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高级生物化学与分子生物学综合实验报告一、 实验目的以特定酶基因在大肠杆菌中的克隆、 表达和纯化为主线， 进行基因操作、 蛋白质表达、亲和层析纯化等的训练，通过集中训练熟练生物化学和分子生物学实验操作，为独立开展研究生课题研究奠定实验基础。二、 实验原理利用基因重组技术，将目的基因与载体质粒 DNA 在体外进行重组，然后把这种重组DNA 转化到感受态细胞， 通过一定的诱导条件， 使之在受体细胞内增值表达相应的目标蛋白。为了得到相应的目标蛋白，需要通过亲和层析等手段纯化目标蛋白。三、 实验内容一）内容一：重组质粒的分离、鉴定与转化实验 1. 重组质粒的分离、纯化及检测实验 2. 质粒的酶切及琼脂糖凝胶电泳回收实验 3. 感受态细胞的制备、连接与转化二）内容二：重组蛋白在大肠杆菌中的表达实验 4. 细菌的大量培养及重组蛋白的诱导三）内容三：重组蛋白的提取、纯化与鉴定实验 5. 细菌的收集、破碎与目标蛋白的纯化实验 6.目标蛋白的 SDS-PAGE 鉴定实验 1质粒 DNA 的分离
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