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台盼蓝染色实验原理和步骤(共2页).docx

台盼蓝染色实验原理台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960.82,可溶于水(10mg/ml)。实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。实验步骤:1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4保存。使用时用PBS稀释至0.4 %。2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。3、染色:细胞悬液与0.4%台

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