小鼠白细胞介素6IL-6酶联免疫检测.DOC

1、AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail:1小鼠白细胞介素 6（IL-6）酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE90247Mu使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测小鼠白细胞介素 6（IL-6） ，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用 途：用于小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素 6（IL-6）测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中小鼠白细胞介素 6（IL-6）水平。向预先包被了小鼠白细胞介素 6（IL-6）克隆抗体的酶标孔中加入

2、小鼠白细胞介素 6（IL-6） ，温育；温育后，加入生物素标记的抗 IL-6抗体。再与链霉亲和素-HRP 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物 A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中小鼠白细胞介素 6（IL-6）的浓度呈正相关。试剂盒组成 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片（48） 2 片（96）密封袋 1 个 1 个酶标包被板 148 196 2-8保存标准品：2400 ng/L 0.5ml1 瓶 0.5ml1 瓶 2-8保存标准品稀释液 3ml1 瓶 6ml1 瓶 2-8保存链霉亲和

3、素-HRP 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存生物素标记的抗IL-6抗体 0.5ml1 瓶 1 ml1 瓶 2-8保存AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail:2显色剂 A 液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存显色剂 B 液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存终止液 3ml1 瓶 6ml1 瓶 2-8保存浓缩洗涤液 （20ml20 倍）1 瓶 （20ml30 倍）1 瓶 2-8保存需要而未提供的试剂和器材1 37恒温箱。2 标准规格酶标仪。3 精密移液器及一次性吸头4 蒸馏水，5 一

4、次性试管6 吸水纸注意事项1 从 2-8取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.4 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6 底物 B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+8

5、6-021-55785279 E-mail:3下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml注入孔内，浸泡 1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求 1不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融。操作程序1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)1200 ng/L 5号标准品 120l 的原倍标准品加入 120l 标准

6、品稀释液600 ng/L 4号标准品 120l 的 5号标准品加入 120l 标准品稀释液300 ng/L 3号标准品 120l 的 4号标准品加入 120l 标准品稀释液150 ng/L 2号标准品 120l 的 3号标准品加入 120l 标准品稀释液75 ng/L 1号标准品 120l 的 2号标准品加入 120l 标准品稀释液2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail:

7、43. 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗 IL-6抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂 A 2) Standard wells: add Standard 50l and Streptavidin-HRP 50l; 3) testing Sample wells: add sample 40l,then add anti IL-6-antibody 10l , Streptavidin-HRP 50l. closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 60 min at 37.4.Configurate liq

8、uid: 30-fold(or 20-fold) wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail:85.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, re

9、peat 5 times, dry by pat.6.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 377.Stop the reaction：Add Stop Solution50l to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).8.assay：take blank well as zero , Read ab

10、sorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 10min.9. Calculate of resultSteps descriptionStandard, Sample diluentAdd Standard, Sample diluent, Biotinylated and HRP ,incubate for 60 min at 37.Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 15 min at 37.Add Stopp SolutionRead absorbance at 450nm within 10 mincalculateAMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail:9Assay range30ng/L1200 ng/L.Storage and validity1Storage： 2-8.2validity： six months.