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细胞冻存复苏及腹水制备LM.ppt

一腹水制备组的主要工作,我们主要制备的腹水有三类:1,研发性:即小样,要求注射两只小鼠,至少5ml腹水。2,中样:从小样里面筛选出来的细胞株,一般要求5只。3,生产性:供应生产用的腹水。腹水制备的原则:保质保量!对我们的要求:必须要有高度的责任心。,目前,大量生产单抗的方法主要有两种:1,体外培养法,从上清中获取单克隆抗体(1)悬浮培养法:和常规静置培养相比,增加了细胞生长空间,使单位体积内细胞数量增多,从而增加抗体量。(2)固相培养法:单层培养和悬浮培养的结合,主要用于贴壁性较强的杂交瘤细胞,以小的固体颗粒作为细胞生长的载体,细胞固定在载体表面生长。体外培养法优点:工艺简单,易于控制,目前上市的单抗多用此法。体外培养法缺点:抗体浓度低,一般含量为200500g左右。,二,为什么要制备腹水?,2.动物体内诱导法(1)实体瘤法:将对数期细胞按(13)107个/ml接种于小鼠背部皮下,多点注射,待肿瘤达到一定大小后可采血获得抗体,一般110mg/ml,缺点是采血量有限。(2)腹水制备法:腹水抗体的浓度达25mg/ml,一般可以抽取5ml左右腹水。该法优点:操作简单、经济,是一般

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