白蔹乙酸乙酯提取物抗菌作用研究[开题报告].doc

1、毕业论文 开题报告 生物工程 白蔹乙酸乙酯提取物抗菌作用研究 一、选题的背景、意义 白蔹（ Ampelopsis japonica）为葡萄科植物自蔹 Ampelopsis japonica（ Thunb） Makino）的干燥块根，又名白根、五爪藤、山地瓜、猫儿卵 ,首载于神农本草经，性微寒，味苦，归为下品。具有清热解毒、消肿散结、生肌止痛之功能。 白蔹也称山地瓜、猫儿卵、鹅抱蛋、见肿消、穿山老鼠，为葡萄科、蛇葡萄属 ( 也称白蔹属 ) 多年生半木质藤本攀援植物，植株具粗壮的肉质块茎，呈纺锤形或长卵形。白蔹在全国广泛 分布，华东、华北、中南、辽宁、吉林、贵州、广西等地都有它的踪影。白蔹具有清热

2、解毒、消肿散结之功能。用于痈肿疮疡、瘰疬、烫伤、扭挫伤；外用于痈、疖、蜂窝组织炎、淋巴结炎等。药理实验研究表明，白蔹的主要活性为抗菌性，此外，白蔹因其块根很奇特， 具有很好的观赏性， 因此也是一种很难得的盆栽植物。现代医学还证明，白蔹有抑制黑色素形成等作用，具有白嫩肌肤的作用，已作为美容护肤品的添加剂使用。 本项目的主要任务是为研究药用植物白蔹的抗菌活性，筛选具有抗菌效果较好的提取部位。采用虑纸片法及琼脂稀释法进行抑菌试验，采用试管 倍比稀释法测定白蔹提取物最低抑菌浓度，评价其体外抗菌活性。 本项目的主要目标是测试白蔹乙酸乙酯提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌性能的基础上，建立定性及定量的

3、测试方法，得到白蔹乙酸乙酯提取物抗菌性能的具体数据，为开发功能性中药材提供理论和实验基础 二、相关研究的最新成果及动态 中药白蔹含有多种化学物质，主要有多酚类、有机酸类、三萜、甾醇及其苷类等。白蔹的药理活性主要包括抗菌、抗肿瘤、免疫调节活性、兴奋作用等。抗菌是白蔹的主要活性，目前研究的较多。白蔹含有大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、没食子酸等多 种抗细菌和真菌成分，与其临床应用相一致。白蔹的水浸液对同心性毛癣菌、奥杜盎氏小芽胞癣菌、腹股沟和红色表皮癣菌等真菌有不同程度的抑制作用。水煎剂用平板稀释法对金黄色葡萄球菌有抑制作用。不同极性提取物抗菌能力差异未见报道，基于此进行本项目研究。 白蔹的化

4、学成分： 从其乙酸乙酯提取物中分离得到了 8 个化合物 ,利用理化常数和波谱学方法 (1H-NMR、 13C-NMR) 鉴定了它们的结构 ,分别为：没食子酸 (1) 、原儿茶酸 (2) 、龙胆酸 (3) 、白藜芦醇 (4) 、大黄素 (5) 、羽扇豆醇 (6) 、 谷甾醇 (7) 、 胡萝卜苷 (8) 。化合物 2 和 3为从该植物中首次分离得到。 白蔹的药理作用： 抗菌活性，抗菌是白蔹的主要活性，目前研究的较多。白蔹含有大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、没食子酸等多种抗细菌和真菌成分，与其临床应用相一致。白蔹的水浸液对同心性毛癣菌、奥杜盎氏小芽胞癣菌、腹股沟和红色表皮癣菌等真菌有不同程度的

