.生物素标记蛋白操作方法下面的操作方法可以使约35分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。1、 溶解210mg蛋白于1ml的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）蛋白质的毫摩尔数。2、 在打开之前，平衡生物素至室温。加2mg Sulfo-NHS-Biotin于100ul超纯水中，加入足够量浓度的生物素，一般对于10mg/ml蛋白来说超过12倍分子数，对于2mg/ml蛋白溶液应超过20倍，或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。（见下表）蛋白质蛋白分子量蛋白含量mg/ml溶液内所含的蛋白毫摩尔数需加入生物素的毫摩尔数生物素大约加入量需加入生物素溶液的体积IgG150,000106.710-58.010-40.4mg20ulIgG150,00021.310-5
