贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究.doc

1、本科毕业论文（设计）贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究姓名学号0945253123专业制药工程院系药学院指导老师职称学历副教授学士完成时间2013年4月教务处制安徽新华学院本科毕业论文（设计）独创承诺书本人按照毕业论文（设计）进度计划积极开展实验（调查）研究活动，实事求是地做好实验（调查）记录，所呈交的毕业论文（设计）是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中特别加以标注引用参考文献资料外，论文（设计）中所有数据均为自己研究成果，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的工作已在论文中作了明确说明并表示谢意。毕业论文（设计）作者签名日期

2、安徽新华学院2013届本科毕业论文（设计）I贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究摘要目的对贡菊花和野菊花进行对比鉴别，找到合适的薄层鉴别方法，从化学成分上对贡菊花和野菊花进行鉴别。方法按有关文献方法及改进法分别对贡菊花和野菊花中绿原酸及蒙花苷进行薄层色谱鉴别试验。结果本文中贡菊花和野菊花中绿原酸鉴别方法二和蒙花苷鉴别方法二操作简便、色谱斑点显色清晰、分离效果好。贡菊花和野菊花供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱相应的位置均有相同颜色的荧光斑点，贡菊花的斑点略暗于野菊花的斑点；在与蒙花苷相应的位置亦均有颜色相同的荧光斑点，野菊花的斑点明显亮于贡菊的斑点。结论比较贡菊和野菊花的实验结果，贡菊花和野菊

3、花中绿原酸鉴别方法二和蒙花苷鉴别方法二具有良好的专属性，重现性,更具有可行性，可用于贡菊花和野菊花的薄层色谱鉴别。从色谱图直观分析，贡菊花和野菊花中均含有绿原酸和蒙花苷，但其含量存在差异，本研究内容为贡菊花和野菊花的薄层色谱指纹图谱分析奠定了基础。关键词贡菊花；野菊花；绿原酸；蒙花苷；薄层色谱法安徽新华学院2013届本科毕业论文（设计）IISTUDYONIDENTIFICATIONOFTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUMOFTHINLAYERCHROMATOGRAPHYABSTRACTPURPOSECOMPAREDTOIDENTIFYTHETR

4、IBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUM,ANDFINDTHERIGHTTLCMETHODTOIDENTIFYTHEMFROMTHECHEMICALCOMPOSITIONMETHODMAKINGATLCIDENTIFICATIONTESTONTHECHLOROGENICACIDANDLINARININTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUMACCORDINGTOTHELITERATUREMETHODANDIMPROVEMENTMETHODOUTCOMETHESECONDMETHODTOIDENTIFYCHLORO

5、GENICACIDWITHLINARININTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUMISEASYTOOPERATE,ANDCHROMATOGRAPHICSPOTSISCLEAR,ANDSEPARATIONISGOOD,THETRIBUTECHRYSANTHEMUMSANDWILDCHRYSANTHEMUMSTESTPRODUCTSFORCHROMATOGRAPHY,THECORRESPONDINGPOSITIONINTHECHLOROGENICACIDREFERENCESTANDARDCHROMATOGRAPHICHAVETHESAMECOLORF

6、LUORESCENTSPOTS,THETRIBUTECHRYSANTHEMUMSSPOTSSLIGHTLYDARKERTHANWILDCHRYSANTHEMUMSSPOTSTHECORRESPONDINGPOSITIONINTHELINARINREFERENCESTANDARDCHROMATOGRAPHICHAVETHESAMECOLORFLUORESCENTSPOTS,THEWILDCHRYSANTHEMUMSSPOTISNOTICEABLYBRIGHTERTHANTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMSSPOTSCONCLUSIONCOMPARETHEEXPERIMENTALRES

7、ULTSOFTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUM,THESECONDMETHODTOIDENTIFYCHLOROGENICACIDWITHLINARININTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUMISGOODONSPECIFICITY,REPRODUCIBILITYWHICHCANBEUSEDTOMAKEATLCTOIDENTIFYTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMWITHWILDCHRYSANTHEMUMVISUALANALYSISFROMTHECHROMATOGRAM,THETRIB

