1,原位杂交实验方法,2,mRNA 原位杂交前实验准备,1,无RNA酶水的处理 2,无RNA酶载玻片的处理 3,标本的防RNA酶的固定 4,探针的稀释和保存 5,DNA探针需变性,3,原位杂交溶液的配制,1,预杂交液和杂交液的配制 2,20Xssc, 2Xssc, 0.2Xssc缓冲液的配制 3,0.1mol PBS缓冲液的配制 4,0.1mol 枸橼酸缓冲液的配制 5,0.1mol TBS缓冲液的配制 6,复合消化液的配制 7,组织细胞打孔液的配制 8,杂交漂洗液 9,过氧化氢封闭液,4,探针设计方案,1,探针名称 : 2,适用种属: 3,标记方式:3DIG 5FAM 4,模板序列: 5,探针序列:,5,探针杂交原理,1,组织细胞的通透 2,探针长度 3 , 探针浓度和杂交时间 4,杂交中的Tm值和杂交温度 5,杂交严格度 6,预杂交原理 7,杂交后处理,6,A-石蜡切片mRNA原位杂交步骤,一,过氧化物酶显色系统 二,碱性磷酸酶显色系统 三,荧光显色方法,7,B-冰冻切片mRNA原位杂交步骤,一,过氧化物酶显色系统 二,碱性磷酸酶显色系统 三,荧光显色方法,8,C-细胞爬片或涂片