停药 12 天后采集尿液送检。 3标本拒收标准 3.1 申请单项目与标本不符。 3.2 尿液标本不是无菌容器留取。 3.3 送标本时间已明显拖延。 4检验步骤 留检的尿液标本应立即送检，否则尿中细菌迅速繁殖，使菌落计数不可靠而影响诊断。 实验室接到标本后，须立即进行涂片和培养。 4.1 涂片检查： 4.1.1 一般细菌涂

39、片：以无菌操作吸取尿 5-10ml，放入无菌试管内，经 3 000r/min 离心 15min 后，倾去上清液，取其沉淀，制成涂片，革兰染色，镜检。如发现有革兰阴性 或阳性细菌，即可做出报告。 4.1.2 淋球菌涂片：尿标本如(1)处理后另制一张涂片以革兰氏染色，镜检。如查见细菌并为 革兰阴性双球菌，肾形，存在于细胞内或细胞外，经培养证实后方可做出报告。 4.1.3 念珠菌涂片：将尿液离心沉淀后，取沉淀物放于洁净玻片上，覆以盖玻片，略加压力， 使成薄片，直接用高倍镜观察。发现有卵圆形的芽生孢子和管状的假菌丝，且革兰染 色为阳性，就可报告检出念珠菌。 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编

40、号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-605 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 30 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 4.2 一般细菌培养： 4.2.1 尿液定量培养 用定量接种环取尿液 10l，垂直划线在血平板、中国蓝培养基上，3518-24 小时培 养，计数生长的菌落数，乘以 100，求出每 ml 的细菌数。根据菌落形态特征和涂片染色结 果，选择相应的方法作进一步鉴定。 4.2.2 对怀疑有苛养菌感染者应加种巧克力平板，置 5%CO2 环境中培养

41、 48 小时。 4.3 特殊菌培养 4.3.1 淋病奈瑟菌培养：接到标本后立即接种于巧克力平板，置 35，5%-10%CO2 环境下 培养 24h，若无菌生长，则继续培养至 48h。若有小而隆起、湿润、透明的菌落，涂片 镜检为革兰阴性肾形双球菌，则按淋病奈瑟进行鉴定。 4.3.2 厌氧菌培养：必须用膀胱穿刺尿进行培养，接种厌氧琼脂平板。 5检验结果的判断与分析 5.1 尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数及药敏结果。 5.2 阳性结果报告：XXX 细菌生长，菌落计数10 5cfu/ml 及药敏结果。混合菌感染：XXX 细菌生长，菌落计数105cfu/ml(阴性杆菌) 及药敏结果。XXX

42、 细菌生长，菌落计数 104cfu/ml（阳性球菌）及药敏结果。 5.3 阴性报告结果：48 小时培养无细菌生长。 6尿液培养常见病原菌 尿培养常见病原菌 革兰阳性菌 革兰阴性菌 葡萄球菌属 淋病奈瑟菌 链球菌属 大肠埃希菌属 肠球菌属 变形杆菌属 结核分枝杆菌 克雷伯菌属 真菌 肠杆菌属 沙门菌属 沙雷菌属 假单胞菌属等 7操作流程 标题：尿液标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-605 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 31 页 共 63 页 湖南省

43、肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 尿液 涂片 定量培养 分离培养 淋病奈瑟菌培养 直 离 计数菌落 血琼脂平板 专用巧克力琼脂平板 接 心 中国蓝琼脂 涂 沉 CO2 5%-10%3518-24h 片 淀 35,18-24h 、 涂 革 片 兰 、 染 特 观察菌落 色 殊 、 细 涂片、染色 鉴定 药物敏感性 镜 菌 镜 检 试验 试 验 检 检 查 报告 8参考文献 全国临床检验操作规程 （第 3 版） 标题：生殖道标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-606 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组

44、 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 32 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 1. 目的 规范生殖道标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2. 适用范围 生殖道标本培养或涂片检查。 3. 标本 3.1 标本类型 生殖道标本。 3.2 标本采集 3.2.1 女性 由临床医师用无菌棉拭采集阴道、宫颈分泌物。怀疑盆腔厌氧菌感染时，由医 师用注射器从阴道后穹窿处穿刺抽取标本，立即床边接种于厌氧菌平板。 3.2.2 男性 翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，清水冲洗，采集尿道口分泌物。采集前列腺 液时，先冲洗尿道和膀胱，用手指从肛门内按摩前列腺

45、，使前列腺液溢出。 3.2.3 梅毒螺旋体标本 从外生殖器的硬下疳处蘸取渗出液，置于载玻片上，加盖玻片后立 即送检。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 申请单项目与标本不符。 3.3.2 标本不是用无菌容器留取. 4. 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试 剂等。 4.2 全自动血培养系统、ATB Expression 鉴定系统和 TDR 系统鉴定卡及药敏板、药敏纸片、 ATB 板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO 2 培养箱等。 5. 细菌鉴定和药敏质控 参见质量管理。

46、 6. 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查 6.1.1 革兰染色镜检 观察有无细菌，以及细菌形态和染色性，尤其注意观察有无白细胞内 外的革兰阴性双球菌（淋病奈瑟菌） ；阴道分泌物中有无覆盖大量革兰阴性菌的上皮细 胞（线索细胞，提示可能有阴道加特纳菌感染） 。 6.2 分离培养 6.2.1 一般细菌培养 接种血琼脂平板和中国蓝琼脂平板，置 5%10%CO2 环境条件下， 35 培养 1824 h。 标题：生殖道标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-606 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量

47、管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 33 页 共 63 页 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 6.2.2 淋病奈瑟菌培养 接种于 GC 琼脂平板，置 5%10CO 2 条件下，35 培养 1824 h，观察有无较小、灰白色、露滴状菌落形成，进一步生化鉴定。6.2.3 阴道加特纳菌培 养 接种于含 5羊血琼脂平板，在 510CO2 环境培养 48h，观察有无形成针尖 大小（0.30.5mm） 、圆形、光滑、不透明、不溶血（在人血或兔血琼脂平板上可出现 溶血）的菌落。 7. 操作流程 8. 结果报告 报告菌名和抗菌药物药敏试验结果。 9. 注意事项

48、取阴道分泌物之前避免性生活、阴道冲洗和用药。 10. 临床意义 正常的内生殖道是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄 生，如尿道口常见有葡萄球菌、类白喉棒杆菌和非结核分枝杆菌等，阴道常见有乳杆菌、 双歧杆菌、消化球菌等。查见病原菌提示有细菌感染，如急、慢性前列腺炎，睾丸炎，精 生殖道标本 血琼脂平板、中 国蓝平板 35 培养 1824 h 需氧培养 观察菌落特征 及涂片、染色 仪器或手工细菌 鉴定及药敏试验 淋球菌平板 35 5%10% CO2 培养 1824 涂片染色 厌氧培养 厌氧血琼脂平板 35厌氧环境培养 2448 h 耐氧试验 厌氧血 平板生长 发出报告 标题：生殖道标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB- SOP-WSW-606 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国