8、UTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUMBOTHCONTAINTHECHLOROGENICACIDANDLINARIN,BUTDIFFERINTHEIRCONTENTSTHECONTENTOFTHISSTUDYLAIDTHEFOUNDATIONFORMAKINGATHINLAYERCHROMATOGRAPHICFINGERPRINTANALYSISFORTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMANDWILDCHRYSANTHEMUMKEYWORDSTHETRIBUTECHRYSANTHEMUMWILDCHRYSANTHEMUMCHLOROGENICACID

9、LINARINTHINLAYERCHROMATOGRAPHY目录前言11实验材料211仪器212试药22试验方法221试剂的配制222供试品的制备2221以绿原酸为对照品时供试品溶液的制备2222以蒙花苷为对照品时供试品溶液的制备323对照品溶液的制备3231绿原酸对照品的制备3232蒙花苷对照品的制备324鉴别试验3241贡菊花和野菊花中绿原酸的鉴别3242贡菊花和野菊花中蒙花苷的鉴别43实验结果64讨论741吸附材料742展开系统743显色方法744检识条件845试验温度8综述91菊花的临床应用1011眩晕1012眼疾1013偏头痛1114急慢性咽炎1115溃疡性结肠炎112野菊花的临床应

10、用1221治疗盆腔炎1222预防昏迷患者口臭及口腔炎的发生1223治疗新生儿尿布皮炎1224治疗儿童疱疹性咽峡炎1325预防治疗高血脂症1326慢性支气管炎1327治疗前列腺电切术后急迫性尿失禁133结语14致谢15参考文献161贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究前言贡菊和野菊花都是非常重要的药用植物。贡菊也称“黄山贡菊”、“徽州贡菊”，又称徽菊。中华人民共和国药典2010年版一部菊花品种收载贡菊、滁菊、毫菊和杭菊4种，被称为中国的四大药用菊1。因在古代被作为贡品献给皇帝，故名“贡菊”。产于古徽州，今安徽省黄山市，主产区在黄山歙县金竹村一带。黄山贡菊为菊科植物菊CHRYSANTEMUMMOR

11、IFOLIUMRAMATDE的干燥头状花序,含挥发油、菊甙、氨基酸、黄酮类及绿原酸等多种成分2，具有抗癌抗肿瘤、抑菌抗病毒、抗氧化抗衰老、抗心脑血管疾病、抗凝血及中枢神经作用等3，长期饮用贡菊可以避暑解烦、排毒健身、清净五脏、明目醒脑、益智延年4。野菊花是菊科植物菊花CHRYSANTHEMUMINDICUM的干燥头状花序，在我国大部分地区广泛分布，具有疏风、清热、明目、解毒的功效，主要治疗头痛、眩目赤、心胸烦热、痔疮、肿毒等症。本草纲目有菊，味甘，性寒，散风热，平肝明目。神农本草经认为菊花能“主诸风头眩、肿痛、目欲脱，味甘，性寒，散风热，平肝明目”。近年研究发现，野菊花富含黄酮类、挥发油、萜类

12、、维生素、有机酸类等化学成分，以及硒、锰、镍等微量元素5，而且CA、MG、FE的含量比菊花中的高6。其中野菊花的主要药效成分是黄酮类化合物。药理学研究表明野菊花提取物具有抗菌消炎、抗癌、抗肿瘤、抗病毒、免疫、降血压、保护心血管系统、保肝和神经保护等作用。目前临床多用于治疗各种炎症、病毒性疾病、心血管疾病等，如病毒性肝炎、慢性咽炎、高血压、传染性软疣、前列腺炎等。因此具较好的临床应用价值和潜力7。故对贡菊花和野菊花进行鉴别研究是具有非常重要的意义。而目前药典及有关文献收载的贡菊花和野菊花薄层鉴别方法不够严密完整。为进一步有效控制贡菊花和野菊花的质量标准，本课题将文献中鉴别方法进行改进，采用绿原酸

