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RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南6页.doc

RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂:氯仿,异丙醇,75乙醇,无RNase的水或0.5SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)。操作步骤:1. 匀浆处理 a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.,大约100mg 叶片使用1 ml Trizol. b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%. c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞,每5-10106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。加Trizol前不要洗涤细胞,以免降解mRNA。一些酵母和细

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