5、抑制作用。水煎剂用平板稀释法对金黄色葡萄球菌有抑制作用。 抗肿瘤，许多中药乙醇提取物均有高度酪氨酸酶抑制作用，能阻截皮肤中黑色素的形成。唐海谊等发现，白蔹水提物对酪氨酸酶有很强的抑制作用， IC50为 0.35 mg/mL。但白蔹的 80%乙醇提取物抑制效果较差，其 IC50 比水提取物的数值高 5.923.8倍。 免疫调节活性，动物实验表明， 3种不同剂量的白蔹醇提物（ 5， 10， 20 g/kg）对小鼠外周血淋巴细胞 ANAE 阳性率、 T 细胞增殖能力及巨噬细胞吞噬功能均有促进作用，并随剂量增加作用增强，量效呈正相关。作者认为，白蔹提取物可增强小鼠 T淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能，表明

6、白蔹的抗菌作用与其免疫活性有关，临床用于抗感染治疗可能具有直接抗菌和调节集体免疫功能的双重机制。 白蔹的临床作用： 治疗外科炎症 ，将白蔹块根去 皮研末，取 3 两 (用量根据炎症面积加减 )以沸水搅拌成团后，加 75 95%酒精调成稠糊状，外敷患处，每日 1次，以愈为度。对于疖、痈、蜂窝织炎、淋巴结炎、各种炎性肿块等急性感染的初期，有显著疗效。共观察 3l 例，除个别病情危急、全身反应严重加用抗菌素外，一般不用其他药物。用药后疼痛减轻，炎症很快吸收或局限。一般经治 2 3天可愈。 治疗扭挫伤，取见肿消 2个，食盐适量，捣烂如泥外敷。共治 80 例， 66例有效。有的经治 4天就肿消痛减而愈。

7、 治疗细菌性痢疾，白蔹块根晒干或焙干 , 研成细末 , 装入胶囊 , 每粒 .g, 每次粒 , 日服次急性菌痢天为疗程 , 慢性菌痢天为疗程治疗例 , 急性者例 , 痊愈例 , 好转例 , 无效例；慢性者例 , 痊愈 例 , 好转例 , 无效例 治疗癌性发热，葛根、鳖甲各 30 g，白蔹、青蒿各 15 g。水煎服，每日 1剂，分 2次温服。治疗癌性发热 16例，治愈率 87.5%。 治疗支气管扩张咯血，白毛夏枯草 20 g，白芍 12 g，白及 15 g，白蔹、白薇各 9 g。每天 1剂，加水 550 mL，煎至 250 mL，渣加水 350 mL，煎至 150 mL，分 2次饱腹 服。治疗支

8、气管扩张咯血 36例，显效 24例，有效 11例，无效 1例。总有效率 97. 2%。 治疗手足皲裂，白芨 15 g，白蔹 30 g，大黄 50 g。炒黄后共研末，用适量的蜂蜜将药末调成糊状，涂抹于患处，每日 3次。连涂 10 d为一个疗程。 三、课题的研究内容及拟采取的研究方法（技术路线）、难点及预期达到的目标 3.1 研究内容 对白蔹的乙酸乙酯提取物的抗菌活性进行定性及定量测试。 3.2 研究方法 取市购中药白蔹 50g, 粉碎，以乙醇回流提取。提取物分别以乙酸乙酯回流提取残渣晾干，水煎，水煎液浓缩回收，备用 。 定性测量： 用纸片扩散法，以金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus

9、aureus）、枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis）、大肠杆菌（ Escherichia coli）为测试菌株，将乙酸乙酯萃取物和水提物的浸膏分别配成 50 mg/mL 二甲基亚砜溶液，然后取 20 L各液溶于滤纸片（ =0.6cm）上，使其充分吸收，略微风干后，平放于含有测试菌的培养皿中，各内生真菌对 3 种测试菌分别作 3个重复。用二甲基亚砜作空白对照。将制好后的培养皿在 37 恒温培养 1 2d 后观察，测其抑菌圈的大小。 定量测 量：取各化合物样品液配制成不同的浓度梯度 100 g/ml， 50 g/ml，25 g/ml， 12.5 g/ml， 6.25 g/ml， 3