13、和蒙花苷为对照品，探索薄层色谱的最佳条件。使得贡菊花和野菊花鉴别更加严密、完整、科学，更能体现出贡菊花和野菊花的质量，提高其鉴别标准，同时为其薄层色谱指纹图谱分析提供依据。21实验材料11仪器电子天平（型号AB135S厂家SWITERTAND）超声波清洗仪（型号AS515OA）水浴锅型号HHS2厂家江苏金坛市几金城国胜实验仪器厂紫外光灯（型号ZF2厂家上海安亭电子仪器厂）烘箱（型号GZX9030MBE厂家上海博迅实业有限公司医疗设备厂）吹风机（型号SB80；厂家上海超人电气有限公司）12试药石油醚3060甲醇乙醇稀盐酸甲苯冰醋酸乙酸乙酯丁酮三氯甲烷甲酸三氯化铝（规格均为AR）贡菊花和野菊花来源

14、于宣城百草药业有限公司）绿原酸和蒙花苷纯度98，由安徽中医学院天然药化教研室提供）2实验方法21试剂的配制稀盐酸取盐酸234ML加水稀释至100ML，本液含盐酸951052三氯化铝溶液称取05克三氯化铝溶解到25ML水中即可22供试品的制备221以绿原酸为对照品时供试品溶液的制备1取野菊花1G，剪碎，加石油醚306020ML，超声处理10分钟，弃去石油醚，药渣挥干，加乙酸乙酯50ML及稀盐酸1M1，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ML使溶解，作为供试品溶液。另贡菊花1克同法制成供试品3溶液。222以蒙花苷为对照品时供试品溶液的制备8取野菊花粉末03G，加甲醇15ML，超声处理30

15、分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取贡菊粉末03G，同法制成供试品溶液。23对照品溶液的制备231绿原酸对照品的制备取绿原酸对照品5MG，用乙醇定容在10ML容量瓶中超声溶解即可。232蒙花苷对照品的制备取蒙花苷对照品2MG，用甲醇定容在2ML容量瓶中超声溶解即可。24鉴别试验241贡菊花和野菊花中绿原酸的鉴别方法一1取聚酰胺薄膜一张，在薄膜一端1CM处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取绿原酸对照品溶液点样于点1上，取贡菊花和野菊花供试品溶液分别点样2和3上，各11。配制甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水115112的混合溶液，置于分液漏斗中，振摇，

16、静置，取上层溶液置层析槽中作为展开剂，将点好样的聚酰胺薄膜放进层析槽中展开，等到展开剂上行到距离薄膜上方1CM左右时，拿出，晾干，置紫外光灯365NM下检视。结果如图11。方法二（改进方法一）取聚酰胺薄膜一张，在薄膜一端1CM处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取绿原酸对照品溶液点样于点1上，取贡菊花和野菊花供试品溶液分别点样2和3上，各11。配制甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水115112的混合溶液，置于分液漏斗中，振摇，静4置，取上层溶液置层析槽中作为展开剂，将点好样的聚酰胺薄膜放进层析槽中（不接触展开剂）饱和10分钟后再将薄膜置展开剂中展开，等到展开剂

17、上行到距离薄膜上方1CM左右时，拿出，热风吹干，置紫外光灯365NM下检视。如图12。图11从左到右依次为绿原酸，贡菊花，野菊花图12从左到右依次为绿原酸，贡菊花，野菊花242贡菊花和野菊花中蒙花苷的鉴别方法一8取硅胶G板一块放置烘箱中活化半小时，取出冷却，在板一端1CM处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取蒙花苷对5照品溶液点样于点1上，取野菊花和贡菊供试品溶液分别点样2和3上，各41。以乙酸乙酯丁酮甲酸水（530505）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2三氯化铝水溶液，热风吹干，置紫外光灯365NM下检视。如图13。方法二取硅胶G板一块放置烘箱中活化半小

