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WB实验步骤详细总结材料8页.doc

蛋白提取(所有操作在冰上进行)1. 裂解1) 配裂解液:PMSF=100:1,(裂解液和PMSF在-20保存,提前一天4解冻)取2ml裂解液,加20l PMSF混匀2) 称取30mg组织,切碎放入标记好的AP管中,加入600l上述1中液体(加入液体与组织比例为20:1),冰上静置10min2. 匀浆先用超纯水润洗一下匀浆机的钢头,(同时进行几组匀浆时,组间也要润洗钢头)在匀浆机(在生化室)上每次匀浆10s,两次(间隔5s),冰上静置30min3. 离心(在基础4楼416室)1) 自带1ml枪以及蓝枪头和黄枪头,三个1.5的离心管(,两个标记,加少量超纯水,号是为了离心平衡,对称放置)2) 将离心机预冷至4为止,以120010r/min离心15min3) 用移液枪将上层清液取出放入号管中4. 变性(上样缓冲液:样品=4:1)将样品转移至23个0.5mlAP管中加上样缓冲液,100变性10min仪器屏幕:S500:10S5100000:10时间(时:

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