10、.125 g/ml。 把各个菌种用营养琼脂活化，挑取少许放入 10 ml无菌生理盐水中，混合均匀配成含菌 108cfu/ml的各种菌悬液。 3.2.1 最小抑菌浓度 (MIC)的测定 把以上制备的各种菌悬液吸取 0. lml，分别加入到各浓度梯度的化合物溶液中，充分摇匀， 37 培养 24h，取出观察结果，如管底有沉淀，振荡后液体混浊者为阳性管，管内液体澄清，肉眼未见有细菌生长者为阴性管， 找出最低药物浓度的阴性管，则为该种药物的最小抑菌浓度。 3.2.2 抑菌定量实验 取配好的不同测试菌株的菌悬液两份，分别加入 1ml的浓度为 30 g/ml样液和 1ml的丙酮（对照），混匀后在 37 培养

11、箱中培养 1824h，然后从中分别吸取 1ml 进行浓度梯度稀释，将 10-5、 10-6、 10-7、 10-8 的梯度液在营养琼脂培养基上进行涂布培养 37 ， 24h，记录菌落数，每样重复 3次。 3.3. 预期目标 通过活性筛选到 1-2个活性较好的提取部位，为后期活性成分的研究打下基础。 四、论文详细工作进度和安排 第二学 期 第 2 周： 完成开题报告； 第 3 4 周： 实验室整理 ,准备药品和仪器； 第 5 -10 周： 抗菌活性定性测试 第 11-12周： 抗菌活性定量测试 第 13-14周： 整理数据；撰写毕业论文； 第 15 周： 答辩 五、主要参考文献 1 兑宝峰 .

12、块茎类多肉植物 白蔹 J. 养花门诊， 2008， 2： 86. 2 郭丽冰，卢雁，陈水平 . 白蔹化学成分的研究 J. 广东药学院学报， 1996，12（ 3）： 145-147. 3 邹济高，金蓉鸾，何宏贤 . 白蔹化学成分的研究 J. 中药材， 2000， 23（ 2）：91-93. 4 闵凡印，周一鸿，宋学立，等 . 白蔹炒制前后的体外抗菌作用 J. 中国中药杂志， 1995， 20（ 12）： 728-730 5 唐海谊，何冠邦，周喜林 . 美白中药之水及乙醇提取物对酪氨酸酶抑制功效之比较 J. 中国药学杂志， 2005， 40（ 5）： 342-343. 6 俞琦，蔡琨，田维毅 .

13、 白蔹醇提物免疫活性的初步研究 . 贵阳中医学院学报 2005； 27（ 2）： 20. 7赵翠兰，郭桂森， 李开源，等 . 白蔹部分药理作用实验研究 J. 云南中医中药杂志 1996， 17（ 3）： 55-58. 8 杜慧娟，王伯初，米鹏程，冯薇 . 要用植物内生菌的分离及抗菌活性的初步研究 J. 氨基酸和生物资源， 2008， 30（ 1）： 61-64. 9 李洪娟，张 蕾，王术光 .白蔹的药理作用及临床应用 . 食品与药品 .2007,9 10 俞琦，蔡琨，田维毅 . 白蔹醇提物免疫活性的初步研究 . 贵阳中医学院学报 2005； 27（ 2）： 20. 11 闵凡印，周一鸿，宋学立

14、，等 . 白蔹炒制前后的体外抗 菌作用 J. 中国中药杂志， 1995， 20（ 12）： 728-730 12 赵翠兰，郭桂森，李开源，等 . 白蔹部分药理作用实验研究 J. 云南中医中药杂志 ， 1996， 17（ 3）： 55-58. 13 唐海谊，何冠邦，周喜林 . 美白中药之水及乙醇提取物对酪氨酸酶抑制功效之比较 J. 中国药学杂志， 2005， 40（ 5）： 342-343. 14 唐海谊，何冠邦，周喜林 . 美白中药之水及乙醇提取物对酪氨酸酶抑制功效之比较 J. 中国药学杂志， 2005， 40（ 5）： 342-343. 15 俞文 胜 , 陈新民 , 杨磊 , 等 . 白蔹多酚类化学成分的研究（） J. 中药材， 1995， 18（ 6）： 297-301.