18、时，取出冷却，在板一端1CM处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取蒙花苷对照品溶液点样于点1上，取贡菊花和野菊花供试品溶液分别点样2和3上，各31。以乙酸乙酯丙酮甲酸水（82105）为展开剂，将点好样的硅胶G板放进层析槽中（不接触展开剂）饱和10分钟后再将板置展开剂中展开，展开，取出，晾干，将其放入2三氯化铝水溶液中浸润，迅速取出，热风吹数分钟，置紫外光灯365NM下检视。如图14。图13从左到右依次为蒙花苷，野菊花，贡菊花6图14从左到右依次为蒙花苷，贡菊花，野菊花3实验结果以上试验方法，贡菊花和野菊花供试品色谱中，在与绿原酸和蒙花苷对照品相应的位置上，都

19、能显示相同颜色的荧光斑点（365NM）。方法一斑点模糊，有拖尾现象，分离度不好，薄层图谱所显示的斑点少，而方法二通过改进后试验，结果分离效果好，斑点清晰，且分离的斑点较多，RF值适中，薄层色谱所提供的信息也更加丰富，更有利于对贡菊花和野菊花进行分析研究。由图谱还可观察到贡菊花和野菊花鉴别绿原酸时，其两者斑点近乎相同；而鉴别蒙花苷时，野菊花的斑点亮而明显，贡菊花的斑点模糊不清。通过上述实验薄层色谱图及讨论可知，方法一参照了中国药典及有关文献中菊花和野菊花薄层色谱鉴别方法稍作改进试验，结果薄层图谱所显示的斑点少，模糊，有拖尾现象，分离度不好。方法二较方法一斑点分离效果较好，斑点也比较清晰圆整，且分

20、离的斑点较多，RF值较适中，故方法二可作为贡菊花和野菊花薄层色谱鉴别的较优选择。经过对方法二多次薄层鉴别试验，发现色谱图中特征斑点RF值差异范围005，但试验组患儿口腔疱疹消退人数较对照组明显增多,消退时间较对照组明显缩短，差别有统计学意义P005。两组患儿均未见药物性皮疹、过敏性休克、腹泻、呕吐等严重不良反应。故野菊花注射液超声雾化对促进疱疹性咽峡炎患儿口腔疱疹消退效果优于传统的三联超声雾化，且无副作用，患儿依从性好，有一定的临床推广应用价值。25预防治疗高血脂症24野菊花提取物具有调节血脂代谢的作用，对高脂血症具有很好的预防和治疗作用，作用机制与其提高机体抗氧化能力有关。26慢性支气管炎2

21、5野菊花提取物具有降低脂质过氧化反应，减轻氧自由基损伤，保护肺组织的作用。黄亚林实验证明调节免疫、降低脂质过氧化反应，改善肺组织的病理损伤均为野菊花提取物减轻支气管炎炎症效应的机制。27治疗前列腺电切术后急迫性尿失禁26曹爱生将前列腺电切术后急迫性尿失禁患者108例随机分为对照组和治疗组，对照组口服盐酸黄酯哌酮，治疗组使用野菊花栓纳肛，联合膀胱训练、盆底肌锻炼，214周为1个疗程。观察治疗前后尿失禁问卷表简表评分变化情况。认为野菊花栓联合康复训练治疗前列腺电切术后急迫性尿失禁的疗效显著，并且安全有效。3结语现代医学研究证明菊花可镇静、清热解毒、抗多种病菌及流感病毒,可治疗眩晕、眼疾、偏头痛、溃

22、疡性结肠炎、急慢性咽炎等。野菊花主用于治疗毒疮疥、咽喉肿痛、盆腔炎、慢性前列腺炎、慢性支气管炎、高血脂症、儿童疱疹性咽峡炎、新生儿尿布皮炎，还可用于预防昏迷患者口臭及口腔炎的发生等，其作用以清热解毒见长。由此可见，二者虽同为菊科，临床应用却有所差异，且野菊花长期应用还可损伤胃气，正如景焕牧竖闲谈云“真菊延龄，野菊泄人”。所以菊花与野菊花在临床上不应混淆，不可相互替代。15致谢经过几个月的查阅文献，实验，及写作，终于完成了贡菊花和野菊花薄层色谱鉴别方法研究这篇论文。在此，衷心地感谢我的导师刘金旗，他的严谨治学、博学和扎实的学术功底以及认真工作的精神让我无比敬佩，本论文是在他精心指导和无私关怀下完

