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HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理(共1页).doc

HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理HAT培养基是指含有次黄嘌呤(hypoxantin)、氨基蝶呤(aminopterin)和胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidin)三种物质的细胞培养基。1.细胞内合成DNA原料的核苷酸形成的途径(1)起始合成途径(de novo pathway):由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中,叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。(2)中间合成途径(salvage pa-thway):利用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸。2.利用HAT培养基筛选杂交瘤细胞(1)经融合后细胞将以多种形式出现:融合的脾细胞瘤细胞、融合的脾细胞脾细胞、融合的瘤细胞瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中存活仅57天,无需特别筛选,细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。(2)融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株(例如嘌呤的中间合成途径缺失株

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