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吸收光检测原理及应用.doc

.吸收光检测原理及应用1.检测原理a)布格-朗伯-比尔定律,是光吸收的基本定律,适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质,包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。比尔-朗伯定律是吸光光度法、比色分析法和光电比色法的定量基础。b)朗伯-比尔定律: OD = C b 光吸收值(OD)与浓度成正比c)比尔朗伯定律数学表达式: A=lg(1/T)=KbcA为吸光度,T为透射比,是透射光强度比上入射光强度 K为摩尔吸收系数.它与吸收物质的性质及入射光的波长有关. c为吸光物质的浓度 b为吸收层厚度d)物理意义是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比。2.吸收光的应用a)生物大分子定量:基于260nm、280吸收光检测-核酸定量i. 核酸的最高吸收峰的吸收波长 260 nm。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的性质。最佳测量值的范围为 0.1 至 1.0。每种核酸的分子构成不一

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