23、成的，他严谨的治学态度和人格魅力将会对我以后的生活、学习和工作产生深远的影响。实习的过程也使我意识到了理论结合实践的重要性，并且要有不怕困难的精神，感谢宣城百草药业有限公司为我提供实验条件，感谢徐家龙总经理对我的帮助，感谢陈传松副总的技术指导。在此谢谢母校的各位老师这几年的辛勤指导和教育，才使我养成了一种良好的生活习惯和学习态度，才使我在学习，实习和以后工作的过程中拥有一种坚强的动力去勇敢的克服种种困难，一步步向自己的人生目标奋进。最后向精心审阅本论文的各位专家和老师表示最诚挚的感谢。16参考文献1国家药典委员会中华人民共和国药典一部S北京中国医药科技出版社，20102922徐文斌,郭巧生，李

24、彦农，等药用菊花不同栽培类型内在质量的研究J中国中药杂志，2005,3021L6453张晓媛，段丽华，赵丁菊花化学成分及药理作用的研究J时珍国医国药，2008,19,（7）17034张学武，吴季秋发展黄山贡菊生产的策略研究J安徽农学通报，2008,14（13）5李青杰野菊花的化学成分研究J临床合理用药，2011，4（9A）65666吴钉红，杨立伟，苏薇薇野菊花化学成分及药理研究进展J中药材，2009，2721421447陈传千，沈艳平，屈跃丹，等野菊花提取物药理作用的研究进展J吉林医药学院学报,2010,3131751788曾聪彦，胡玉良，杨虹玲槐花颗粒中野菊花的薄层色谱鉴别研究J中国中医药咨

25、讯,2012,4（4）46910于艳，时维静，邓家胜，等菊花中7种化合物HPLC检测方法的建立J安徽科技学院学报，2012，2654311郑芳吴，潘超美，赖珍珍，等野菊花种子发芽特性的研究J中药材，2012，35335135412张晓嫒，段立华，赵丁菊花化学成分及药理作用的研究J时珍国医国药，2008，1971702170413李青杰野菊花的化学成分研究J临床合理用药,2011,49A6514江琳菊花钩藤饮配合西药治疗高血压病眩晕48例J安徽中医临床杂志,1997,9630515王衍海加味菊花承气汤治疗天行赤眼J河南中医,1998,1823016董锡安,于叔珍,王金芳菊花止痛汤治疗偏头痛96例

26、J吉林中医药,1998,23217侯瑞田菊花方治疗急慢性咽炎J山东中医杂志,1995,14527718林静,秦云才,张伟菊花煎剂对溃疡性结肠炎的治疗效果J前卫医药杂志,1998,15531319王兰翠妇科千金胶囊联合野菊花栓治疗慢性盆腔炎40例J传统医药,2011,2067920边灵杰野菊花栓的临床应用J中医临床研究,2012,4178921李朝霞，罗雪琴，黄秀玲野菊花液预防昏迷患者口臭及口腔炎效果观察J护理学杂志,2012,271719201722袁发凤野菊花治疗新生儿尿布皮炎疗效观察与护理J中外医疗，药物与临床,2010,1311723付圆野菊花注射液超声雾化治疗儿童疱疹性咽峡炎的试验研究J当代医学,2012,83114514624陈传千,屈跃丹，单广胜,等野菊花提取物调节血脂作用的研究J吉林医药学院学报，2010,31（6）32132325黄亚林野菊花提取物对慢性支气管炎大鼠免疫功能、自由基水平及肺组织病理形态学的影响J中国社区医师医学专业,2012,145626曹爱生野菊花栓联合康复训练治疗前列腺电切术后急迫性尿失禁的疗效观察J河北医药,2010,32213006300718封底