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MTT法检测细胞活性 【实验目的】了解体外筛选抗肿瘤药物(细胞毒)的方法,掌握酶标仪的使用方法及MTT实验的原理。 【实验原理】MTT是3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐的简称,它是一种能接受氢原子的染料,活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中,而死亡细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶物。在一定的细胞数范围内,MTT结晶物的量与细胞数成正比,故用酶联免疫检测仪在490/570nm波长下测定其吸光值,可间接反映活细胞的数量。体外培养的肿瘤细胞具有无限增殖的功能,在培养过程中给予一定浓度的海洋药物,用MTT法可以明确这些药物是否可以抑制细胞增殖,并比较不同药物抑制作用的强弱。 【实验器材与药品】人胃癌细胞。细胞用1640培养基(加10%胎牛血清,100 U/ml青霉素和100mg/ml链霉素)在37 、5CO2饱和水汽CO2培养箱中常规培养,细胞传代以0.25胰酶消化、酶标仪,96孔细胞培养板,加样枪、DMSO,MTT(5mg/ml)【实验方法与步骤】
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