1、脑 脊 液 蛋 白 定 性 试 验 （ 潘 氏 法 ） 1.实 验 原 理 脑 脊 液 中 球 蛋 白 与 苯 酚 结 合 ， 可 形 成 不 溶 性 蛋 白 盐 而 下 沉 ， 产 生 白 色 浑 浊 或 沉 淀 。 2. 标 本 采 集 ： 2.1 标 本 种 类 ： 脑 脊 液 ， 由 临 床 医 师 进 行 腰 椎 穿 刺 采 集 ， 必 要 时 可 从 小 脑 延 脑 池 或 侧 脑 室 穿 刺 获 得 。 2.2 标 本 要 求 ： 将 脑 脊 液 分 别 收 集 于 3 个 无 菌 试 管 中 ， 第 一 管 作 细 菌 培 养 ， 第 二 管 作 化 学 分 析 和 免 疫 学
2、 检 查 ， 第 三 管 作 一 般 性 状 及 显 微 镜 检 查 。 每 管 收 集 1-2 毫 升 。 2.3 遇 高 蛋 白 标 本 时 可 采 用 EDTA K2 抗 凝 。 3. 标 本 储 存 ： 立 即 送 检 。 4. 标 本 运 输 ： 室 温 运 输 。 5. 标 本 拒 收 标 准 ： 污 染 ， 久 置 标 本 。 6 试 剂 ： 5%苯 酚 溶 液 ： 取 纯 苯 酚 25ml,加 蒸 馏 水 至 500ml， 用 力 振 摇 ， 置 37 温 箱 内 1-2 天 ， 待 完 全 溶 解 后 ， 置 棕 色 瓶 内 保 存 。 7. 操 作 步 骤 ： 取 潘 氏
3、试 剂 2-3ml 于 小 试 管 内 ， 用 毛 细 滴 管 滴 入 脑 脊 液 1-2 滴 ， 衬 以 黑 背 景 ， 立 即 观 察 结 果 。 8.结 果 判 断 阴 性 ： 清 晰 透 明 ， 不 显 雾 状 极 弱 阳 性 （ ） ： 微 呈 白 雾 状 ， 在 黑 色 背 景 下 才 能 看 到 弱 阳 性 （ +） ： 灰 白 色 云 雾 状 阳 性 （ +） ： 白 色 浑 浊 强 阳 性 （ 3+） ： 白 色 浓 絮 状 沉 淀 最 强 阳 性 （ 4+） ： 白 色 凝 块 9.质 量 控 制 10. 临 床 意 义 10.1 脑 脊 液 蛋 白 质 含 量 增 加 ，
4、 提 示 患 者 血 脑 屏 障 受 破 坏 ， 常 见 于 脑 、 脊 髓 及 脑 膜 的 炎 症 、 肿 瘤 、 出 血 等 以 及 脑 软 化 、 脑 退 化 性 疾 病 、 神 经 根 病 变 和 引 起 脑 脊 液 循 环 梗 阻 的 疾 病 等 ， 当 脑 脊 液 中 蛋 白 质 在 10g/L 以 上 时 ， 流 出 后 呈 黄 色 胶 冻 状 凝 固 ， 而 且 还 有 蛋 白 -细 胞 分 离 现 象 ， 临 床 上 称 为 Froin 综 合 征 ， 是 蛛 网 膜 下 腔 梗 阻 性 脑 脊 液 的 特 征 。 10.2 含 血 的 脑 脊 液 可 使 蛋 白 质 含 量
5、 增 加 ， 为 鉴 别 原 来 有 无 蛋 白 质 增 加 ， 可 用 每 微 升 1 万 个 红 细 胞 的 相 当 增 加 蛋 白 质 80mg/L 来 推 算 ， 最 后 用 含 血 的 脑 脊 液 中 实 测 的 蛋 白 质 量 减 去 出 血 时 从 血 中 带 入 的 蛋 白 质 量 由 含 红 细 胞 数 推 算 成 的 蛋 白 质 量 ， 即 为 原 来 脑 脊 液 的 蛋 白 质 含 量 。 常 见 中 枢 神 经 系 统 疾 病 的 脑 脊 液 检 查 特 点 压力 （kpa ） 外观 蛋白质定 性定量 g/L 葡萄糖 （mmol/L ） 氯化物 (mmol/L) 细胞总
6、数及 分类 细菌 正常人 卧位 0.78- 1.67 无色透 明 - 0.2-0.4 2.5-4.4 120-130 (0- 10)106/L 多为淋巴细 胞 无 化脓性 脑膜炎 混浊有 凝块 2+以 上 显著增加， 以中性粒细 胞为主 可发现 致病菌 结核性 脑膜炎 毛玻璃 样混浊 有薄膜 形成 +2+ 增加，早期 以中性粒细 胞为主，其 后以淋巴细 胞为主 找到抗 酸性杆 菌或结 核培养 阳性 病毒性 脑膜炎 清晰或 微混 + 正常 正常 增加以淋巴 细胞为主 无 新型隐 球菌脑 膜炎 清晰或 微混 增加以淋巴 细胞为主 新型隐 球菌 脑室及 珠网膜 下腔出 血脑瘤 血性 +2+ 正常 增
7、加以红细 胞为主 无 脑脊髓 梅毒 清晰 + 正常 正常 增加以淋巴 细胞为主 无 11. 方 法 学 评 价 ： 潘 氏 试 验 所 需 标 本 量 少 ， 灵 敏 度 高 ， 试 剂 易 得 ， 操 作 简 便 ， 结 果 易 于 观 察 ， 其 沉 淀 多 少 与 蛋 白 质 含 量 成 正 经 比 ， 部 分 正 常 脑 脊 液 亦 可 出 现 极 弱 阳 性 结 果 。 Ross Jine 试 验 主 要 沉 淀 的 是 球 蛋 白 ， 但 敏 感 性 较 弱 ， NoneApett 试 验 可 分 别 检 测 球 蛋 白 和 白 蛋 白 ， 但 操 作 较 繁 ， 极 少 选 用
8、。 12. 变 异 的 潜 在 来 源 12.1 取 材 不 当 。 12.2 涂 片 过 厚 或 过 薄 ， 影 响 形 态 观 察 。 13 操 作 注 意 事 项 ： 13.1 取 材 后 ， 必 须 立 即 涂 片 。 13.2 推 好 的 血 膜 片 应 在 空 气 中 摇 动 ， 使 其 尽 快 干 燥 ， 以 免 细 胞 变 形 。 天 气 寒 冷 或 潮 湿 时 ， 应 于 37 温 箱 中 保 温 促 干 ， 以 免 细 胞 变 形 缩 小 。 13.3 根 据 血 膜 厚 薄 ， 细 胞 量 多 少 及 室 内 温 度 等 把 握 好 染 色 时 间 ， 使 染 色 效 果 满 意 。 13.4 镜 检 时 循 序 检 查 ， 必 要 时 用 油 镜 确 认 ； 并 注 意 整 体 情 况 。 14. 参 考 文 献 ： 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 医 政 司 编 。 全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 （ 第 二 版 ） 17-18 页 。
