葡萄糖(GLU) 葡萄糖氧化酶终点法.doc

1、项 目 葡萄糖（GLU） 方 法 葡萄糖氧化酶终点法 目 录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录 A: 参数 1. 检测原理 在葡萄糖氧化酶的作用下，-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在 下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式

2、染料。此染料在 500nm 处有最大吸收峰，其吸光度值与 葡萄糖含量成正比。 GOD -D-葡萄糖 + H2O + O2 - H2O2 + D-葡萄糖酸 POD H2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 - 醌亚胺（红色）+ H2O 2标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹 12h，不饮酒 24h 后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用 影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节 性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前 24 小时内不做剧烈运动。 有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障

3、碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监 测血糖，避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。 糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。糖皮质激素可通过 三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2 ）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作 用，因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或 配合降糖药物应用。 甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元 分解及糖异生，使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应

4、慎重给药。 肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制 剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。 利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使 糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药 2-3 个月后，停药能自行恢复。 避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖 尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。 异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响 糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应

5、措施。当糖尿病合并肺结核时，异烟 肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。 其它：如烟酸及其衍生物、吩噻嗪类药物、生长素、促肾上腺皮质激素、双香豆素、去甲基麻黄碱等 药物，均有增高血糖浓度的作用，使用时应注意监测血糖，避免引起高血糖或糖尿。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度 。在采血前至少应静坐 5 分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过 1 分钟，穿刺成功后立即松 开止血带。 2.3 抗凝剂： 血浆使用 EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置 30min45m

6、in 后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测 完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖 2-8保存。 3试剂 3.1 试剂： 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司 GLU 试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下： 组 成 浓 度 磷酸盐缓冲液 0.1mmol/L PH=7.5 葡萄糖氧化酶（GOD） 15u/mL 过氧化物酶 （POD） 1.5U/mL 变旋酶 2.0U/mL 4-氨基安替比林 0.25mmol/L 苯酚 0.75mmol/L 稳定剂 3.2：校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的 40 项校准血清。 校准频次： 空白定标：每日需做试剂空白定标。 全

7、点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性： 原包装试剂储存在 2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存 30 天。 试剂储存在 18-22稳定 28 天，试剂应避免污染。试剂颜色为无色至浅粉色，当试剂变色或者在 54 6nm 的吸光度高于 0.15ABS，按照试剂失效处理。 多项校准血清在 2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20 保存，可稳定一个月，只可冻融一次， 避免反复冻融。参见校准血清说明书。 试剂盒配备的水标准液在 2-8储存至标签所示失效日期，开瓶后 2-8储存避免污染，可稳定 2 个 月。 4仪器

8、 KONELAB 30 型号仪器。 性能：波长 500nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到 0.001ABS 以上。 5操作 样品为血清或肝素/EDTA 抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录 A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6计算 A 测定 C = C0 A 标准 式中：c 测定葡萄糖浓度，g/L； A 测定 标本管吸光度； A 标准 标准管吸光度； CO 校准血清葡萄糖浓度，g/L； 7操作性能 7.1 精密度： 批内 CV 0.25%，批间 CV 1.87%。 7.2 准确度： 检测结果的相对不准确度10%。 7.3 灵敏度： 葡萄糖浓度为：10mmo

9、l/L 时，显色吸光度为 0.5580.660。 7.4 可报告范围： 血清与试剂用量之比为 1:100 时，测定上限为 27.8mmol/L。 7.5 特异性： 测量值在给定值的 90%-110范围内。 7.6 干扰： 内源性干扰物溶血为 1000mg/ml、脂血 2000mg/ml、黄疸 30mg/ml、抗坏血酸 80mg/ml 对测试结果 无明显影响。 8参考值 4.166.44mmol/L。 临床意义 血糖(英文名称: glucose)测定试剂盒用于定量测定血清中葡萄糖的含量。 葡萄糖是存在于人体血液中最主要的碳水化合物，葡萄糖浓度的测定常用于内分泌功能的检查。血糖 增高常见于甲状腺机能亢进、糖尿病等；血糖降低常见于胰岛素增多症、胰腺癌等。 附录 A: 参数